木棉花超氧化物歧化酶分离工艺的研究

木棉花超氧化物歧化酶分离工艺的研究

论文摘要

探究优化木棉花超氧化物歧化酶(SOD)的提取条件,建立木棉花SOD生产工艺.以木棉花花瓣为原料,采用正交实验优化超声波提取的技术参数,结合丙酮等电点沉淀和葡聚糖凝胶层析提取纯化SOD,经真空冷冻干燥获得SOD成品.超声波提取的最佳工艺为料液比1∶30,功率180 w,超声波处理总时间9 min,浸提时间8 h.沉淀杂蛋白条件为2 mol/L的HCl将粗提液调节至pH为5.0,提纯SOD条件为pH 4.0丙酮等电点沉淀法,纯化倍数达到5.59,经Sephadex G-75纯化,获得SOD成品,纯化倍数达到18.46.为木棉花SOD的规模化生产提供理论依据.

论文目录

  • 1 材料, 仪器与试剂
  •   1.1 材料
  •   1.2 仪器与设备
  •   1.3 试剂
  •   1.4 试剂的配制
  • 2 实验方法
  •   2.1 提取工艺
  •   2.2 单因素实验
  •     2.2.1 料液比对木棉花SOD酶活力的影响
  •     2.2.2 超声波功率对木棉花SOD酶活力的影响
  •     2.2.3 超声波处理时间对木棉花SOD酶活力的影响
  •     2.2.4 浸提时间对木棉花SOD酶活力的影响
  •     2.2.5 正交实验
  •   2.3 提取液的分离纯化
  •     2.3.1 热变性法
  •     2.3.2 氯仿-乙醇法
  •     2.3.3 分级沉淀法
  •   2.4 葡聚糖凝胶柱层析
  •     2.4.1 Sephadex G-75的预处理
  •     2.4.2 操作步骤
  •   2.5 SOD酶活力及蛋白含量的测定
  •     2.5.1 酶活力的测定采用微量邻苯三酚自氧化法[11]和试剂盒法
  •     2.5.2 蛋白质含量的测定采用考马斯亮蓝法[1]
  • 3 结果与分析
  •   3.1 单因素实验结果
  •     3.1.1 料液比对木棉花SOD酶活力的影响
  •     3.1.2 超声波功率对木棉花SOD酶活力的影响
  •     3.1.3 超声波处理时间对木棉花SOD酶活力的影响
  •     3.1.4 浸提时间对木棉花SOD酶活力的影响
  •   3.2 正交实验
  •     3.2.1 正交实验的因素水平
  •     3.2.1 正交实验结果分析
  •   3.3 两种提纯方法结合的探究
  •   3.4 SOD提纯方法的筛选
  •   3.5 丙酮沉淀条件的优化
  •   3.6 确定最佳纯化条件
  • 4 总结和展望
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张小雪,李青容,刘敏宜,周晓思,李钰怡,谢丽玲

    关键词: 木棉花,超声波提取法,正交实验,等电点沉淀法,葡聚糖凝胶层析

    来源: 汕头大学学报(自然科学版) 2019年02期

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 汕头大学生物系

    基金: 2018年“攀登计划”广东大学科技创新培育专项资金项目(pdjhb0193)

    分类号: Q946.5

    页码: 52-61

    总页数: 10

    文件大小: 642K

    下载量: 209

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