苏小平[1]2003年在《乙型肝炎病毒preS2-S基因（adr亚型）转基因小鼠的建立》文中进行了进一步梳理人类乙型肝炎病毒属嗜肝DNA病毒科，至少有4种亚型：ayw、adr、ayr、和adw。其中adr亚型是中国人的主要流行株，其基因组DNA已被克隆，全长3.2kbp，与其他3种亚型在DNA水平和蛋白水平具有一定差异。HBV基因有4个开放阅读框(open reading frame，ORFs)，其中编码外膜蛋白分子的同一阅读框被两个框内(in-frame)起始密码子分割为preS1、preS2和S。preS／S基因表达L蛋白，包含preS1、preS2和S。preS2-S基因表达M蛋白，包含preS2和S。目前，对中蛋白在乙型肝炎病毒生活周期中的功能及与其它乙型肝炎病毒蛋白间的相互作用尚不清楚。转基因技术是研究基因功能的理想方法。建立表达中蛋白的转基因小鼠将为中蛋白功能的研究提供理想的动物模型。 本研究采用已经构建了的含有CMV启动子和preS2-S基因(adr亚型)开放阅读框的preS2-S基因表达载体pcDNA3-S2-S，酶切鉴定证实载体构建成功，DNA测序证实插入的preS2-S基因序列与报道的序列一致。该载体转染入Hela细胞后，免疫细胞化学检测发现M蛋白可在Hela细胞的细胞质和／或细胞核中表达。将该载体经BglⅡ限制性内切酶线性化后，用原核显微注射法将其注射入受精卵雄原核，制备转基因小鼠，共得到23只存活的新生鼠。经PCR方法检测后获得5只Founder转基因小鼠，转基因整合率为21.7％(5／23)，以抗HBs进行肝组织切片免疫组化检测，3只小鼠呈阳性，阳性率为60％，命名为C57-TgN(preS2-S／adr)SMMU。将该建立者小鼠与正常同系小鼠交配，获得14只小鼠，PCR检测发现8只阳性，阳性率为57.1％(8／14)，将F_1代PCR阳性鼠再和正常同系小鼠交配获得28只F_2代小鼠，PCR检测发现6只阳性，阳性率为21.4％(6／28)。 上述结果表明，目的基因不但可以在转基因小鼠体内稳定地遗传，而且可以在转基因小鼠体内表达目的蛋白。该品系转基因小鼠的建立为研究乙型肝炎病毒中蛋白的功能及基于中蛋白的治疗性DNA疫苗提供了一个候选的动物实验模型。
苏小平, 姚玉成, 訾晓渊, 赵书民, 熊俊[2]2003年在《乙型肝炎病毒(adr亚型)preS2-S基因转基因小鼠的建立》文中研究说明目的 :建立可表达乙型肝炎病毒 (adr亚型 )包膜中蛋白的转基因小鼠品系。 方法 :通过原核显微注射法制备带有乙型肝炎病毒 (adr亚型 ) pre S2 - S基因的转基因小鼠。应用 PCR方法筛选乙型肝炎病毒 pre S2 - S基因转基因首建者 (founder)小鼠 ,再以免疫组织化学法分析乙型肝炎病毒蛋白在这些小鼠中的表达特性 ,PCR和免疫组化均阳性的转基因小鼠与正常同系异性小鼠交配用于传代培育 ,并用 PCR法检测其子代小鼠。结果 :共注射受精卵 6 9枚。选取存活受精卵 5 8枚分别植入 4只假孕小鼠 ,产仔并存活 2 3只。经尾组织 DNA PCR筛选得到 5只整合 pre S2 - S基因的 founder小鼠 ,免疫组织化学法发现其中3只小鼠的肝脏中表达 HBs Ag,进而对其中表达较强的阳性鼠进行保种。结论 :所建立的乙型肝炎病毒 (adr亚型 ) pre S2 - S基因转基因小鼠品系具有表达乙肝病毒中蛋白的生物学特性 ,这一品系的建立为中蛋白的相关研究提供了技术平台
赵书民[3]2002年在《乙型肝炎病毒pres_2-s基因（ayw亚型）转基因小鼠的建立》文中研究表明乙型肝炎病毒表面抗原含有大蛋白、中蛋白和小蛋白叁种蛋白分子。目前对中蛋白在乙型肝炎病毒生活周期中的功能及与其它乙型肝炎病毒蛋白间的相互作用还不清楚。转基因技术是研究基因功能的理想方法。建立表达中蛋白的转基因小鼠将为中蛋白功能的研究提供理想的动物模型。我们利用受精卵原核显微注射技术将含有可表达中蛋白的pres2-s基因(ayw亚型)的真核表达质粒pcDNA3-S2-S注射入C57BL/6小鼠受精卵雄原核中。选取有效的显微注射受精卵58枚植入4只假孕小鼠。产仔18只，存活14只。抽提仔鼠尾组织DNA，PCR筛选得到4只建立者小鼠(F0代)。转基因整合率为28.6% (4/14)。以抗HBs进行肝组织切片免疫组化检测，只有F07号鼠呈阳性，阳性率为25%。以相同的抗体经Western blot法检测F07号鼠血清，证实所表达的蛋白分子量为33kD，从而证实该转基因小鼠表达的蛋白为中蛋白。将该建立者小鼠与正常同系小鼠交配，得到7只F1代鼠，其中6只尾组织基因组DNA PCR检测呈阳性，阳性率为85.6%。6只PCR阳性的F1代小鼠中有4只肝脏免疫组组化检测阳性，阳性率为66.7%。对转基因表达阳性的转基因小鼠进行肝组织活检病理检查未发现明显的病理改变，表明转基因小鼠对目的蛋白处于免疫耐受状态。上述结果表明，目的基因不但可以在转基因小鼠体内稳定地遗传，而且可以在转基因小鼠体内表达目的蛋白。该品系转基因小鼠的建立为研究乙型肝炎病毒中蛋白的功能及基于中蛋白的治疗性DNA疫苗提供了良好的动物实验模型。
参考文献：
[1]. 乙型肝炎病毒preS2-S基因（adr亚型）转基因小鼠的建立[D]. 苏小平. 第二军医大学. 2003
[2]. 乙型肝炎病毒(adr亚型)preS2-S基因转基因小鼠的建立[J]. 苏小平, 姚玉成, 訾晓渊, 赵书民, 熊俊. 第二军医大学学报. 2003
[3]. 乙型肝炎病毒pres_2-s基因（ayw亚型）转基因小鼠的建立[D]. 赵书民. 第二军医大学. 2002