猪流行性腹泻病毒流行毒株S1蛋白的原核表达与鉴定

猪流行性腹泻病毒流行毒株S1蛋白的原核表达与鉴定

论文摘要

为了获得具有良好活性的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒株重组蛋白,试验采用PCR扩增、克隆、诱导表达、Western-blot检测、间接ELISA等方法对PEDV流行毒株S1蛋白的主要抗原区域进行了原核表达、鉴定与初步应用研究。结果表明:经PCR扩增得到大小为1 095 bp的S1蛋白主要抗原区域基因;将目的片段定向克隆至pET-30a原核表达载体中,经IPTG诱导获得大小为48. 0 ku的重组蛋白; Western-blot检测显示,重组蛋白可与PEDV阳性血清发生特异性反应;用以重组蛋白为包被抗原初步建立的PEDV抗体间接ELISA方法检测PEDV感染猪场,其阳性感染率达98. 52%,无PEDV免疫史和感染史猪场的阳性感染率为0。说明试验获得了具有良好生物学活性的PEDV流行毒株重组蛋白。

论文目录

  • 1 材料
  •   1.1 毒株与菌株
  •   1.2 载体与血清
  •   1.3 主要试剂
  • 2 方法
  •   2.1 PCR扩增
  •     2.1.1 引物的设计与合成
  •     2.1.2 RNA提取与cDNA合成
  •     2.1.3 PCR扩增体系与程序
  •   2.2 表达载体的构建与双酶切鉴定
  •   2.3 重组蛋白的诱导表达与纯化
  •   2.4 重组蛋白的Western-blot鉴定
  •   2.5 重组蛋白的间接ELISA应用
  • 3 结果与分析
  •   3.1 PCR扩增
  •   3.2 表达载体的构建与双酶切鉴定
  •   3.3 重组蛋白的诱导表达与纯化
  •   3.4 重组蛋白的Western-blot检测
  •   3.5 重组蛋白的间接ELISA应用
  • 4 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 樊平,颜邦斌,王怀禹

    关键词: 猪流行性腹泻病毒,流行毒株,蛋白,原核表达,鉴定,初步应用

    来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年17期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 南充职业技术学院

    基金: 四川省自然科学基金项目(18ZB0318)

    分类号: S852.651

    DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.07.0364

    页码: 93-96

    总页数: 4

    文件大小: 207K

    下载量: 123

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