组合代谢调控提高大肠杆菌对氨基苯甲酸产量

组合代谢调控提高大肠杆菌对氨基苯甲酸产量

论文摘要

对氨基苯甲酸是一种重要的有机合成中间体,广泛应用于医药、染料等行业。近年来对氨基苯甲酸作为一种潜在的高强度共聚物单体越来越受到重视。对氨基苯甲酸作为叶酸合成的前体之一,其合成在大肠杆菌体内由叶酸合成途径的pabA、pabB和pabC三个基因负责,催化分支酸合成对氨基苯甲酸。本研究以实验室构建的酪氨酸高产工程菌TYR002作为出发菌株,首先弱化双功能分支酸突变酶/预苯酸脱氢酶TyrA的表达,以减少酪氨酸积累,然后利用3种不同强度的组成型启动子分别调控pabA、pabB和pabC的表达。摇瓶发酵表明不同的组合调控模式下大肠杆菌发酵培养基中的对氨基苯甲酸积累量存在显著差异,最高可获得0.67 g/L的摇瓶发酵产量。进一步通过发酵条件优化和分批补料发酵,在5L发酵罐中获得了6.4g/L的对氨基苯甲酸产量。本研究为改善对氨基苯甲酸生物合成效率提供了重要理论参考。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 菌株与质粒
  •     1.1.2 主要试剂
  •     1.1.3 培养基
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 表达载体的构建
  •     1.2.2 tyrA基因弱化载体pTargetT-TyrA↓的构建
  •     1.2.3 tyrA基因弱化菌株构建
  •     1.2.4 摇瓶发酵与发酵罐补料发酵
  •     1.2.5 代谢产物和菌体量检测
  • 2 结果与分析
  •   2.1 tyrA弱化表达对对氨基苯甲酸生产的影响
  •   2.2 不同强度启动子组合调控pabA、pabB和pabC表达对对氨基苯甲酸合成的影响
  •   2.3 不同发酵温度对对氨基苯甲酸生产的影响
  •   2.4 对氨基酸苯甲酸分批补料发酵生产
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 徐毅诚,路福平,王钦宏

    关键词: 对氨基苯甲酸,大肠杆菌,组合调控,代谢工程,叶酸合成途径

    来源: 生物工程学报 2019年09期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

    专业: 一般化学工业

    单位: 天津科技大学工业发酵微生物教育部重点实验室,中国科学院天津工业生物技术研究所中国科学院系统微生物工程重点实验室,天津科技大学生物工程学院

    基金: 中国科学院重点部署项目(No.KFZD-SW-212-3-1),中国科学院科研仪器设备研制项目(No.YJKYYQ201700233)资助~~

    分类号: TQ921

    DOI: 10.13345/j.cjb.190107

    页码: 1650-1661

    总页数: 12

    文件大小: 1207K

    下载量: 171

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