铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶的克隆表达及活性

铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶的克隆表达及活性

论文摘要

为了研究使用酵母表达系统表达重组铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶的效果,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)将铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶基因ly23克隆至酵母表达载体pSEP1和pSEP1alpha上,并分别转化至酿酒酵母细胞,对胞内表达及分泌表达重组噬菌体裂解酶LY23的表达水平及裂解活性进行测定。结果表明,用酿酒酵母表达系统分泌表达的LY23粗酶液处理10min后,铜绿假单胞菌菌液的OD620值下降约50%,且比浊法测定显示LY23对铜绿假单胞菌具有较为显著且专一的裂解活性。本文研究使用酵母表达系统可分泌表达具备裂解活性的噬菌体裂解酶,可为后期探讨其分离纯化提供基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 菌株与质粒
  •     1.1.2 主要试剂
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 ly23基因的克隆
  •     1.2.2 克隆载体构建
  •     1.2.3 重组表达载体转化酵母感受态细胞
  •     1.2.4 重组噬菌体裂解酶LY23的表达与分析
  •     1.2.5 裂解酶LY23体外活性评价
  •     1.2.6 裂菌谱测定
  • 2 结果与分析
  •   2.1 裂解酶ly23基因的克隆与克隆载体的构建
  •   2.2 裂解酶LY23的诱导表达
  •   2.3 裂解酶LY23的体外活性评价
  •   2.4 LY23的裂菌谱
  • 3 讨论
  • 4 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 赵晨,李端华,李进军,葛燕,王辂

    关键词: 生物技术,噬菌体裂解酶,铜绿假单胞菌,酵母表达系统,分泌表达

    来源: 中国科技论文 2019年08期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅱ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 成都大学四川抗菌素工业研究所,四川大学华西药学院

    基金: 四川省科技计划项目(2017HH0011),成都市科技项目(2016-XT00-00023-GX),成都学院(成都大学)川抗所2014年校青年基金资助项目(2014XQCKS08)

    分类号: Q78

    页码: 874-878+889

    总页数: 6

    文件大小: 238K

    下载量: 127

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