PRRSV 2b蛋白互作宿主细胞蛋白的筛选

PRRSV 2b蛋白互作宿主细胞蛋白的筛选

论文摘要

目的通过酵母双杂交筛选技术从猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)c DNA文库中筛选与猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)2b蛋白互作的宿主细胞蛋白。方法将PRRSV 2b基因扩增产物克隆至p GBKT7质粒上,构建重组钓饵载体p GBKT7-2b,转化至Y2H Gold酵母感受态中制备钓饵菌株后,进行自激活和毒性检测;将PAM c DNA文库菌株与钓饵菌株进行杂交融合,经DDO/X/A平板筛选后,对筛选的菌株进行PCR鉴定及测序分析。结果构建的钓饵菌株无毒性和自激活现象;共获得LGALS1、RPL12、LGALS3和RPS20 4种蛋白。结论成功构建了可用于双杂交筛选的钓饵菌株,筛选出4种与PRRSV 2b蛋白互作的PAM蛋白,其中LGALS1出现概率最高。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 菌株、载体、毒株及细胞
  •   1.2 主要试剂及仪器
  •   1.3重组钓饵载体的构建
  •   1.4 钓饵菌株的制备及鉴定
  •   1.5 互作宿主细胞蛋白的初步筛选
  •   1.6 阳性克隆的鉴定
  •   1.7 阳性克隆的基因序列分析
  • 2 结果
  •   2.1 钓饵菌株的鉴定
  •     2.1.1 2b基因扩增产物的鉴定
  •     2.1.2 钓饵菌株的鉴定
  •     2.1.3 钓饵载体插入基因的鉴定
  •     2.1.4 钓饵菌株的毒性和自激活
  •   2.2 互作蛋白的鉴定
  •   2.3 阳性菌落的鉴定
  •   2.4 基因序列分析
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 崔一龙,邓守全,杨达汉,薛江东,马德慧

    关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒,蛋白,互作蛋白,猪肺泡巨噬细胞

    来源: 中国生物制品学杂志 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学,农业科技

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 内蒙古民族大学动物科学与技术学院,内蒙古自治区肉牛疾病防控工程技术研究中心

    基金: 国家自然科学基金资助项目(31460662),内蒙古自治区自然科学基金项目(2017MS0319)

    分类号: S852.651

    DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002560

    页码: 403-407

    总页数: 5

    文件大小: 376K

    下载量: 67

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