导读:本文包含了克隆法论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:干细胞,靶向,基因,免疫,细胞,内皮,孢子。
克隆法论文文献综述
王效,徐宏光,肖良,刘晨,金中行[1]（2018）在《两种不同单克隆法筛选大鼠腰椎终板软骨干细胞能力的比较》一文中研究指出目的比较两种不同的单克隆方法获取大鼠腰椎终板软骨干细胞筛选能力。方法获取大鼠腰椎终板软骨组织后,Ⅱ型胶原酶消化法获取原代细胞(P0),将P0代细胞按照100个/cm~2、200个/cm~2、300个/cm~2的密度接种于10 cm培养皿上,为P0组;将原代细胞先接种于T25培养瓶,待其贴壁融合30%~40%时再消化,按照100个/cm~2、200个/cm~2、300个/cm2的密度接种于10 cm培养皿,为P1组。倒置相差显微镜下观察两组细胞集落形成速度及生长形态;0.1%结晶紫染色,计算两组的集落形成百分比;使用干细胞表面标记物CD44和CD90,流式细胞仪检测两组获取干细胞的纯度。结果将两组的细胞按上述密度进行培养后,P1组细胞集落形成时间早于P0组,且集落数目也较P0组多,但镜下观察其细胞形态及集落形态不如P0组;P1组的集落形成数目远大于P0组,两组按照100个/cm~2的密度接种时,其细胞集落形成百分比最大;流式细胞仪检测,对于CD44,P0组表达率(92.17±1.26)%,P1组为(74.37±2.63)%;对于CD90,P0组表达率(95.30±3.42%),P1组为(90.87±1.42%)。结论两种不同的单克隆方法都可以筛选出大鼠腰椎终板软骨干细胞,但是使用原代细胞直接接种时,得到的干细胞纯度更高。(本文来源于《齐齐哈尔医学院学报》期刊2018年03期）
姜睿,张范波[2]（2017）在《改良免疫磁珠结合克隆法培养大鼠阴茎海绵体内皮细胞》一文中研究指出目的探索大鼠阴茎海绵体内皮细胞(CCECs)分离、纯化和培养的方法,观察其生长特性,并为勃起功能障碍的研究提供种子细胞。方法采用0.1%弹性蛋白酶消化大鼠阴茎海绵体组织,分离原代大鼠CCECs,然后采用免疫磁珠纯化,进一步扩增,利用克隆环筛选出单克隆CCECs,并观察其形态及增殖特性,免疫荧光染色鉴定CCECs血管假性血友病因子(von willebrand factor,VWF)、免疫组化染色鉴定CCECs CD31分子,流式细胞仪测定CCECs纯度,CCK-8法(本文来源于《第十二次全国中西医结合男科学术大会暨全国中西医结合男科诊疗技术研修班暨2017上海市中西医结合学会上海市中医药学会泌尿男科专业委员会学术年会讲义论文资料汇编》期刊2017-09-01）
相微微,王建武[3]（2015）在《小麦HMW-GS基因的定向缺失亚克隆法解析》一文中研究指出针对小麦中HMW-GS基因克隆的方法——定向缺失亚克隆进行了详细的解析,对各个步骤应注意的事项进行了归纳总结,为小麦中HMW-GS基因的克隆提供参考意见。(本文来源于《农业与技术》期刊2015年07期）
封艳,牛巧丽,尹宏斌,钟良军,赵今[4]（2014）在《有限稀释克隆法培养分离人牙周膜干细胞实验研究》一文中研究指出目的探讨有限稀释克隆法培养分离人牙周膜干细胞株的实验方法,并对其生物学特性进行初步研究。方法采用有限稀释克隆法对人牙周膜细胞逐步分离筛选,观察分离出的人牙周膜干细胞形态及克隆形成情况,并对其细胞周期、STRO-1、CD146等标志蛋白的表达进行检测,检测其体外诱导成骨的能力。结果通过有限稀释法获得人牙周膜干细胞克隆具有成体干细胞的形态特征;细胞周期分析呈慢周期性;免疫细胞化学染色证实STRO-1、CD146及Vimentin均为阳性染色,矿化诱导证实该细胞可以表达多种骨蛋白标记物。结论采用有限稀释克隆法分离纯化可以获得成体干细胞所具有的细胞周期、表型及骨向分化能力等特点的牙周膜干细胞株。(本文来源于《新疆医科大学学报》期刊2014年08期）
中国水产科学研究院[5]（2014）在《“配子体克隆法培育巨藻幼苗及养殖示范”通过现场验收》一文中研究指出近日，中国水产科学研究院黄海水产研究所邀请山东省海水养殖研究所、中国科学院海洋研究所、中国海洋大学、大连海洋大学和大连新碧龙海产有限公司的专家，在大连龙王塘对黄海所完成的“配子体克隆法繁育巨藻幼苗及养殖示范”进行了现场验收。 巨藻幼苗是利用配子(本文来源于《中国渔业报》期刊2014-01-13）
梁龙,杨华,杨永林,石国庆,刘守仁[6]（2013）在《应用“酶切连接”克隆法构建TALEs》一文中研究指出TALEs是在植物病原菌黄单胞杆菌(Xanthomonas)上发现的一类天然的DNA结合蛋白,其重复域已经成为模块化构建单元,用于人工DNA结合蛋白的构建。人工TALEs能够用于多种基因工程操作,包括转录调节和基因组编辑。为了在常规分子生物学实验室稳定、经济地构建TALE-TFs和TALENs,本文采用TALE Toolbox试剂盒,运用PCR扩增和"酶切-连接"克隆法构建人工TALEs。结果表明,该构建策略是一种快速高效构建TALEs的方法,能够在1周内完成TALEs构建。(本文来源于《石河子大学学报(自然科学版)》期刊2013年03期）
梁龙,杨华,杨永林,刘守仁,皮文辉[7]（2013）在《“Golden Gate”克隆法构建靶向载体》一文中研究指出在同一反应体系内,利用IIS型限制性核酸内切酶和DNA连接酶进行"Golden Gate"克隆方法,将多个目的基因片段按照设定的顺序连接,实现多基因片段一步"无缝"连接。为编辑小鼠β酪蛋白基因位点,利用"Golden Gate"克隆法,构建了小鼠β酪蛋白基因位点同源重组靶向载体。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2013年03期）
王群,贾蓓,魏晓宇,黄文祥,周向阳[8]（2012）在《直接分子克隆法构建重组腺病毒AdHu5-mfsp27的研究》一文中研究指出目的采用直接分子克隆体外连接的方法构建重组腺病毒AdHu5-040-mfsp27(cds),高效高质量扩增和纯化重组腺病毒以满足实验及临床研究的需求。方法将mfsp27克隆至穿梭质粒pSh CMV intron-eGFP两个稀有限制性内切酶之间(I-ceuI和PI-sceI)(与腺病毒骨架质粒相同),回收酶切片段后连接,用合适的感受态细胞转化后氨苄青霉素抗性挑选克隆,用2～3种合适的限制性内切酶酶切证实重组腺病毒质粒骨架和目标基因的大小和方向,必要时测序。然后线性化该重组腺病毒以释放腺病毒载体基因组的反向末端重复序列(ITRs),在HEK293细胞系转染、感染、扩增,改良氯化铯梯度离心法纯化病毒并测定病毒的滴度。结果成功构建pAdHu5-mfsp27(cds)(J1034),扩增后纯化病毒浓度为1×1013 VP/ml,MOI为1.44×1011,二者比值为69.44。重组腺病毒AdHu5-mfsp27可高效感染293包装细胞。结论用直接分子克隆的方法成功构建重组腺病毒AdHu5-mfsp27(cds)并高质量扩增,解决了用同源重组方法构建时难于挑选克隆,时间长且成功率低的问题。利用高效液相柱,生物胶联合氯化铯梯度离心技术纯化病毒,简化了操作,不需透析病毒,最大程度保存病毒活性,病毒纯度高,为研究基因的功能及实现重组腺病毒产业化提供了依据。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2012年11期）
邓守恒,柯贤柱,石小燕,蔡召忠,杨敬宁[9]（2012）在《靶向克隆法构建pET15b-VP3原核表达载体》一文中研究指出目的探索利用PCR产物靶向克隆法构建能够表达凋亡素的pET15b-VP3原核表达载体。方法以PGEX-6P-1/TAT-VP3质粒为模板,PCR扩增VP3基因的366bp片段,应用靶向克隆酶,将VP3基因插入到线性pET15b,得到重组表达载体pET15b-VP3,经过筛选,挑选出阳性克隆进行XhoⅠ和BamHⅠ双酶切,图谱分析和重组质粒核苷酸序列分析以鉴定所构建的原核表达载体。结果 PCR产物经过电泳鉴定可见366bp特征性的VP3片段,重组质粒经双酶切电泳获得了一个大小为366bp的VP3片段,重组质粒测序证实VP3cDNA编码区成功地插入了pET15b,且其序列与GeneBank中VP3cDNA序列完全一致。结论靶向克隆法可快速,高效地构建pET15b-VP3原核表达载体,为进一步研究VP3药用价值奠定了基础。(本文来源于《成都医学院学报》期刊2012年03期）
张蔚,蔡召忠,邓守恒,杨敬宁,黄永章[10]（2012）在《靶向克隆法构建PEP-1-VP3基因的原核表达载体》一文中研究指出目的利用PCR产物靶向克隆法构建细胞穿透肽-凋亡素(PEP-1-VP3)的原核表达载体。方法以PGEX-6P-1/TAT-VP3质粒为模板,PCR扩增VP3基因的366bp片段,应用靶向克隆酶,将VP3基因插入到线性pET15b-PEP-1,得到重组表达质粒pET15b-PEP-1-VP3,经过筛选,挑选出阳性克隆进行NdeⅠ和BamHⅠ双酶切图谱分析和重组质粒核苷酸序列分析以鉴定所构建的原核表达载体。结果 PCR产物经过电泳可见366bp特征性的VP3片段,重组的质粒经过双酶切获得了一个大小为440bp的特征性PEP-1-VP3片段,重组质粒测序证实VP3cDNA编码区成功地克隆入了pET15b-PEP-1,且其序列与GeneBank中VP3cDNA序列完全一致。结论靶向克隆法可快速、高效地构建PEP-1-VP3基因的原核表达载体,为制备PEP-1-VP3融合蛋白奠定基础。(本文来源于《中华临床医师杂志(电子版)》期刊2012年01期）
克隆法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探索大鼠阴茎海绵体内皮细胞(CCECs)分离、纯化和培养的方法,观察其生长特性,并为勃起功能障碍的研究提供种子细胞。方法采用0.1%弹性蛋白酶消化大鼠阴茎海绵体组织,分离原代大鼠CCECs,然后采用免疫磁珠纯化,进一步扩增,利用克隆环筛选出单克隆CCECs,并观察其形态及增殖特性,免疫荧光染色鉴定CCECs血管假性血友病因子(von willebrand factor,VWF)、免疫组化染色鉴定CCECs CD31分子,流式细胞仪测定CCECs纯度,CCK-8法
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
克隆法论文参考文献
[1].王效,徐宏光,肖良,刘晨,金中行.两种不同单克隆法筛选大鼠腰椎终板软骨干细胞能力的比较[J].齐齐哈尔医学院学报.2018
[2].姜睿,张范波.改良免疫磁珠结合克隆法培养大鼠阴茎海绵体内皮细胞[C].第十二次全国中西医结合男科学术大会暨全国中西医结合男科诊疗技术研修班暨2017上海市中西医结合学会上海市中医药学会泌尿男科专业委员会学术年会讲义论文资料汇编.2017
[3].相微微,王建武.小麦HMW-GS基因的定向缺失亚克隆法解析[J].农业与技术.2015
[4].封艳,牛巧丽,尹宏斌,钟良军,赵今.有限稀释克隆法培养分离人牙周膜干细胞实验研究[J].新疆医科大学学报.2014
[5].中国水产科学研究院.“配子体克隆法培育巨藻幼苗及养殖示范”通过现场验收[N].中国渔业报.2014
[6].梁龙,杨华,杨永林,石国庆,刘守仁.应用“酶切连接”克隆法构建TALEs[J].石河子大学学报(自然科学版).2013
[7].梁龙,杨华,杨永林,刘守仁,皮文辉.“GoldenGate”克隆法构建靶向载体[J].中国生物工程杂志.2013
[8].王群,贾蓓,魏晓宇,黄文祥,周向阳.直接分子克隆法构建重组腺病毒AdHu5-mfsp27的研究[J].中国病原生物学杂志.2012
[9].邓守恒,柯贤柱,石小燕,蔡召忠,杨敬宁.靶向克隆法构建pET15b-VP3原核表达载体[J].成都医学院学报.2012
[10].张蔚,蔡召忠,邓守恒,杨敬宁,黄永章.靶向克隆法构建PEP-1-VP3基因的原核表达载体[J].中华临床医师杂志(电子版).2012
论文知识图
