提高源自Bacillus circulans 251的β-CGTase对麦芽糖亲和性及其在生产海藻糖中的应用

论文摘要

将B. circulans 251β-CGTase应用于海藻糖制备,海藻糖转化率从50. 4%提高至71. 9%。为进一步提高底物的转化率,运用易错PCR-高通量筛选技术筛选对以麦芽糖为歧化反应受体的亲和性提高的B. circulans 251β-CGTase突变体。利用低底物浓度的96孔板4,6-亚乙基-对硝基苯-α-D-麦芽七糖苷（EPS）显色法,最终筛选得到了一株对麦芽糖亲和性提高的突变体M234I。将野生型β-CGTase和突变体酶M234I进行蛋白质纯化,测定其酶学性质。结果表明,突变体的比活为345. 25U/mg,野生型则为357. 63U/mg;突变体M234I对麦芽糖的Km为0. 258 2mmol/L,仅为野生型（0. 474 9mmol/L）的54. 4%,对麦芽糖的亲和性显著提高;突变体的最适温度、最适p H较野生型未发生较大变化。以麦芽糊精（DE值16）为底物,将突变体M234I用于多酶复配体系生产海藻糖,酶反应结果表明海藻糖的转化率最高达74. 9%,较野生型β-CGTase提高约3%。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 杜立,宿玲恰,吴敬

关键词: 易错,分子改造,亲和性,海藻糖转化

来源: 中国生物工程杂志 2019年05期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室,江南大学教育部食品安全国际合作联合实验室

基金: 国家自然科学基金(31771916,31425020)资助项目

分类号: TS245

DOI: 10.13523/j.cb.20190511

页码: 96-104

总页数: 9

文件大小: 333K

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