优化的Native PAGE蛋白回收方法在AFM中的应用

优化的Native PAGE蛋白回收方法在AFM中的应用

论文摘要

原子力显微镜(AFM)可以在生理条件下获得生物大分子的自然结构信息而不需要进行图像处理。虽然对含有大小范围不一的异质样品成像可以得到几纳米的分辨率,但是具有更高的亚纳米级分辨率的图像仅可以从含有单一亚基数目的高度均一的蛋白复合物获得。在重组蛋白的制备中这种蛋白复合物经常不存在,尤其是对于膜蛋白则更具有挑战性。本研究中,研究者以一种熟知的膜成孔蛋白复合物Perfringolysin O(PFO)作为模型系统,研制出一种方法来分离含有单一亚基数目的复合物,并用于随后在液相的AFM成像。具体而言,研究人员通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native PAGE)分离出该复合物中特定大小的蛋白成分,然后提取时采用一种新方法使结构完整保持。预计这种方法不仅对更多其他蛋白的高分辨率AFM研究有效用,而且在基于单分子方法和生物技术应用的研究上有更普遍的用途。

论文目录

  • 1 结果与分析
  •   1.1 PFO纯化、蛋白功能和结构检测
  •   1.2 非变性梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳分离大小不同的PFO寡聚体
  •   1.3 切胶回收
  •   1.4 AFM成像
  • 2 讨论
  • 3 材料与方法
  •   3.1 PFO的表达和纯化
  •   3.2 磷脂双分子层膜制备
  •   3.3 溶血实验
  •   3.4 脂质体的制备
  •   3.5 Native PAGE凝胶的制备
  •   3.6 电泳条件及操作
  •   3.7 切胶回收
  •   3.8 AFM成像
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 刘美君,沈轶,Daniel M Czajkowsky

    关键词: 原子力显微镜,蛋白回收

    来源: 基因组学与应用生物学 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技

    专业: 生物学

    单位: 上海交通大学生物医学工程学院

    基金: 国家自然科学基金(11374207,31370750,31670722,81627801),科技部(2014YQ090709),上海市科学技术委员会(17JC1400804),上海交通大学(YG2014MS28,YG2015QN21,16X120030015)共同资助

    分类号: Q6-33

    DOI: 10.13417/j.gab.038.002706

    页码: 2706-2712

    总页数: 7

    文件大小: 544K

    下载量: 117

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