导读:本文包含了重组穿梭质粒论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:质粒,基因,腺病毒,细胞体,菌苗,厌氧菌,卡介苗。
重组穿梭质粒论文文献综述
王淼,倪婷婷,伍生军,赵云,宋建臣[1]（2018）在《猪附红细胞体ENO基因重组腺病毒穿梭质粒的构建及真核表达》一文中研究指出为构建猪附红细胞体ENO基因重组腺病毒穿梭质粒,试验根据GenBank中登录的猪附红细胞体ENO基因序列(登录号:CP002525.1)设计特异性引物,对ENO基因进行PCR扩增,并将纯化后的PCR产物克隆到pMD19-T载体中。用KpnⅠ和XhoⅠ对pMD19T-ENO进行双酶切后,将其亚克隆至腺病毒穿梭载体PCR~259中,构建PCR~259-ENO重组质粒,提取重组质粒进行鉴定。应用脂质体介导转染法将鉴定正确的PCR~259-ENO重组穿梭质粒转染293细胞,应用间接免疫荧光法(IFTA)检测ENO基因在293细胞中的表达。结果显示,试验克隆的ENO基因长为1 182bp,编码393个氨基酸,与GenBank中ENO基因序列(登录号:CP002525.1)同源性为99%。构建的重组腺病毒穿梭质粒PCR~259-ENO经PCR和酶切鉴定正确,并且能在293细胞中表达,表明ENO基因成功插入腺病毒穿梭质粒PCR~259中,重组腺病毒穿梭质粒PCR~259-ENO构建成功。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2018年08期）
陈紫桂[2]（2016）在《滤泡性淋巴瘤BCL-2/IgH基因重组腺病毒穿梭质粒的构建与鉴定》一文中研究指出目的:构建具有感染性的人特异性肿瘤BCL-2/IgH基因的重组腺病毒5型穿梭质粒,为制备表达BCL-2/IgH基因的重组腺病毒奠定基础。方法:TRIZOL法从DoHH2细胞中提取总RNA,RT-PCR法获取BCL-2/IgH融合基因,测序获得BCL-2/IgH融合基因序列,经过NCBI blast后,查找Genebank中的BCL-2基因和Ig H基因序列号,结合上面的测序结果,确定包含有BCL-2基因CDS的BCL-2/IgH基因序列,通过化学方法全基因合成得到BCL-2/IgH目的基因,将BCL-2/IgH目的基因装载到pUC57-Amp质粒,双酶切后与经过同样处理的5型腺病毒穿梭质粒pDC316连接,即构建成pDC316-BCL-2/IgH质粒;行双酶切及测序鉴定。结果:(1)本实验提取BCL-2/IgH目的基因,直接核苷酸序列分析t(14;18)连接处PCR产物,结果显示DoHH2细胞株在J6和BCL-2 MBR有一个j-bcl-2的序列。(2)本实验成功将BCL-2/IgH目的基因亚克隆到pUC57-Amp通用载体,为进一步将外源性目的基因装载到腺病毒载体做准备。(3)BCL-2/IgH目的基因成功构建入5型腺病毒穿梭质粒pDC316中,测序鉴定与Genebank中的序列一致。结论:(1)本实验成功构建与鉴定pDC316-BCL-2/IgH穿梭质粒,为下一步制定表达BCL-2/IGH基因的重组腺病毒奠定基础。(2)本实验成功构建与鉴定pDC316-BCL-2/IgH穿梭质粒,为研究BCL-2/IgH阳性肿瘤的基因免疫靶向治疗提供了基因传递的载体奠定基础。(3)本实验成功构建与鉴定pDC316-BCL-2/IgH穿梭质粒,为套细胞淋巴瘤特异性CCND1/IgH融合基因的靶向性基因治疗研究奠定基础。(本文来源于《遵义医学院》期刊2016-05-01）
王巧稚,韩艺,邹礼乐,赵宏贤,梅欣明[3]（2016）在《人表皮生长因子基因重组腺病毒穿梭质粒的构建和鉴定》一文中研究指出目的:构建含人表皮生长因子(human epidermal growth factor,hEGF)基因的重组腺病毒穿梭质粒,为制备表达EGF基因的重组腺病毒奠定基础。方法:查找Gen Bank中hEGF的基因序列,通过化学方法进行全基因合成得到信号肽+hEGF基因片段,将sp-hEGF基因装载到pUC57质粒,双酶切后与经过同样处理的腺病毒穿梭质粒pYr-ads-6相连,即构建成p Yr-ads-6-hEGF质粒,行双酶切及测序鉴定。结果 :sp-hEGF成功插入腺病毒穿梭质粒pYr-ads-6中,测序鉴定与Gen Bank中的序列一致。结论:hEGF重组穿梭质粒构建成功。(本文来源于《泸州医学院学报》期刊2016年01期）
孟利,杜彩萍,陆淳渊,侯筱宇[4]（2015）在《重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-Akt1构建及鉴定》一文中研究指出目的:构建大鼠Akt1-p Ad Track-CMV腺病毒穿梭质粒并鉴定其蛋白表达。方法:提取SD大鼠海马总RNA,利用RT-PCR方法扩增大鼠Akt1的c DNAs,将其亚克隆入T载体,双酶切鉴定后将其与经过同样处理的腺病毒穿梭质粒载体p Ad Track-CMV连接,经酶切和测序进行鉴定。将p Ad TrackCMV-Akt1转染293细胞,免疫印迹鉴定Akt1的表达。结果:成功克隆出Akt1目的基因,并将其亚克隆入腺病毒穿梭载体p Ad Track-CMV。免疫印迹结果显示,转染p Ad Track-CMV-Akt1的细胞中能检测出Akt1的特异性条带。结论:成功构建重组大鼠Akt1腺病毒穿梭质粒,且其在真核细胞中能高效表达。(本文来源于《生物技术世界》期刊2015年07期）
薛庆节,梁卫平,杨媛媛,陈廷,吕厚东[5]（2014）在《GM-CSF与LMP2A融合基因重组BCG穿梭质粒的构建与鉴定》一文中研究指出目的:构建分泌性表达EB病毒GM-CSF与LMP2A融合基因GCA的卡介苗重组质粒。方法:分别以卡介苗(BCG)和融合基因GCA的eDNA为模板,通过PCR扩增得到139bp的BCGAg85B信号肽序列和1961bp的GCA基因序列。将BCG-Ag85B信号肽序列与大肠杆菌-卡介苗穿梭表达载体pMV261重组,得到重组质粒pMVS,再将融合基因GCA序列亚克隆至pMVS中,得到重组质粒pMV261-GCA,电转化导入BCG,SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹法检测其表达效果。(本文来源于《第九届全国免疫学学术大会论文集》期刊2014-10-18）
郭焕平,贾立军,于龙政,薛书江,高洋[6]（2014）在《犬新孢子虫NcAMA1基因重组腺病毒穿梭质粒的构建及其真核表达》一文中研究指出为构建犬新孢子虫NcAMA1基因重组腺病毒穿梭质粒,并在真核细胞中表达,以重组质粒pVAX1-NcAMA1为模板,PCR扩增了NcAMA1基因,以此构建了pMD18T-NcAMA1重组克隆质粒;对该重组克隆质粒进行双酶切鉴定后,将其亚克隆至腺病毒穿梭载体pCR259中。应用脂质体介导转染法将经PCR鉴定和酶切鉴定正确的pCR259-NcAMA1重组穿梭质粒转染293细胞,应用IFAT和Western-blot技术检测了AMA1基因在293细胞中的表达情况。结果显示,扩增的NcAMA1基因长度为1 695bp,构建的重组腺病毒穿梭质粒pCR259-NcAMA1能在293细胞中获得瞬时表达,表达蛋白的分子质量约为68ku。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2014年03期）
张艳丽,张文卿,王秋波,丁守怡,吕锐[7]（2012）在《重组大肠埃希菌-厌氧梭菌穿梭质粒pIMP1-eIL-12稳定转化生孢梭菌》一文中研究指出目的近些年来,以厌氧芽孢梭菌作为实体瘤基因治疗载体的研究逐渐受到关注。文中用重组人白细胞介素-12(rhIL-12)基因重组大肠埃希菌(E.coli)-厌氧梭菌穿梭质粒pIMP1,并稳定转化生孢梭菌,为增强杀伤肿瘤细胞的研究提供基础。方法用SOE-PCR法将rhIL-12基因连到厌氧梭菌的内源性β1,4-葡聚糖酶(endo-1,4-glucanase,eglA)启动子和信号肽之后,构建融合基因eglAp-rhIL-12,将其插入pIMP1,构建重组质粒pIMP1-eIL-12;重组质粒首先在E.coli DH5α内进行鉴定,然后用电穿孔法转化生孢梭菌;利用红霉素抗性筛选阳性克隆,并提取质粒鉴定阳性克隆。结果酶切和测序结果表明插入到pIMP1内的融合基因eglAp-rhIL-12序列及读框正确;抗生素压力筛选和20多代随机质粒提取酶切鉴定结果表明重组质粒pIMP1-eIL-12已稳定转化生孢梭菌。结论成功获得重组质粒pIMP1-eIL-12及其生孢梭菌稳定转化株,为以后的抗肿瘤研究奠定了基础。(本文来源于《医学研究生学报》期刊2012年09期）
周亚峰,李红霞,蔡思达,程铖,韩莲花[8]（2012）在《穿梭质粒pCDH1-GFP-HCN 4的构建及HCN 4重组慢病毒的包装》一文中研究指出目的将全长约3.6 kb的HCN 4目的基因片段从pCDNA3-HCN 4质粒卸载下来,建立稳定的HCN 4重组慢病毒。方法用Eco RⅠ和XbaⅠ从pCDNA3-HCN 4质粒切下HCN 4目的片段连接到Puc19载体中,再用EcoRⅠ和HindⅢ从质粒Puc19切下目的片段并连接到pcDNA3.1(A)载体中,再用XbaⅠ单酶从质粒pcDNA3.1(A)双切到pCDH1-MCS1-EF1-copGFP中。用XbaⅠ或者Eco RⅠ鉴定,将阳性克隆质粒送上海生工测序,慢病毒的包装参照SBI的Lentivector Expression System操作手册进行。将构建好的慢病毒包装质粒混合物混合后感染293T细胞及心肌样骨髓基质干细胞。结果 (1)XbaⅠ及Eco RⅠ鉴定表明,PCR产物和克隆扩增产物的电泳结果显示该基因的大小约为3.6 kb;阳性克隆质粒测序结果与GENEBANK目的基因HCN 4序列完全相同;构建的目的基因质粒转染293细胞和原代猪骨髓间充质干细胞后,均发现有强烈的绿色荧光出现。(2)构建的慢病毒包装质粒混合物转染293细胞后,发现有强烈的绿色荧光出现,细胞感染率达90%以上。结论 (1)成功将全长HCN 4目的基因片段从pCDNA3-HCN 4质粒卸载下来,成功构建穿梭质粒pCDH1-MCS1-EF1-copGFP。(2)成功建立稳定的HCN 4重组慢病毒,该病毒载体有很高的转染效率。(本文来源于《苏州大学学报(医学版)》期刊2012年03期）
张艳丽,张文卿,王秋波,丁守怡,吕锐[9]（2011）在《重组穿梭质粒pIMP1-eHER2/neu的构建及其生孢梭菌稳定转化株的筛选与鉴定》一文中研究指出目的:制备人原癌基因HER2/neu的细胞外区域(ECD)基因修饰的重组生孢梭菌,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定基础。方法:利用SOE-PCR将HER2/neu ECD基因连接到厌氧菌的内β1,4-葡聚糖酶的启动子和信号肽基因(eg-lAp)下游,构建融合基因eglAp-HER2/neu;将其插入大肠杆菌-厌氧菌穿梭质粒pIMP1,构建重组质粒;首先将重组质粒导入大肠杆菌DH5α内并进行鉴定;然后用电穿孔法将重组质粒导入生孢梭菌。利用红霉素抗性筛选重组生孢梭菌;采用菌液PCR鉴定阳性克隆。结果:酶切和测序结果显示,插入质粒pIMP1内的eglAp-HER2/neu融合基因序列及读框正确。菌液PCR结果表明,重组质粒pIMP1-eHER2/neu成功转化生孢梭菌;经过20多代抗生素压力筛选,重组生孢梭菌仍能稳定携带pIMP1-eHER2/neu。结论:成功制备了重组质粒pIMP1-eHER2/neu生孢梭菌的稳定转化株,为其进一步的抗肿瘤作用研究奠定基础。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2011年11期）
钟蓓,杨玉莹,张西臣,顾玉芳,陈振威[10]（2011）在《布氏杆菌抗原蛋白pbp39基因重组穿梭质粒的构建与鉴定》一文中研究指出为构建融合表达PBP39-P276的E.coli-分枝杆菌穿梭载体,分别以布氏杆菌(Brucella abortus)基因组DNA和PMD 18-T-p276质粒为模板,通过PCR扩增得到约1206bp的pbp39抗原基因和276bp的p276基因序列,将pbp39基因与穿梭表达质粒pMV361重组,得到重组质粒pMV361-pbp39,再将p276基因序列克隆至pMV361-pbp39中,得到重组质粒pMV361-pbp39-p276。质粒pMV361-pbp39-p276经PCR扩增鉴定证实,克隆基因pbp39和抗原基因p276正确插入载体pMV361。重组质粒pMV361-pbp39-p276可望在卡介苗(BCG)中分泌性表达布氏杆菌的免疫保护性抗原蛋白PBP39-P276,该质粒的构建成功为发展新型布氏杆菌疫苗奠定了基础。(本文来源于《长江大学学报(自然科学版)》期刊2011年03期）
重组穿梭质粒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:构建具有感染性的人特异性肿瘤BCL-2/IgH基因的重组腺病毒5型穿梭质粒,为制备表达BCL-2/IgH基因的重组腺病毒奠定基础。方法:TRIZOL法从DoHH2细胞中提取总RNA,RT-PCR法获取BCL-2/IgH融合基因,测序获得BCL-2/IgH融合基因序列,经过NCBI blast后,查找Genebank中的BCL-2基因和Ig H基因序列号,结合上面的测序结果,确定包含有BCL-2基因CDS的BCL-2/IgH基因序列,通过化学方法全基因合成得到BCL-2/IgH目的基因,将BCL-2/IgH目的基因装载到pUC57-Amp质粒,双酶切后与经过同样处理的5型腺病毒穿梭质粒pDC316连接,即构建成pDC316-BCL-2/IgH质粒;行双酶切及测序鉴定。结果:(1)本实验提取BCL-2/IgH目的基因,直接核苷酸序列分析t(14;18)连接处PCR产物,结果显示DoHH2细胞株在J6和BCL-2 MBR有一个j-bcl-2的序列。(2)本实验成功将BCL-2/IgH目的基因亚克隆到pUC57-Amp通用载体,为进一步将外源性目的基因装载到腺病毒载体做准备。(3)BCL-2/IgH目的基因成功构建入5型腺病毒穿梭质粒pDC316中,测序鉴定与Genebank中的序列一致。结论:(1)本实验成功构建与鉴定pDC316-BCL-2/IgH穿梭质粒,为下一步制定表达BCL-2/IGH基因的重组腺病毒奠定基础。(2)本实验成功构建与鉴定pDC316-BCL-2/IgH穿梭质粒,为研究BCL-2/IgH阳性肿瘤的基因免疫靶向治疗提供了基因传递的载体奠定基础。(3)本实验成功构建与鉴定pDC316-BCL-2/IgH穿梭质粒,为套细胞淋巴瘤特异性CCND1/IgH融合基因的靶向性基因治疗研究奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组穿梭质粒论文参考文献
[1].王淼,倪婷婷,伍生军,赵云,宋建臣.猪附红细胞体ENO基因重组腺病毒穿梭质粒的构建及真核表达[J].中国畜牧兽医.2018
[2].陈紫桂.滤泡性淋巴瘤BCL-2/IgH基因重组腺病毒穿梭质粒的构建与鉴定[D].遵义医学院.2016
[3].王巧稚,韩艺,邹礼乐,赵宏贤,梅欣明.人表皮生长因子基因重组腺病毒穿梭质粒的构建和鉴定[J].泸州医学院学报.2016
[4].孟利,杜彩萍,陆淳渊,侯筱宇.重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-Akt1构建及鉴定[J].生物技术世界.2015
[5].薛庆节,梁卫平,杨媛媛,陈廷,吕厚东.GM-CSF与LMP2A融合基因重组BCG穿梭质粒的构建与鉴定[C].第九届全国免疫学学术大会论文集.2014
[6].郭焕平,贾立军,于龙政,薛书江,高洋.犬新孢子虫NcAMA1基因重组腺病毒穿梭质粒的构建及其真核表达[J].中国兽医科学.2014
[7].张艳丽,张文卿,王秋波,丁守怡,吕锐.重组大肠埃希菌-厌氧梭菌穿梭质粒pIMP1-eIL-12稳定转化生孢梭菌[J].医学研究生学报.2012
[8].周亚峰,李红霞,蔡思达,程铖,韩莲花.穿梭质粒pCDH1-GFP-HCN4的构建及HCN4重组慢病毒的包装[J].苏州大学学报(医学版).2012
[9].张艳丽,张文卿,王秋波,丁守怡,吕锐.重组穿梭质粒pIMP1-eHER2/neu的构建及其生孢梭菌稳定转化株的筛选与鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志.2011
[10].钟蓓,杨玉莹,张西臣,顾玉芳,陈振威.布氏杆菌抗原蛋白pbp39基因重组穿梭质粒的构建与鉴定[J].长江大学学报(自然科学版).2011
论文知识图
