沙门氏菌LAMP可视化检测方法的建立

沙门氏菌LAMP可视化检测方法的建立

论文摘要

为实现沙门氏菌的快速现场检测,根据沙门氏菌invA基因编码区序列,设计合成1套引物,通过对反应物浓度和反应条件优化,建立了沙门氏菌属特异性LAMP检测方法;通过对invA基因8个区域的6条引物配对进行等温扩增,并在反应体系中加入HNB来指示反应结果,实现了反应的快速闭管检测。灵敏度试验显示,建立的方法可以检出稀释至3.6×10~1 CFU/mL菌液所提取的DNA;特异性试验显示,建立的方法与大肠杆菌DNA、志贺氏菌DNA、布鲁氏菌试管凝集抗原DNA、炭疽沉淀抗原DNA以及猪链球菌2型DNA不发生交叉反应,但能检出鸡白痢、禽伤寒沙门氏菌凝集抗原以及马流产试管凝集抗原提取的DNA;重复性试验显示,3个稀释度菌液DNA的3次重复检测均为阳性;应用试验显示,从经增菌培养的200份进境猴粪拭子样品中检出阳性2份,与细菌分离鉴定检测结果一致。结果表明,所建立的方法敏感性和特异性较高,重复性满足实际要求,可用于进境动物样品的沙门氏菌检测。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 核酸及被检样品
  •     1.1.2 主要试剂和设备
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 引物的设计合成
  •     1.2.2 反应体系优化
  •     1.2.3 反应温度优化
  •     1.2.4 灵敏度试验
  •     1.2.5 特异性试验
  •     1.2.6 重复性试验
  •     1.2.7 进境动物检疫样品检测
  • 2 结果
  •   2.1 反应体系优化
  •   2.2 反应温度试验
  •   2.3 灵敏度试验
  •   2.4 特异性试验
  •   2.5 重复性试验
  •   2.6 送检样品检测
  • 3 讨论
  • 4 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 高志强,汪琳,张灿,任彤,赵相鹏,尹羿,蒲静,史雅然,刘凤华

    关键词: 沙门氏菌,可视化检测,检疫

    来源: 中国动物检疫 2019年02期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 北京检验检疫技术中心,中国人民解放军疾病预防控制所,北京农学院

    基金: 国家重点研发计划项目(2017YFF0210305),北京市科技计划课题(Z171100001317011)

    分类号: S852.61

    页码: 68-72

    总页数: 5

    文件大小: 1328K

    下载量: 315

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