论文摘要
使用GAP启动子可以实现β-甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的组成型表达。为了提高β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中的产量,本研究通过梯度抗生素浓度筛选法构建了携带多拷贝β-甘露聚糖酶的毕赤酵母菌株,并利用实时荧光定量PCR技术确定了各菌株的拷贝数。考察了不同基因拷贝数对β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中表达的影响,同时研究了不同拷贝数下,培养温度对β-甘露聚糖酶分泌表达的影响。研究获得了β-甘露聚糖酶基因拷贝数为1、3、4、5、7的毕赤酵母重组菌株,结果显示β-甘露聚糖酶的m RNA水平随着拷贝数的增加而升高,β-甘露聚糖酶产量随着拷贝数的增加而提高,其中拷贝数为4时产酶水平最高,是单拷贝菌株的4.04倍,当拷贝数大于4时,酶的产量不再随着拷贝数的增加而增加。培养温度实验结果显示,较低的温度对重组菌株生产β-甘露聚糖酶有促进作用,当温度降低至22°C时,携带4拷贝的重组菌株的酶活是30°C时的3.5倍。为了探索上述实验结果在工业发酵上的应用潜力,我们进行了5 L反应器水平的发酵实验,4拷贝菌株在发酵72 h后,酶活达到2124U/mL。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 唐诗哲,林福来,郑甲,周洪波
关键词: 甘露聚糖酶,基因剂量,定量,毕赤酵母
来源: Journal of Central South University 2019年01期
年度: 2019
分类: 工程科技Ⅱ辑,基础科学
专业: 生物学
单位: School of Minerals Processing and Bioengineering, Central South University,Key Laboratory of Biometallurgy of Ministry of Education
基金: Project(31870115)supported by the National Natural Science Foundation of China,Project(2015JJ5006)supported by the Natural Science of Hunan Province&Changde City Joint Foundation,China,Projects(2015zzts268,ZY2015823)supported by the Fundamental Research Funds for the Central Universities,China
分类号: Q78
页码: 184-195
总页数: 12
文件大小: 797K
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