导读:本文包含了连接酶检测反应论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:UGT1A1*,28基因,连接酶链反应,荧光PCR,基因多态性
连接酶检测反应论文文献综述
李拴祚,刘爱宁,杜敏,来锦云,宋明旭[1]（2018）在《连接酶链反应结合荧光PCR法检测UGT1A1~* 28基因多态性》一文中研究指出目的:建立一种连接酶链反应结合荧光PCR的方法,检测结肠癌患者外周血UGT1A1*28基因多态性,并探讨其临床应用价值。方法:设计连接酶荧光PCR引物和探针,首先通过连接酶反应,然后结合荧光PCR技术检测UGT1A1*28基因多态性,构建标准品评判该体系的特异性和敏感性,并检测50例结肠癌患者外周血标本,与DNA测序进行平行比较。结果:此方法能准确地区分UGT1A1*28基因TA_(6/6)、TA_(7/7)及TA_(6/7)基因型,且最低可检测5 ng人基因组DNA,50例结肠癌患者外周血标本的检测结果与测序结果一致。结论:连接酶链反应结合荧光PCR可准确检测出UGT1A1*28基因多态性。(本文来源于《江苏大学学报(医学版)》期刊2018年04期）
吴玉姝,吴敏,刘敏[2]（2018）在《连接酶反应介导的荧光策略用于高效检测尿嘧啶-DNA糖基化酶的活性》一文中研究指出目的:灵敏检测尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)活性有利于生物医学研究和疾病预后.这里,构建一种连接酶反应介导的荧光策略用于高效检测UDG活性.方法:在本策略中,两条短寡核苷酸链分别与发夹探针环部序列的一半杂交,形成含缺口的DNA复合物.在UDG作用下,发夹探针环部的单个U碱基被移除,产生无嘌呤/无嘧啶(AP)位点.AP位点能抑制缺口处的连接酶反应,使位于发夹探针末端的立足点和链迁移区域仍彼此邻近,从而引发杂交链式反应(HCR),产生大量G四倍体(G4)结构.最后,G4与N甲基卟啉IX(NMM)结合,产生增强的荧光信号.结果:本策略检测限低至0.000 20U/mL,并能区分UDG与其它DNA糖基化酶.结论:本策略为生物医学研究和疾病预后提供了一种有潜力的工具用于灵敏定量检测UDG活性.(本文来源于《聊城大学学报(自然科学版)》期刊2018年02期）
李书亚[3]（2018）在《核酸错配对DNA连接酶反应的单位点核酸变异检测的影响》一文中研究指出基因变异最常见的形式是单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism,SNP),它与人类疾病、药物效率有密切联系。SNP检测已被认为是早期诊断恶性肿瘤风险评估有前途的工具。全面了解单核苷酸多态性基因分型可以实现有价值的信息,并用来指导临床诊断和个体用药的发展,所以,简单、精准的SNP检测是非常重要的。由于较低的商业成本以及核酸底物识别的灵活性,T4 DNA连接酶被广泛应用于生物分子工程,特别是特定核酸序列的等位特异性连接检测。本论文探究了以T4 DNA连接酶为主的不同连接酶介导的连接反应中引入额外的错配对于目的基因片段上的单碱基变异位点的识别所产生的影响。论文以锁式探针成环反应为模型,系统性地验证了不同DNA连接酶的连接活性,分析了引入额外错配对连接酶特异性的影响。研究结果表明,引入额外的碱基错配,提高了T4 DNA连接酶对单碱基变异的目的核酸的特异性。对单碱基DNA突变检测,分析发现在连接点相邻位置引入额外的错配,可以明显提高T4 DNA连接酶的特异性。其中,最有效的错配碱基对可使T4 DNA连接酶的特异性提高600多倍。对单碱基RNA突变检测,分析发现对不同碱基检测时,额外引入错配的最佳位置不同,且T4 DNA连接酶对于DNA底物的识别灵敏度高于RNA/DNA复合底物的识别。此外,还对Taq DNA连接酶介导的连接反应进行分析,实验结果表明额外引入的错配对于Taq DNA连接酶对底物识别的特异性影响不大。本论文从不同连接酶的连接效率、对不同底物的识别特异性进行研究,确认了额外引入的错配可以提高T4 DNA连接酶对底物识别的特异性,提高了单碱基突变检测的精准度。所得结论对以锁式探针为模型的特异性核酸位点检测技术有指导意义,同时对发展临床诊断技术和个体化用药有推进作用。(本文来源于《天津大学》期刊2018-06-01）
吴凡,周翔[4]（2017）在《基于连接酶链式反应检测5-甲基胞嘧啶》一文中研究指出DNA甲基化是DNA的表观遗传修饰中的一种,一直被人们描述为‘基因沉默’的表观遗传学标志物。1自从被发现以来,5-甲基胞嘧啶一直是核酸化学学科的热点研究课题,它与许多生命活动息息相关,并且涉及到了很多疾病的病理学研究,因此被称为"第五种碱基"。如何实现对DNA甲基化位点进行更为快速有效地检测,也是现阶段DNA甲基化检测的研究发展方向之一。我们通过连接酶链式反应实现对单个碱基水平的DNA甲基化的检测。如图所示,Target-C和Target-mC为两条序列相同的目标DNA链,其中Target-mC中的胞嘧啶都为5-甲基胞嘧啶,经过亚硫酸氢钠的处理,胞嘧啶都会转化为尿嘧啶,而5-甲基胞嘧啶则不会改变。2体系中加入和目标DNA链两端互补配对的两条DNA链,其中一条5'端用FAM标记,另一条5'端磷酸化修饰。当Target-mC存在时,在Taq DNA连接酶的作用下,两条DNA链可以完全连接起来形成长链,从而在变性聚丙烯酰胺胶中迁移速度变慢。(本文来源于《第十届全国化学生物学学术会议论文摘要集（墙报）》期刊2017-09-23）
单幼兰,江培学[5]（2015）在《连接酶检测反应技术应用于乙型肝炎病毒拉米夫定耐药和阿德福韦耐药突变的研究》一文中研究指出目的:研究高温连接酶检测反应技术(LDR)技术检测乙肝病毒拉米夫定耐药和阿德福韦耐药突变的可行性.方法:应用LDR技术和多聚酶链式反应(PCR)技术,在乙肝病毒基因相关区域设计引物和探针检测突变位点.结果:该方法能很好的区分野生型质粒和突变型质粒;90例临床样本的测序结果与LDR检测结果基本一致.结论:LDR技术可以应用于临床乙肝病毒样本的拉米夫定耐药和阿德福韦耐药的检测.(本文来源于《暨南大学学报(自然科学与医学版)》期刊2015年06期）
胡延雷[6]（2015）在《基于连接酶链式反应高灵敏度检测信使RNA》一文中研究指出复制、转录和翻译是基本的生命过程,DNA转录生成m RNA,m RNA在核糖体处翻译合成多肽,多肽经折迭修饰变为蛋白质,蛋白质与生化途径和致病机理密切相关,因此分析检测m RNA对研究生命过程和疾病诊断具有重要意义。聚合酶链式反应(PCR)是常用的m RNA检测的方法,但是该检测方法需要逆转录过程,并且不能有效识别单碱基差异,连接酶链式反应(LCR)是一种可以与PCR相媲美的核酸扩增方法,该扩增方法特异性好,能很好的区分单碱基差异,然而LCR的产物需要电泳分离检测,并且以RNA为模板连接DNA探针效率很低。本实验通过使用RNA碱基修饰的DNA探针,成功的实现了以RNA为模板DNA探针的连接,选择适当的检测温度,完成了LCR产物的实时定量检测,从而建立了连接酶链式反应高灵敏度检测信使RNA的方法。这种检测方法不需要逆转录过程,亦不需要LCR产物的分离检测过程,这就简化了操作步骤,节省了检测时间,实验中使用SYBR Green I(SG)为荧光染料,而不是荧光标记的DNA探针,节省了实验成本。另一方面,这种检测方法,具有良好的单碱基分辨能力,可检测到0.1 fmol/L的目标序列,很宽的线性范围,该方法成功应用于总RNA中的目标m RNA检测。在以m RNA为生物指标的研究和疾病诊断中,具有一定的应用价值。(本文来源于《河北大学》期刊2015-06-01）
苏风霞[7]（2015）在《基于连接酶链式反应（LCR）高灵敏度检测DNA甲基化》一文中研究指出DNA甲基化是一种真核生物基因组不可缺少的表观遗传学修饰,它特异性地发生在Cp G二核苷酸的胞嘧啶上。曾有报道证实抑癌基因的非正常甲基化状态在许多疾病尤其是癌症中很常见,多与转录抑制有关系。DNA甲基化越来越多地被用作癌症检测和各种诊断的基因标志物。因此,快速、灵敏地检测DNA甲基化是非常必要的。并且,一般情况下,一种癌症会与多个Cp G甲基化相关,因此同时检测多个Cp G甲基化可以大大提高癌症检测的准确性。我们建立了两种基于连接酶链式反应(LCR)高灵敏度检测基因组中DNA甲基化的方法。第一种是LCR反应之后,扩增产物通过与纳米金上两种与产物互补的探针进行杂交反应而使纳米金之间的距离拉近,形成网状结构聚积物进而导致溶液颜色由红色变成蓝色,因此,可以通过可视化检测DNA甲基化并且通过吸收光谱对其进行定量分析。该方法可以检测低至0.01 fmol/L甲基化DNA片段和1 ng甲基化基因组DNA,在大量非甲基化DNA中可以检测到0.1%的甲基化DNA。第二种是在一条LCR探针上标记荧光基团,LCR产物通过ABI 310基因分析仪进行电泳分离和荧光检测。由于LCR可以准确区分单碱基错配,DNA甲基化检测可以获得高灵敏度和选择性。该方法可以检测低至0.01 fmol/L甲基化DNA片段和10 ng甲基化基因组DNA,在大量非甲基化DNA中可以检测出0.1%的甲基化DNA。并且,针对不同目标物,设计一个LCR探针具有不同长度,从而产生不同长度的LCR产物,经过电泳分离之后实现在一个反应体系中多个位点的同时检测。(本文来源于《河北大学》期刊2015-06-01）
崔海忠,肖娜,张永平,陈大贵,唐一通[8]（2015）在《连接酶-ELISA反应检测循环DNA基因突变研究》一文中研究指出目的研究一种简便、灵敏的单核苷酸多态性(SNP)分型方法,使其能够在简单实验条件下进行常规的临床样本检测。方法设计针对突变位点的检测探针,通过检测探针的连接、通用扩增、标记和ELISA反应,根据检测位点对应反应管显色值判定突变位点的基因型。以表皮生长因子受体(EGFR)基因外显子21和18上的3个SNP突变位点L858R、L861Q和G719C为检测对象,对62例肺癌血浆循环DNA样本进行检测,并与直接测序结果进行比较。结果通过对3个突变位点的检测,2种方法均在L858R位点检出杂合子突变。直接测序法仅能够明确检出2例杂合子突变,另外1例样本因在突变位点出现不明显的套峰而无法明确判定突变类型。而新方法能够明确检出6例杂合子突变。结论建立了一种基于连接酶-ELISA的简便、灵敏的SNP突变检测方法,适合于在简单实验条件下对不均一样本进行常规突变检测。(本文来源于《天津医药》期刊2015年05期）
周卫平[9]（2014）在《聚合酶链-连接酶反应检测南通地区慢性乙型肝炎病毒基因型和核苷酸类似物耐药基因突变位点的相关研究》一文中研究指出目的设计一种多重聚合酶链-连接酶检测反应(PCR-LDR)快速检测南通地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型和核苷(酸)类似物耐药基因突变位点。方法以基因库公布的HBV基因序列为基础,针对拉米夫定、替比夫定、阿德福韦和恩替卡韦10个耐药位点,设计引物和15对特异性探针,采用多重PCR扩增HBV P基因区野生型和突变型目的片段、以及根据HBV基因型设计引物和2对特异性探针,采用多重PCR扩增,然后进行多重LDR反(本文来源于《中华医学会第十一次全国临床微生物学术年会暨全球华人临床微生物与感染症学会学术论坛暨第四届国际临床微生物及抗微生物化疗学术会议(4th SICCMAC)日程&论文汇编》期刊2014-10-24）
袁征[10]（2014）在《基于连接酶链式反应和阳离子共轭聚合物高灵敏度均相检测MicroRNA》一文中研究指出MicroRNA（miRNA）广泛存在于动植物的组织细胞内，扮演着基因转录后信使RNA（mRNA）的调控者的角色。相关研究表明，一些miRNA的特异性异常表达与癌症有着密不可分的联系。因此，高灵敏度检测miRNA对于进一步研究miRNA的调控机制和由miRNA引发的一系列内源性疾病具有非常实际的意义。由于miRNA在细胞内的表达量极低，所以通常采用核酸扩增技术将其检测信号放大，进而对其进行定性和定量分析。但是，传统的指数核酸扩增方法，如反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）具有引物设计复杂、检测灵敏度不高以及特异性较差等缺点。连接酶链式反应（LCR）作为另一种指数核酸扩增方法，一般需用聚丙烯酰胺凝胶电泳对扩增产物进行分离才能实现核酸的定性和半定量分析，大大延长了检测时间，降低了检测效率。本文结合连接酶链式扩增反应和lambda核酸外切酶协助的阳离子共轭聚合物荧光共振能量转移技术，建立了一种高灵敏度均相检测miRNA的新方法。方法设计两对LCR探针，每对探针含有一条3端荧光标记和5端磷酸化修饰的探针。首先，以目标miRNA分子为模板，通过T4RNA连接酶2的特异连接反应产生LCR的连接模板。然后，在热稳定DNA连接酶作用下，进行高效LCR反应，产生大量荧光标记的DNA产物。随后，利用lambda核酸外切酶对双链DNA中5端磷酸化修饰DNA链的水解作用，使空白溶液和LCR反应中未反应的DNA探针降解为荧光标记的单核苷酸片段。而LCR产物中由于无5端磷酸化修饰，不会被lambda核酸酶降解。当加入阳离子共轭聚合物（CCP），其与DNA通过强静电力结合，与DNA上的荧光分子发生高效荧光共振能量转移，并实现荧光信号的二次放大。相比较，荧光标记的单核苷酸片段带电荷少，与CCP静电力作用弱，二者不能发生有效的荧光共振能量转移，基于此，实现了miRNA的特异、高灵敏度分析。方法均相操作，简便、灵敏度高，可实现0.1fM目标miRNA分子的高灵敏度检测和特异区分单碱基差别的miRNAs，并成功应用于人肺组织中提取的总RNA中let-7a的检测，方法为基于LCR的均相核酸检测及分子诊断提供了新策略。(本文来源于《河北大学》期刊2014-05-01）
连接酶检测反应论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:灵敏检测尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)活性有利于生物医学研究和疾病预后.这里,构建一种连接酶反应介导的荧光策略用于高效检测UDG活性.方法:在本策略中,两条短寡核苷酸链分别与发夹探针环部序列的一半杂交,形成含缺口的DNA复合物.在UDG作用下,发夹探针环部的单个U碱基被移除,产生无嘌呤/无嘧啶(AP)位点.AP位点能抑制缺口处的连接酶反应,使位于发夹探针末端的立足点和链迁移区域仍彼此邻近,从而引发杂交链式反应(HCR),产生大量G四倍体(G4)结构.最后,G4与N甲基卟啉IX(NMM)结合,产生增强的荧光信号.结果:本策略检测限低至0.000 20U/mL,并能区分UDG与其它DNA糖基化酶.结论:本策略为生物医学研究和疾病预后提供了一种有潜力的工具用于灵敏定量检测UDG活性.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
连接酶检测反应论文参考文献
[1].李拴祚,刘爱宁,杜敏,来锦云,宋明旭.连接酶链反应结合荧光PCR法检测UGT1A1~*28基因多态性[J].江苏大学学报(医学版).2018
[2].吴玉姝,吴敏,刘敏.连接酶反应介导的荧光策略用于高效检测尿嘧啶-DNA糖基化酶的活性[J].聊城大学学报(自然科学版).2018
[3].李书亚.核酸错配对DNA连接酶反应的单位点核酸变异检测的影响[D].天津大学.2018
[4].吴凡,周翔.基于连接酶链式反应检测5-甲基胞嘧啶[C].第十届全国化学生物学学术会议论文摘要集（墙报）.2017
[5].单幼兰,江培学.连接酶检测反应技术应用于乙型肝炎病毒拉米夫定耐药和阿德福韦耐药突变的研究[J].暨南大学学报(自然科学与医学版).2015
[6].胡延雷.基于连接酶链式反应高灵敏度检测信使RNA[D].河北大学.2015
[7].苏风霞.基于连接酶链式反应（LCR）高灵敏度检测DNA甲基化[D].河北大学.2015
[8].崔海忠,肖娜,张永平,陈大贵,唐一通.连接酶-ELISA反应检测循环DNA基因突变研究[J].天津医药.2015
[9].周卫平.聚合酶链-连接酶反应检测南通地区慢性乙型肝炎病毒基因型和核苷酸类似物耐药基因突变位点的相关研究[C].中华医学会第十一次全国临床微生物学术年会暨全球华人临床微生物与感染症学会学术论坛暨第四届国际临床微生物及抗微生物化疗学术会议(4thSICCMAC)日程&论文汇编.2014
[10].袁征.基于连接酶链式反应和阳离子共轭聚合物高灵敏度均相检测MicroRNA[D].河北大学.2014