猪伪狂犬病病毒变异毒株gE和gB蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

猪伪狂犬病病毒变异毒株gE和gB蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

论文摘要

为建立猪伪狂犬病病毒(PRV)疫苗免疫抗体与病毒感染抗体鉴别诊断方法,分别以PRV变异毒株的gE或gB重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选所需单克隆抗体,获得6株抗PRV gE蛋白的单抗(3E6、7E1、7C5、10C3、15C1、14C1)和6株抗PRV gB蛋白的单抗(1C1、5D2、2F11、5G8、10C7、8H5)。IPMA检测结果显示,gE蛋白单抗能识别PRV变异毒株,但不识别疫苗株;而gB蛋白单抗可同时识别PRV变异毒株和疫苗株。gE单抗10C3和gB单抗10C7的ELISA效价和IPMA效价均分别达1∶5×105.0和1∶8×103.0以上。所筛选出的单抗均不与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、流行性乙型脑炎病毒(JEV)等其他常见病毒发生交叉反应。gE蛋白和gB蛋白的表达及单抗的制备为PRV感染抗体与疫苗免疫抗体鉴别诊断(DIVA)试纸的研发奠定基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 细胞和病毒
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 gE和gB重组蛋白的表达和纯化
  •   1.4 动物免疫
  •   1.5 免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)
  •   1.6 腹水制备及纯化
  •   1.7 单抗特性鉴定
  • 2 结果
  •   2.1 PRV gE和gB蛋白的表达和纯化
  •   2.2 蛋白免疫原性的检测
  •   2.3 单克隆抗体的制备
  •   2.4 单克隆抗体的特异性
  •   2.5 单抗亚型和识别表位的分析
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 李艳华,王寅彪,李青梅,解伟涛,郭成留,郭军庆,邓瑞广,张改平

    关键词: 猪伪狂犬病病毒,蛋白,单克隆抗体,鉴别诊断

    来源: 中国兽医学报 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南百奥生物工程有限公司,新乡医学院公共卫生学院,河南农业大学牧医工程学院

    基金: 国家重点研发计划资助项目(2016YFD0500703)

    分类号: S852.651

    DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.12.02

    页码: 2282-2287

    总页数: 6

    文件大小: 7197K

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