（1江苏省兴化市皮肤病性病防治所江苏兴化225700）（2江苏省泰州市药品检验所江苏泰州225700）
【摘要】目的：研究分析高效液相色谱法测定阿昔洛韦尿素乳膏中阿昔洛韦含量效果。方法：2016年8月，应用SUNTEKKromasilC18色谱柱，柱温为25℃，流动相为水-甲醇（90:10），254nm的检测波长，1ml/min的流速，20μl进样量。结果：有统计学意义（P<0.05）无统计学意义（P>0.05）。结论：高效液相色谱法在阿昔洛韦尿素乳膏中阿昔洛韦含量的测定中具有较高的应用价值。
【关键词】高效液相色谱法；阿昔洛韦尿素乳膏；含量
【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2016）36-0118-02
现于2016年8月分析高效液相色谱法测定阿昔洛韦尿素乳膏中阿昔洛韦的含量，取得了一定的成果，其详情如下。
1.一般资料
2016年8月应用高效液相色谱法对阿昔洛韦尿素乳膏中阿昔洛韦含量进行检测，仪器为HP1110型高效液相色谱仪，GB1365B紫外检测器，G1311A进样泵。TU-1901型紫外分光光度仪，C-R6A积分仪。水为纯化水，甲醇为色谱醇，其他化学试剂为分析纯。阿昔洛韦对照品（中国药品生物制品检定所，批号140630-200602），阿昔洛韦尿素乳膏（本院自制，批号为20160427，20160530，20160713）。
2.方法和结果
2.1色谱条件
SUNTEKKromasilC18色谱柱（4.6mm×200mm，0.5μm），柱温为25℃，流动相为水-甲醇（90:10），254nm的检测波长，1ml/min的流速，20μl进样量。
2.2制备对照品溶液
取阿昔洛韦对照品，精密称取12.5mg，将阿昔洛韦置入50ml量瓶中，在该量瓶中加入适量10%氯化钠溶液，震荡量瓶，充分溶解，加入适量10%氯化钠溶液，直至预定刻度，获得阿昔洛韦对照品储备液，该溶液的浓度为250μg/ml。取制备的阿昔洛韦对照品溶液，精密量取2.0ml，置入50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，待用。
2.3制备样品溶液
取阿昔洛韦尿素乳膏，精密称取0.625mg，将阿昔洛韦尿素乳膏置入分液漏斗中，将温度为45℃左右的10%氯化钠溶液置入该分液漏斗中，震荡，充分分散软膏，加入氯仿25ml抽提，静置，分层，在另一个分液器中加入氯仿，将10ml的10%氯化钠溶液加入其中，抽提，将氯仿层去除，与氯化钠溶液合并，置入50ml量瓶中，加入流动相稀释至刻度，静置，滤过，将初滤液去除，取续滤液，精密量取2.0ml置入50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，用0.45μm微孔滤膜滤过，待用。
2.4制备阴性对照溶液
精密称取无阿昔洛韦的空白制剂样品，根据供试品溶液制备方法进行制备。
2.5操作方法
在上述色谱条件下，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性供试品溶液，分别将这些溶液注入色谱仪中，对相应的色谱图进行记录和分析。
2.6线性关系分析
在100ml量瓶中放入对照品储备溶液，精密量取1.0ml，再分别精密量取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml对照品储备溶液，并置入50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇晃，使溶液混合均匀，20μl进样量。根据本次研究色谱条件对峰面积进行测定，进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，对标准曲线进行绘制，并开展回归分析，最终发现阿昔洛韦浓度为2.5～20μg/ml范围内表现为线性关系，回归方程：y=37705x-577.51（r=0.9999）。
2.7精密度试验
取对照品溶液，精密量取20μl，在不同时刻进样，分别为0、2、4、6、8小时，对阿昔洛韦平均峰面积进行测定，测定为376813，结果RSD是0.72%，说明以流动相为溶剂的供试品溶液，8h内呈稳定状态。
2.8重复性试验
精密称取同批样品5分，进行供试品溶液的制备，根据本次研究色谱条件，对阿昔洛韦含量进行测定，测定结果平均含量是97.70%，RSD为0.85%。
2.9回收率试验
根据处方比例，精密称取基质约0.55g，称取尿素0.0625g，取9份，精密称取10mg、12.5mg、15mg阿昔洛韦对照品，在本次研究色谱条件下对回收率进行测定。加入阿昔洛韦量为10.08mg、10.54mg、10.15mg、12.59mg、12.31mg、11.56mg、15.68mg、14.83mg、15.10mg，测得阿昔洛韦含量为9.78mg、10.12mg、9.78mg、12.24mg、11.86mg、11.35mg、15.24mg、14.26mg、14.76mg，对应的回收率分别为97.02%、96.01%、96.35%、97.22%、96.34%、98.18%、97.09%、96.16%、97.75%，获得的平均回收率为96.90%，RSD为0.77%。
2.10测定样品含量
精密称取3批样品，批号分别为20040313、20040127、20040617，进行供试品溶液的制备，根据本次研究色谱条件，对阿昔洛韦含量进行测定，20040313样品中阿昔洛韦含量为98.87%，RSD为1.22%。20040127样品中阿昔洛韦含量为96.21%，RSD为1.31%。20040617样品中阿昔洛韦含量为97.18%，RSD为1.42%。
3.讨论
阿昔洛韦尿素乳膏是阿昔洛韦与尿素以及适量基质而制成的药物，该药物能对水痘-带状疱疹、生殖器疱疹以及单纯疱疹病毒I型、Ⅱ型进行有效治疗[1]。单纯疱疹病毒引起的感染具有较高的危害性，会严重影响患者身体健康和生活质量[2]。而阿昔洛韦尿素乳膏中阿昔洛韦的含量水平直接影响着药物治疗效果，因此，需要应用有效的方法来对该乳膏中阿昔洛韦含量进行有效检测，以提高阿昔洛韦尿素乳膏的质量[3]。采用紫外分光光度法对阿昔洛韦乳膏中阿昔洛韦含量进行测定时，由于尿素、阿昔洛韦分离比较困难，因此，阿昔洛韦测定的含量偏高。不仅如此，采用紫外分光光度法对阿昔洛韦的含量进行直接测量时，无法将部分敷料或其他药物成分的干扰排除，最终使得阿昔洛韦含量的测定受到影响[4]。紫外分光光度采用直接测定的方式来对阿昔洛韦进行测定，而高效液相是通过色谱柱分离作用排除阿昔洛韦制备过程中杂质等物质的干扰，因此，高效测定方式的结果更为精准，有学者指出，在对阿昔洛韦尿素乳膏中的阿昔洛韦含量进行测定时，高效液相色谱法空白基质、尿素并不会对阿昔洛韦测定产生影响，能提高测定结果的准确性。高效液相法能更为准确地将相关物质含量进行定位，能对此类物质的质量进行有效控制，有助于提高药物的质量和安全性。由此可见，高效液相色谱法对阿昔洛韦尿素乳膏中阿昔洛韦含量进行测定时，其具有较高的精密性、准确性，且相关性、重合性均能符合有关要求，所获得的结果比紫外分光光度法更接近真实含量，因此，应用高效液相色谱法进行测定。
【参考文献】
[1]刘海宏，李振武，李宏斌等.高效液相色谱法测定阿昔洛韦眼用凝胶中阿昔洛韦含量[J].中国药业，2011，20(9):22-23.
[2]谢爱丽，王维.HPLC法测定阿昔洛韦乳膏(Ⅱ)中阿昔洛韦的含量[J].海峡药学，2013，25(04):41-42.
[3]朱倩颖，余露山，郑国刚等.盐酸伐昔洛韦的手性分离及其对映体杂质的含量测定[J].浙江大学学报（医学版），2014，16(02):164-167.
[4]李桂华.紫外分光光度法与反相高效液相色谱法测定阿昔洛韦眼用凝胶中阿昔洛韦的含量[J].中国药物经济学，2016，11(9):24-26.