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PMA-qPCR方法检测陕西猕猴桃溃疡菌优势病原菌活菌的研究

论文摘要

将叠氮溴化丙啶（PMA）与实时荧光定量（qPCR）相结合定量检测陕西猕猴桃溃疡菌优势病原菌（Psa）活菌的数量。通过优化PMA最佳浓度、暗孵育时间、曝光时间,确定PMA-qPCR区别溃疡菌活、死菌的最佳条件。结果表明,Psa经98.3℃沸水浴处理13min可完全致死,Psa死菌浓度为1×107 CFU/mL时PMA与死菌共价交联的最佳浓度为105μg/mL,最佳暗育时间为8min,最佳曝光时间为20min,在此条件下死菌DNA无扩增,而对活菌DNA扩增无影响;Psa质粒标准品建立的线性回归方程为Y=-3.220 4x+37.73,R2=0.995 5,最低可检出6.39×102拷贝/μL的溃疡菌;建立的PMA-qPCR方法最低可检出2.38×102拷贝/μL的溃疡菌;采用人工染菌枝条样品的最低检出限为6.30×104 CFU/mL,与菌落计数检测结果相符。

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 材料与仪器
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 Psa菌悬液的制备
  •     1.2.2 Psa菌膜损伤时间的确定
  •     1.2.3 DNA提取
  •     1.2.4 qPCR检测
  •     1.2.5 PMA处理的条件
  •     1.2.6 标准曲线的建立
  •     1.2.7 PMA-qPCR的灵敏度
  •     1.2.8 猕猴桃枝条样品活菌检测
  •     1.2.9 数据分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 Psa膜损伤时间的确定
  •   2.2 PMA处理条件的确定
  •     2.2.1 PMA浓度的优化
  •     2.2.2 暗孵育时间的确定
  •     2.2.3 曝光时间的确定
  •     2.2.4 PMA对不同比例活菌和膜损伤菌影响
  •   2.3 质粒标准品的制备及标准曲线的建立
  •   2.4 PMA-qPCR的灵敏度
  •   2.5 猕猴桃枝条样品活菌检测
  • 3 结论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 肖妍,刘芸宏,高贵田,曹凡,马燕萍,赵武奇,雷玉山

    关键词: 猕猴桃溃疡菌,活菌检测

    来源: 食品与机械 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑

    专业: 化学,轻工业手工业

    单位: 陕西师范大学食品工程与营养科学学院,陕西省猕猴桃工程技术研究中心,陕西省农村科技开发中心

    基金: 陕西省科技厅特色产业链项目(编号:2018TSCXLNY-01-05),西安市农业科技创新计划项目[编号:2017050NC,NY009(3)]

    分类号: O657;TS255.7

    DOI: 10.13652/j.issn.1003-5788.2019.04.009

    页码: 48-53+59

    总页数: 7

    文件大小: 764K

    下载量: 224

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/da1628d6157438e2e125dd39.html