猪脑心肌炎病毒VR-129B株VP2重组蛋白的构建表达及其免疫活性分析

论文摘要

为获得大量猪脑心肌炎VP2基因及蛋白研究的细胞模型,构建pDC315-EMCV-VP2真核表达载体,且将其转染到293T细胞,筛选出阳性质粒进行克隆。EMCV VR-129B株VP2基因序列参照GenBank（登录号:X74312）,利用RT—PCR方法扩增VP2的全基因序列,将其与质粒pDC315经NheI和XhoI双酶切后连接,构建pDC315-EMCV-VP2重组表达质粒,并将其转染至293T细胞。使用荧光定量PCR方法观察pDC315-EMCV-VP2真核表达载体在细胞中的表达情况。双酶切PCR结果获得大小为780 bp的基因片段,测序结果显示与GenBank上已经公布的同名基因（登录号:X74312）序列片段同源性为100%,重组质粒构建成功。实时荧光定量PCR（QPCR）结果显示,重组质粒转染组与空质粒组之间相比,EMCV-VP2基因的表达量显著上调（P<0.001）;在荧光显微镜下观察转染细胞,转染成功部分出现较亮绿色荧光,EMCV-VP2基因表达稳定。从转染细胞中提取重组蛋白与EMCV阳性血清和阴性血清进行ELisa反应,具有较好免疫活性。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 吴云,赵月,吴庆荣,陈柯君,张俊辉,万华印,李茹冰,李健

关键词: 脑心肌炎病毒,重组质粒,转染,免疫活性

来源: 科学技术与工程 2019年34期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅱ辑,基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 广东药科大学药学院,中国科学院大学深圳医院,中国人民解放军南部战区总医院药剂科,广州市众为生物技术有限公司

基金: 国家军队后勤科研项目(CGZ16C009),广州市科技计划(201704020173),深圳市光明区卫生计生局中医药科研项目(2019A01)资助

分类号: S852.651

页码: 116-122

总页数: 7

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