导读:本文包含了病毒复制与包装论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:腺病毒,载体,病毒,逆转录,反式,缺陷,细胞。
病毒复制与包装论文文献综述
刘娜[1]（2018）在《寨卡病毒复制子反式包装系统的构建和药物筛选应用》一文中研究指出Zika virus(ZIKV)是一种虫媒传播病毒,与登革病毒、黄热病毒和西尼罗病毒等都是一个单股正链的RNA病毒,属于黄病毒属,黄病毒科。自1947年4月从发热的哨兵恒河猴的血清中分离后,已经在很多国家和地区引起疫情并且流行开来,与严重的临床表现和先天性畸形有关。但是,目前还没有有效的抗病毒药物和疫苗可以用于ZIKV的临床治疗,因此对于安全有效的ZIKV抗病毒药物和疫苗的研究刻不容缓。复制子系统已经被证明是一个有效的药物筛选工具。在本文中,我们主要开展了以下叁个方面的工作:稳定表达海肾荧光素酶(Rluc)的ZIKV复制子的构建;复制子用于抗病毒药物筛选实验;ZIKV复制子反式包装系统的构建。一、稳定表达海肾荧光素酶(Rluc)的ZIKV复制子的构建在本文中,我们在ZIKV感染性克隆的cDNA基础上构建了一个ZIKV复制子(Rluc-ZIKV-Rep)。在这个复制子中,引入了一个表达海肾荧光素酶的报告基因Renilla luciferase,复制子在细胞中的表达和复制可以通过细胞中的海肾荧光素酶活性和RT-PCR检测到。二、复制子用于抗病毒药物筛选实验在抗病毒药物筛选研究中,我们使用了一些小分子药物,特别是马尼地平和西尼地平。随着这些药物浓度的增加,Rluc-ZIKV-Rep在细胞内的复制呈现剂量依赖的抑制效应。证明我们构建的ZIKV复制子是一个有效的抗病毒药物筛选的工具。叁、ZIKV复制子反式包装系统的构建在本文中,运用反向遗传学的方法构建ZIKV复制子的反式包装系统,通过PCR的方法从ZIKV感染性克隆的cDNA上扩增出ZIKV的结构蛋白基因,构建了一个含ZIKV结构蛋白的真核表达载体——CprME-pcDNA3.1,并通过Western Blot鉴定了其在两种不同细胞(293T和Vero)中的表达。为了制备复制子包装颗粒,我们将复制子和表达结构蛋白的质粒通过共转染和顺次转染的方法转入细胞,使结构蛋白基因和非结构蛋白基因共表达于细胞中。然后,收集细胞上清,继续感染Vero细胞,通过检测细胞中的荧光素酶活性,定量复制子包装出的缺陷型病毒的产量。在此基础上,我们可以通过293T细胞制备出缺陷型的病毒样颗粒,为ZIKV新型疫苗的研究奠定基础。(本文来源于《辽宁大学》期刊2018-05-01）
史利利,蒋彩英,于威,陈琛,蒋磊[2]（2015）在《BmNPV or f98对家蚕核型多角体杆状病毒复制、转录及包装的影响》一文中研究指出为了研究家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)基因orf98的功能,通过λRed重组系统定点敲除BmNPVorf98基因,构建缺失型重组病毒Bm98-ko-Bacmid;以Bac-to-Bac系统补回BmNPVorf98基因,构建补回型重组病毒Bm98-re-Bacmid;将野生型病毒(wtBacmid)、缺失型病毒(Bm98-koBacmid)和补回型病毒(Bm98-re-Bacmid)分别转染家蚕细胞BmN。病毒滴度检测结果显示,Bm98-ko-Bacmid可形成侵染性的病毒粒子,但数量显着降低(P<0.05).透射电子显微镜观察发现,Bm98-ko-Bacmid只产生游离的杆状病毒粒子,数量明显减少,而wtBacmid和Bm98-re-Bacmid产生大量具有囊膜结构的成熟病毒粒子。荧光定量聚合酶链反应分析结果表明,BmNPVorf98基因缺失对BmNPV病毒复制没有影响,而早期基因lef3、晚期基因vp39和极晚期基因p10的转录水平显着降低(P<0.05)。综上所述,BmNPVorf98基因对病毒复制是非必需的,但显着影响病毒的繁殖速度和包装(P<0.05);对病毒各个时期的基因转录也具有重要影响。(本文来源于《浙江大学学报(农业与生命科学版)》期刊2015年06期）
董嘉宁[3]（2014）在《六邻体嵌合型重组5型腺病毒载体复制和包装机理的研究》一文中研究指出重组5型腺病毒(recombinant adenovirus type5, rAd5)作为基因治疗和疫苗载体具有多重优势，然而，预存免疫的存在会显着的降低该种血清型腺病毒载体的转导效率以及转基因表达水平，限制腺病毒作为疫苗以及基因治疗载体的应用。利用基因工程改造腺病毒载体，将rAd5表面主要结构蛋白六邻体的7个高突变区(HVR区)选择性地与稀有血清型六邻体的相应区域相嵌合是帮助rAd5逃避预存免疫的有效方法。限制这一方法的主要问题是这种嵌合改造过程繁琐，而且与rAd5相比，许多嵌合改造的方案都降低了嵌合型腺病毒的包装效率和复制水平，甚至导致改造后的腺病毒不能包装。与此相关的病毒复制和包装机理有待进一步的研究。本论文在课题组前期工作的基础上，首先通过对几种与人D亚群腺病毒(37型、43型)六邻体HVR区嵌合的重组5型腺病毒[Ad5-GFP、Ad5-37(5,7)-GFP、Ad5-43(5,7)-GFP]复制水平的分析，以及对几种六邻体嵌合型重组5型腺病毒骨架质粒[Ad5、Ad5-37(5,7)、Ad5-43(5,7)、Ad5-37(1-7)、Ad5-43(1-7)]蛋白表达量的检测发现，对腺病毒六邻体的改造影响了六邻体在细胞内的丰度和聚集状态，最终导致嵌合腺病毒的复制水平和包装效率的降低。接着，为了更深入地了解嵌合改造的腺病毒六邻体对其生物活性的影响，我们构建了相应的几种嵌合型六邻体的真核表达质粒[5Hexon、5Hexon-37(5,7)、5Hexon-37(1-7)、5Hexon-43(5,7)、5Hexon-43(1-7)]，检测了几种嵌合型六邻体与其伴侣蛋白5型腺病毒L4-100K(5-100K)的相互作用。通过对5-100K对六邻体表达量、形成叁聚体及进入细胞核叁个方面的影响进行检测，我们发现，虽然嵌合改造后的5型腺病毒六邻体都能够在5型L4-100K的帮助下提高表达量，但是不同的改造方案却不同程度地影响了嵌合六邻体在5型L4-100K的帮助下形成叁聚体的效率以及进入细胞核的效率，而这些改变也和嵌合型腺病毒包装重组效率以及复制水平的改变是一致的。最后，我们将5型L4-100K(5-100K)更换成D亚群L4-100K(D-100K)，并重新检测了D-100K与几种嵌合型六邻体[5Hexon-37(1-7)、5Hexon-43(1-7)]的相互作用，发现血清型特异性在嵌合型六邻体形成叁聚体的过程中并不是主要影响因素，进一步确定了HVR区嵌合对腺病毒六邻体自身形成叁聚体的稳定性造成影响，从而改变了嵌合型腺病毒包装重组效率和复制水平。本论文的研究表明，对腺病毒六邻体的嵌合改造影响了六邻体自身形成叁聚体的稳定性，使得嵌合六邻体在其伴侣蛋白L4-100K的帮助下形成叁聚体和进入细胞核参与组装的效率改变，是六邻体的嵌合改造影响腺病毒包装效率和复制水平的主要原因，并且阐明了相关的腺病毒包装机理。另外，通过本论文的研究，我们建立了一种新的有效评价六邻体嵌合方案的平台，即通过检测六邻体与L4-100K相互作用来评价和预测嵌合改造腺病毒六邻体的策略对病毒包装复制影响的快速有效方法。通过该方法能够有效排除影响腺病毒包装复制的嵌合改造方案，大大提高了对腺病毒六邻体进行改造后得到六邻体嵌合型重组腺病毒的成功率。(本文来源于《吉林大学》期刊2014-05-01）
王宏芳,刘扬,李金华,吴嘉慧,李艳博[4]（2013）在《双重靶向条件复制型腺病毒的包装及抗肿瘤作用》一文中研究指出目的构建并包装以人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子调控E1A(CR2区缺失)蛋白表达的肿瘤细胞双重靶向条件复制型腺病毒(conditionally replicating adenovirus,CRAd),并探讨其对肿瘤细胞的抑制作用。方法采用PCR技术扩增hTERT启动子序列,将其克隆至pShuttle-E1A-E1Bp-E1B55K载体(E1A基因CR2区缺失)中,构建重组腺病毒质粒,并转染HEK293细胞进行病毒包装,PCR鉴定;CCK-8法检测重组腺病毒(CRAd.p-hTERT-E1A-E1Bp-E1B55K,简称CRAd.p)对肿瘤细胞的抑制作用。结果 hTERT启动子序列克隆正确;pShuttle-hTERT-E1A-E1Bp-E1B55K经KpnⅠ单酶切可见1 542bp和6 775bp两条电泳带,PCR鉴定得到250、1 148bp和298bp基因片段;CRAd.p经PCR扩增得到250、1 148bp和298bp基因片段,鉴定结果与预期完全相符;CRAd.p感染MCF-7、MDA-MB-231、HepG2和HTC-8细胞72h后与各自对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);CRAd.p感染MDA-MB-231细胞后10～250MOI组细胞吸光度值与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),随着感染时间延长,抑制作用越发明显。结论成功获得对肿瘤细胞具有双重靶向和溶瘤作用的条件复制型腺病毒,为基因治疗的靶向性和有效性提供了可能。(本文来源于《西安交通大学学报(医学版)》期刊2013年03期）
高军,范亚川,王军,熊晓峰,吴友良[5]（2011）在《负载人miR-29a复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定》一文中研究指出目的包装负载人miR-29a前体全长cDNA(pre-miR-29a)的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-miR29a)。方法将pre-miR-29a全基因合成后,插入腺病毒穿梭质粒pDC315,与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE13、Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装重组慢病毒Ad-miR29a,扩增、收集并纯化。对纯化后的Ad-miR29a进行滴度测定、感染性鉴定及PCR鉴定。结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×109 pfu/ml。PCR鉴定Ad-miR29a可扩增出pre-miR-29a特异片段,而对照Ad-LacZ不能扩增出pre-miR-29a特异片段。Ad-miR29a感染人胃癌SGC-7901细胞后,可明显提高miR-29a的表达丰度。结论成功包装了负载miR-29a的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步研究microRNAs在肿瘤发生发展中的作用,以及miR-29a在肿瘤治疗中的价值奠定了基础。(本文来源于《西南国防医药》期刊2011年10期）
熊晓峰,陈陵,范亚川,邹利全,张方征[6]（2011）在《负载hTERT调控相关miR-138复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定》一文中研究指出目的包装负载人端粒酶逆转录酶(hTERT)调控相关miR-138前体全长cDNA(pre-miR-138)的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-miR138)。方法 pre-miR-138全基因合成后插入腺病毒穿梭质粒(pDC315-miR138),与腺病毒包装质粒pBHGloxDel-taE1、3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装Ad-miR138并大量扩增,收集纯化。对纯化后的Ad-miR138进行滴度测定、感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定。结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×1010pfu/mL。电镜可见病毒在HEK293细胞中大量复制。PCR双引物鉴定Ad-miR138可扩增出Ad及pre-miR-138特异片段,而对照Ad-LacZ只能扩增出Ad特异片段,不能扩增出pre-miR-138特异片段。结论成功包装了负载miR-138全长cDNA的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步研究微RNAs(microRNAs)在肿瘤发生、发展中的作用,以及hTERT调控相关miR-138在肿瘤治疗中的价值奠定了基础。(本文来源于《重庆医学》期刊2011年09期）
岳磊[7]（2010）在《登革病毒复制子反式包装系统的建立》一文中研究指出目的：利用反向遗传学操作构建登革病毒复制子的反式包装系统；在此基础上,制备登革病毒单轮感染性颗粒,为登革热新型疫苗的研究奠定基础。方法：1.在登革1型病毒广州分离株基因组全长感染性克隆的基础上,利用重迭PCR扩增获得病毒基因组5’端与GFP融合片段,将其插入病毒基因组中以替换病毒的绝大部分结构基因,并获得带有绿色荧光蛋白的病毒复制子DV1-EGFP-RP。同步构建其致死性突变复制子DV1-EGFP△GDD-RP作为对照。通过报告基因和RT-PCR的方法鉴定病毒复制子的复制特性。2.利用重迭PCR扩增获得DV/JEV嵌合型prME片段,将其插入pcDNA3.1质粒构建相应真核表达载体,转染BHK21细胞后,通过RT-PCR和免疫荧光鉴定登革病毒prME的胞内表达特性。利用超速离心对上清中的病毒样颗粒进行纯化,通过电镜和western blot对其进行鉴定。3.为制备获得复制子包装颗粒,首先将病毒复制子RNA电转BHK-21细胞后,再利用脂质体转染方法将辅助包装质粒导入细胞,以使病毒结构和非结构蛋白共表达于宿主细胞中。利用超速离心获得细胞培养上清中的病毒样颗粒,利用RT-PCR、western blot方法对其复制子包装颗粒的生化组分进行鉴定。最后将该病毒样颗粒接种BHK-21细胞,明确其单轮感染性特征。结果：1.获得了高效表达的含绿色荧光蛋白报告基因的登革病毒复制子载体。2.成功构建了登革病毒prME嵌合质粒pcDV/JEV prME,并制备了分泌性病毒样颗粒。3.制备了具有单轮感染性的登革病毒病毒样颗粒。结论：成功建立了基于登革病毒复制子的反式包装系统,制备了具有单轮感染性的病毒样颗粒,为下一步的研究工作打下良好的基础。(本文来源于《暨南大学》期刊2010-05-15）
王公明,田玉科,田学愎,陈建平,安珂[8]（2006）在《用于包装复制缺陷性腺病毒的低代次293细胞的培养》一文中研究指出目的:建立体外培养低代次293细胞的方法。方法:细胞复苏,将冻存的低代次293细胞于37℃水浴中快速融解,移入75cm~2细胞培养瓶中,加入10mL低代次293细胞培养基,6～8h细胞贴壁后更换培养基。细胞传代,吸出培养基,用1×柠檬酸盐细胞消化液洗2遍,留取0.5mL37℃消化5～10min,待细胞脱壁后加入3mL培养基,轻轻吹匀以1∶2比率传代培养。细胞冻存,以1×柠檬酸盐细胞消化液消化5～10min,细胞脱壁后加入5mL细胞培养基中和消化液,离心收集细胞,以1mL的细胞冻存液(90%FBS+10%DMSO)重悬、冻存。结果:细胞传代后8h细胞完全贴壁;以腺病毒感染质粒感染293细胞14d后可观察到腺病毒空斑形成。结论:该方法操作简便,对细胞损伤小且保持细胞生物学特性不变。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2006年18期）
陈陵,向国春,李向红,蔡永国,李晶晶[9]（2006）在《负载hTERT复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定》一文中研究指出目的:构建负载人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的复制缺陷型腺病毒.方法:将克隆有正义hTERTcDNA的腺病毒穿梭质粒pDC315-hTERT与腺病毒包装质粒pBHGlox-DeltaE1,3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装负载hTERT基因的复制缺陷型腺病毒表达载体(Ad-hTERT).对Ad-hTERT扩增、纯化并浓缩后,进一步行感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定.结果:纯化浓缩后的Ad-hTERT滴度可达5×1012pfu/L.电镜下可见在HEK293细胞中形成的病毒颗粒,PCR双引物鉴定Ad-hTERT可扩增出Ad及hTERT特异片段,而对照则不能扩出hTERT片段.结论:成功构建了负载hTERT基因的复制缺陷型腺病毒.(本文来源于《第四军医大学学报》期刊2006年01期）
陈陵,蔡永国,郑兴春,杨仕明,房殿春[10]（2006）在《负载肝素酶复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定》一文中研究指出目的包装负载人肝素酶(hpa)全长cDNA的复制缺陷型腺病毒载体(Adhpa)。方法将肝素酶正义腺病毒穿梭质粒pDC315hpa与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE1,3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装Adhpa,并大量扩增,收集纯化。对纯化后的Adhpa进行滴度测定、感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定。结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×1010pfu/ml。电镜证实病毒浓缩液中存在病毒颗粒,并可见病毒在HEK293细胞中复制。PCR双引物鉴定Adhpa可扩增出Ad及hpa特异片段,而对照则不能扩增出hpa片段。结论成功包装了负盘。(本文来源于《解放军医学杂志》期刊2006年01期）
病毒复制与包装论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了研究家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)基因orf98的功能,通过λRed重组系统定点敲除BmNPVorf98基因,构建缺失型重组病毒Bm98-ko-Bacmid;以Bac-to-Bac系统补回BmNPVorf98基因,构建补回型重组病毒Bm98-re-Bacmid;将野生型病毒(wtBacmid)、缺失型病毒(Bm98-koBacmid)和补回型病毒(Bm98-re-Bacmid)分别转染家蚕细胞BmN。病毒滴度检测结果显示,Bm98-ko-Bacmid可形成侵染性的病毒粒子,但数量显着降低(P<0.05).透射电子显微镜观察发现,Bm98-ko-Bacmid只产生游离的杆状病毒粒子,数量明显减少,而wtBacmid和Bm98-re-Bacmid产生大量具有囊膜结构的成熟病毒粒子。荧光定量聚合酶链反应分析结果表明,BmNPVorf98基因缺失对BmNPV病毒复制没有影响,而早期基因lef3、晚期基因vp39和极晚期基因p10的转录水平显着降低(P<0.05)。综上所述,BmNPVorf98基因对病毒复制是非必需的,但显着影响病毒的繁殖速度和包装(P<0.05);对病毒各个时期的基因转录也具有重要影响。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
病毒复制与包装论文参考文献
[1].刘娜.寨卡病毒复制子反式包装系统的构建和药物筛选应用[D].辽宁大学.2018
[2].史利利,蒋彩英,于威,陈琛,蒋磊.BmNPVorf98对家蚕核型多角体杆状病毒复制、转录及包装的影响[J].浙江大学学报(农业与生命科学版).2015
[3].董嘉宁.六邻体嵌合型重组5型腺病毒载体复制和包装机理的研究[D].吉林大学.2014
[4].王宏芳,刘扬,李金华,吴嘉慧,李艳博.双重靶向条件复制型腺病毒的包装及抗肿瘤作用[J].西安交通大学学报(医学版).2013
[5].高军,范亚川,王军,熊晓峰,吴友良.负载人miR-29a复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定[J].西南国防医药.2011
[6].熊晓峰,陈陵,范亚川,邹利全,张方征.负载hTERT调控相关miR-138复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定[J].重庆医学.2011
[7].岳磊.登革病毒复制子反式包装系统的建立[D].暨南大学.2010
[8].王公明,田玉科,田学愎,陈建平,安珂.用于包装复制缺陷性腺病毒的低代次293细胞的培养[J].实用医学杂志.2006
[9].陈陵,向国春,李向红,蔡永国,李晶晶.负载hTERT复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定[J].第四军医大学学报.2006
[10].陈陵,蔡永国,郑兴春,杨仕明,房殿春.负载肝素酶复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定[J].解放军医学杂志.2006
论文知识图
