牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立

论文摘要

为建立基于TaqMan探针的双重荧光PCR技术检测牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）和牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的方法,根据IBRV gB基因序列和BVDV 5′端非编码区序列的保守区域,分别设计1对IBRV的特异性引物和1条FAM标记的TaqMan探针,1对BVDV的特异性引物和1条ROX标记的TaqMan探针,建立双重荧光定量PCR检测IBRV和BVDV的方法。对建立的检测方法进行特异性和敏感性测定,并用临床样品进行检测验证。特异性试验结果显示,该方法检测参试的IBRV毒株,在波长530μm（FAM）时收集到特异性荧光信号曲线,检测参试的BVDV毒株,在610μm（ROX）时收集到特异性荧光信号曲线,无交叉信号出现,对照的毒株无论是在530μm（FAM）,还是610μm（ROX）处,均无荧光信号曲线出现,方法的特异性好;敏感性试验结果显示,该双重荧光定量PCR可检测到100个拷贝的IBRV和BVDV质粒DNA模板;临床样品检测结果表明,对保存在-70℃的127份牛病料样品核酸进行检测,IBRV阳性12份,BVDV阳性26份,IBRV和BVDV同为阳性2份,为混合感染,检测的拷贝数分别为6.24×105和6.32×104拷贝/μL。阳性样品经序列比对分析,分别与IBRV和BVDV的序列100%同源。建立的双重实时荧光定量PCR方法检测IBRV和BVDV具有特异、敏感等优点,可用于临床样品的鉴别检测。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 谢志勤,谢芝勋,范晴,张民秀,罗思思,张艳芳,曾婷婷,黄娇玲,王盛,谢丽基,邓显文,刘加波,庞耀珊

关键词: 牛传染性鼻气管炎病毒,牛病毒性腹泻病毒,双重荧光定量,探针,检测

来源: 动物医学进展 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 广西壮族自治区兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室

基金: 广西重点研发计划项目(桂科AB16380003),广西科技重大专项(桂科AA17204057),国家“万人计划”领军人才专项(2016-37)

分类号: S852.653

DOI: 10.16437/j.cnki.1007-5038.2019.03.003

页码: 20-25

总页数: 6

文件大小: 255K

下载量: 273

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