EV71病毒诱导细胞应激颗粒形成的初步研究

EV71病毒诱导细胞应激颗粒形成的初步研究

论文摘要

肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)属于小RNA病毒科,肠道病毒属,肠道病毒A型的成员,是引起婴幼儿手足口病(Hand foot and mouth disease,HFMD)的一种重要病原病毒。但截至目前,EV71病毒与宿主细胞相互作用的机制仍不清楚。为了研究EV71病毒诱导应激颗粒形成的分子机制,研究首先构建了真核表达载体pDsRed2-G3BP1,随后构建了稳定表达融合蛋白RFP-G3BP1蛋白的HeLa细胞系(HeLaRFP-G3BP1),并应用Western Blot和免疫荧光技术证实了G3BP1融合蛋白的正确表达。EV71病毒感染HeLaRFP-G3BP1后,超过40%感染细胞的胞质中出现了应激颗粒。此外,应用微管特异性抑制剂破坏细胞微管完整性之后,显著抑制应激颗粒的迁移聚集。研究证明了EV71病毒诱导细胞应激颗粒的初步形成并且应激颗粒的迁移聚集依赖于微管的完整性。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 细胞和病毒
  •     1.1.2 试剂、抗体和微管抑制剂
  •   1.2 试验方法
  •     1.2.1 EV71病毒的纯化
  •     1.2.2 病毒滴度测定
  •     1.2.3 载体构建
  •     1.2.4 细胞转染
  •     1.2.5 稳定细胞系的筛选
  •     1.2.6 激光共聚焦分析
  •     1.2.7 Western Blot检测
  • 2 结果
  •   2.1 G3BP1基因片段的PCR扩增
  •   2.2 重组质粒pDsRed2-G3BP1的PCR鉴定
  •   2.3 重组质粒pDsRed2-G3BP1双酶切鉴定
  •   2.4 RFP-G3BP1融合蛋白的检测
  •   2.5 过表达应激颗粒标示蛋白G3BP1稳定细胞系的构建
  •   2.6 EV71病毒诱导细胞应激颗粒的形成
  •   2.7 微管调节应激颗粒的聚集
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 武雪宁,徐嘉欣,王显赫,邹德华,郑亮,程丽鑫,李兴志,张雅婷,沈玉江,张华,曹宏伟

    关键词: 病毒,应激颗粒,微管

    来源: 黑龙江八一农垦大学学报 2019年05期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学,医药卫生科技

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院,黑龙江八一农垦大学生物技术中心

    基金: 黑龙江省大学生创新创业训练计划项目(201710223078)

    分类号: R373.2

    页码: 83-90

    总页数: 8

    文件大小: 2344K

    下载量: 107

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