骆艳秋[1]2003年在《人参叶皂甙对鸡免疫功能调节的研究》文中指出人参作为一种珍贵的中药材，不但在我国的中医中药领域中占有重要地位，而且在日本、朝鲜、前苏联等国家医学中亦颇受重视。近年来，关于人参的药理研究已进入了一个飞跃发展的阶段。大量研究证明人参皂甙是人参的主要活性成分。通过动物实验证明人参皂甙是一种很好的免疫增强剂，它具有扶正固本、增强单核巨噬细胞系统功能，促进特异性抗体的生成和淋巴细胞转化，促进某些淋巴因子的分泌，对天然杀伤细胞-干扰素-白介素-2调节网起正调节作用，并能保护受病毒侵袭的组织细胞。虽然有人报道人参根乙醇提取物对雏鸡有促生长作用，但至今在动物医学上尚未有直接应用的。西洋参茎叶皂甙是从西洋参茎叶中提取的总皂甙，而且证实茎叶中总皂甙含量明显高于根中。吉林省作为人参栽培大省，每年都有许多人参叶作为废弃物而丢弃在田间没有被充分利用。因此开发、利用人参叶具有资源丰富，安全方便，无残留等优点，且含有多种活性成分，具有营养与保健的双重功能，作为添加剂直接饲喂动物，起到防病促生长作用。随着我国加入WTO后绿色生态畜牧业的发展和人们生活水平的不断提高，人参叶在养殖业中的应用前景广阔。本试验的目的是研究人参叶皂甙对鸡免疫功能的调节作用，为开发人参叶在养殖业中的应用提供依据。 试验采用单因子方差分析的试验设计，分成五组，其中1组为对照组，其余为试验组，每组设叁个重复，每个重复20只鸡(2组自1日龄起饲喂含5％人参叶粉的饲料至35日龄；3组于14～20日龄期间每日皮下注射5％人参皂甙生理盐水一次，剂量为20mg／kg；4组于28日～35日龄期间每日皮下注射5％人参皂甙生理盐水一次，剂量为20mg／kg；21日龄时5组皮下注射含人参皂甙的ND油佐剂苗免疫，其余各组皮下注射常规ND油苗免疫)。 35日龄时，1组、2组、4组随机抽取6只鸡，静脉注射大肠杆菌菌液1 ml(菌液含大肠杆菌4×10~6个／ml)。注入大肠杆菌菌液后1h、2h、3h分别采血做平板培养，测其中大肠杆菌数。 60日龄时，从1～3组鸡中各随机抽取10只发育正常的个体，空腹称重，颈动吉林农业大学硕士学位论文人参叶皂武对鸡免疫功能调节的研究脉放血致死，分离并测定胸腺、法氏囊和脾脏等免疫器官的重量和指数. 1组、2组、3组、5组鸡分别于二免前ld、二免疫后7d、14d、21d、28d、35d、42d时，每组随机抽取10只鸡，翅静脉采血0. snil，分离血清，用p一微量血凝抑制试验测定鸡血清中的HI杭体效价. 研究结果表明:与对照组相比，人参叶皂武能促进鸡杭NDV杭体的产生;人参叶皂武对鸡胸腺的发育有一定的促进作用，对鸡脾脏的发育有一定抑制作用，对法氏囊的影响由于给药方式不同而异;人参叶皂武能使鸡单核一巨噬细胞系统吞噬能力增强.
骆艳秋, 尹柏双, 徐文勇, 姜成[2]2008年在《人参叶皂甙对鸡免疫功能调节的研究》文中研究指明[目的]通过对人参叶皂甙对鸡免疫功能的调节作用的研究,为开发人参在养殖业中的应用提供依据。[方法]采用单因子方差分析进行试验设计、分组。不同途径对鸡给以人参皂甙,同时进行ND油苗免疫与含人参皂甙的ND油佐剂疫苗免疫接种;35日龄时,静脉注射大肠杆菌菌液,采集血液做细菌培养,记数;60日龄时,进行增重及免疫器官重量比较;分离不同阶段鸡血清做血凝抑制试验测定鸡血清中的HI抗体水平。[结果]与对照组相比,人参叶皂甙能促进鸡抗NDV抗体的产生,且高效价抗体维持时间长;各组间增重比较差异不显着;人参叶皂甙对胸腺发育有一定促进作用,对脾脏发育抑制,对法氏囊的影响依给药方式不同而异;血液中细菌总数测定结果表明人参叶皂甙能使鸡单核—巨噬细胞系统吞噬能力增强。[结论]人参叶皂甙能促进鸡体内特异性抗体的产生及激活单核—巨噬细胞系统的吞噬能力。
李禹涛[3]2012年在《人参茎叶皂甙提高口蹄疫和新城疫油佐剂疫苗免疫效果的研究》文中提出疫苗是畜牧生产中控制动物传染病的重要工具,但在临床实际中存在疫苗免疫失败和油佐剂疫苗注射困难等现象。我们前期的研究表明,GSLS和油佐剂有协同作用,能提高疫苗的免疫效果。本论文在此基础上,进一步研究GSLS和油佐剂协同作用增强疫苗免疫效果的合适比例,观察GSLS与油佐剂组合增强猪FMD疫苗和鸡ND疫苗的免疫效果,并对油佐剂疫苗添加GSLS后的黏滞度进行了观察。研究结果可为应用GSLS改进动物疫苗提供参考。1.FMD疫苗中添加不同剂量GSLS对小鼠免疫反应的影响目的：观察GSLS对小鼠注射FMD油佐剂疫苗免疫佐剂作用,筛选GSLS对FMD由乳剂疫苗免疫佐剂作用的合适浓度。方法：将56只雌性ICR小鼠随机分为7组,组1小鼠皮下注射0.1ml的FMDV抗原+0.1ml生理盐水,组2-7每组小鼠腹部皮下分别注射含不同浓度GSLS(0、2、4、6、8和10μg/0.2ml)的FMD由乳剂疫苗,小鼠免疫2次,间隔3周。二免后2周采血,用双抗夹心ELISA方法检测血清中FMDV特异性IgG水平。结果：疫苗中添加4、6、8和10μg的GSLS能显着提高小鼠血清中FMDV特异性IgG水平(P<0.05),其中以4μg组的FMDV特异性IgG水平最高。结论：FMD油乳剂疫苗中添加GSLS可显着提高小鼠的FMDV特异性IgG水平,提高的幅度呈剂量依赖关系,以4μg组的幅度最高。2. GSLS对低剂量抗原FMD油乳剂疫苗免疫效果的影响目的：比较FMD全抗原剂量油乳剂疫苗和含GSLS的低剂量抗原油乳剂疫苗对小鼠的免疫效果。方法：将72只ICR小鼠随机分成9组,每组8只小鼠。各组动物皮下注射的实验疫苗组成如下：(1)100μl的FMDV抗原+100μl生理盐水；(2)100μl抗原+100μl油佐剂Oil#10；(3)100μl抗原+100μl油佐剂MC52；(4)～(6)100μl,50μl或25μl抗原+100μl油佐剂Oil#10+GSLS(4μg);(7)～(9)100μl,50μl或25μl抗原+100μl油佐剂MC52+GSLS(4μg)。免疫2次,间隔3周,每次注射的体积为200μl。二免后2周采血,并取脾脏制备脾脏淋巴细胞悬液。用双抗夹心ELISA检测血清中FMDV特异性IgG水平,用MTT法检测经ConA、LPS和FMDV刺激后的淋巴细胞增殖指数,并用RT-PCR方法检测脾脏淋巴细胞经FMDV刺激后的IFN-y和IL-4以及转录因子T-bet和GATA-3中mRNA表达水平。结果：含GSLS的油佐剂疫苗诱导的特异性IgG效价显着高于不含GSLS的油佐剂疫苗(P<0.05)；含GSLS的半剂量抗原的油乳剂疫苗诱导的血清特异性IgG效价高于不含GSLS的全剂量抗原油乳剂疫苗,但无统计学差异显着(P>0.05)；含GSLS的四分之一剂量抗原的油乳剂疫苗诱导的血清特异性IgG效价低于不含GSLS的全剂量抗原油乳剂疫苗,但无统计学差异(P>0.05)。此外,油乳剂疫苗中添加GSLS后,增强了小鼠脾脏淋巴细胞受Con A、 LPS和FMDV刺激产生增殖能力(P<0.05),提高脾脏淋巴细胞受FMDV刺激后IFN-γ、IL-4、T-bet和GATA-3的(?)nRNA表达水平(P<0.05)。结论：油佐剂疫苗中添加GSLS能显着增强小鼠的体液和细胞免疫应答,使仅含一半抗原剂量疫苗诱导的IgG水平到含全剂量抗原诱导的IgG水平。3.FMD油佐剂疫苗中添加不同剂量GSLS对猪的免疫效果目的：观察FMD油佐剂疫苗添加GSLS寸猪的免疫效果。方法：试验一：将48只猪随机分成6组,每头猪颈部分别皮下注射含GSLS为0μg、10μg、20μg、40μg、80μg和160μg的FMD疫苗,免疫2次,间隔3周,每次注射疫苗剂量2ml。在免疫前,免疫后第3、6周前腔静脉采血,用正向间接血凝法检测血清中IHA水平,并分离淋巴细胞,用MTT法检测淋巴细胞增殖。试验二：将24头猪随机分成4组,每头猪颈部皮下分别注射含不同佐剂FMD疫苗(Oil#10,MC52, Oil#10+40μg GSLS, MC52+40μg GSLS),免疫1次,注射体积为2ml。于免疫前,免疫后第3、6周前腔静脉采血,检测血清中IHA效价,IgG和IgG亚类水平。结果：试验一：免疫后3、6周,每个剂量的FMD疫苗中添加40μg GSLS能显着提高猪特异性IHA效价(P<0.05),外周血淋巴细胞受FMDV刺激后产生的增殖能力显着升高(P<0.05),而受Con A刺激后产生的淋巴细胞增殖能力高于对照组,但无统计学差异(P>0.05)。试验二：与不添加GSLS的对照组相比,添加GSLS的油佐剂疫苗组在免疫后3周,IHA效价升高不显着(P>0.05),IgG、IgG1和IgG2水平显着升高(P<0.05)；免疫后6周,血清中IHA效价显着升高(P<0.05),IgG、IgG1和IgG2水平均显着上升(P<0.05)。结论：每个剂量FMD油佐剂疫苗中添加40μg GSLS能显着增强猪的体液免疫和细胞免疫。4.不同剂量GSLS对鸡新城疫油佐剂疫苗免疫的影响目的：观察鸡ND疫苗中添加GSLS对鸡免疫反应的影响。方法：将60只1日龄梅岭土鸡分成5组,每组12只,12日龄时,在每只鸡的胸大肌内分别注射含不同剂量的GSLS (0、2、4、6和8μg)鸡ND油佐剂疫苗,免疫为0.2ml。于免疫前,免疫后1、2和3周经心脏采血收集血样,用血凝抑制试验测定血清HI效价,3周后摘取鸡脾脏,制备脾脏淋巴细胞悬液,采用MTT法检测脾脏淋巴细胞增殖。结果：每剂量疫苗中添加6μg的GSLS,血清HI效价在免疫后1周升高不显着,在免疫后第2周和第3周,显着升高(P<0.05)；免疫后3周,脾脏淋巴细胞对LPS和NDV刺激的增殖反应显着高于对照组(P<0.05),各组脾脏淋巴细胞对ConA刺激的增殖反应之间没有明显差异(P>0.05)；ND疫苗中添加GSLS对鸡的体重不产生显着差异(P>0.05)；各组鸡的疫苗注射部位没有发现明显的局部副作用。结论：ND疫苗中添加GSLS能显着增强鸡的体液免疫和细胞免疫应答水平,并对免疫鸡不产生可见的副作用。5.油佐剂疫苗中添加GSLS对疫苗黏滞性的影响目的：观察油佐剂疫苗中添加GSLS对疫苗黏滞性的影响。方法：将GSLS(30g)溶解在60ml二甲基亚砜中,制备361mg/ml的GSLS储存液(83m1),根据用量将GSLS储存液添加在MC52白油中并搅拌均匀,然后与FMDV抗原混合,采用均质乳化机制备分别制备油相/水相比为1比1(或2比1),吐温浓度分别为0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%和3.0%的油包水型FMD油乳剂疫苗,采用玻璃粘度计测定各组疫苗的黏滞性。结果：当吐温浓度为1.0%和1.5%时,添加4μg/剂量GSLS油佐剂疫苗(1比1)流动时间显着短于对照组(P<0.05)；当吐温浓度为为1.5%和2.0%时,添加4μg/剂量GSLS能显着降低油佐剂疫苗(2比1)流动时间(P<0.05)。结论：油乳剂疫苗中添加GSLS能降低疫苗的黏滞性。综上所述,FMD油乳剂疫苗中添加GSLS可显着提高小鼠血清特异性IgG水平,提高的幅度呈剂量依赖关系,以4μg组的幅度最高；FMD油佐剂疫苗中添加GSLS(?)显着增强小鼠血清FMDV特异性IgG水平和淋巴细胞增殖转化指数,增强使仅含一半抗原剂量疫苗诱导的IgG水平到含全剂量抗原诱导的IgG水平,说明GSLS增强小鼠对低剂量抗原疫苗的免疫应答；FMD疫苗中添加40μg的GSLS能显着增强猪血清IHA,IgG和IgG亚类水平,增强淋巴细胞增殖指数,表明GSLS对猪FMD疫苗具有较好的免疫佐剂作用；ND疫苗中添加6μgGSLS能显着增强鸡血清HI效价和淋巴细胞增殖转化指数,并且没有对免疫鸡产生明显可见的副作用,说明GSLS能通过增强鸡的体液免疫应答和细胞免疫应答来发挥免疫佐剂作用；当吐温浓度为1.0%和1.5%时,添加4gg/剂量GSLS由佐剂疫苗(油/水=1：1)流动时间显着短于对照组(P<0.05)；当吐温浓度为为1.5%和2.0%时,添加4Pg/剂量GSLS能显着降低油佐剂疫苗(油/水=2：1)流动时间(P<0.05),说明油乳剂疫苗中添加GSLS能降低疫苗的黏滞性。
翟利娟[4]2011年在《口服人参茎叶皂甙对鸡的疫苗免疫增强作用的研究》文中指出动物传染病给养殖业造成严重的经济损失,是人们普遍关注的问题。虽然疫苗免疫接种是防治动物传染病的一个重要手段,但在很多情况下动物接种疫苗后不能产生有效的免疫应答。为了提高疫苗免疫效果,常在疫苗中添加佐剂。迄今,已有100多种物质被报道有佐剂作用,从中药人参(Panax ginseng C. A. Meyer)干燥根中提取的皂甙成分人参皂甙(GS)是其中之一。前期研究亦表明,GS对猪细小病毒病疫苗、猪丹毒菌疫苗和奶牛金黄色葡萄球菌疫苗均有具有免疫佐剂作用。但是GS成本较高,难以在畜牧业生产上推广应用。化学分析表明,人参的茎、叶、花蕾和果实等地上部分中亦含有与人参根中相似的皂甙类成分,并且人参茎叶中皂甙(ginseng stem-and-leaf saponins, GSLS)含量明显高于人参根中皂甙的含量。药理试验表明,GSLS与人参根皂甙(GS)具有相似的药理作用。GSLS价格相对低廉,因而开发利用研究人参地上部位来源的皂甙成分,尤其是GSLS具有更高的经济价值。本论文通过研究口服GSLS对于鸡免疫新城疫弱毒疫苗的免疫效果,确定出合理的给药方法。在此基础上研究口服GSLS对新城疫和禽流感灭活疫苗的免疫效果。论文还从体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫角度探讨口服GSLS对鸡免疫增强作用的机制,从而为养鸡生产上推广应用GSLS提供依据。试验一、口服不同剂量GSLS对鸡滴鼻免疫新城疫弱毒苗引起的抗体水平的影响目的研究口服不同剂量GSLS对鸡滴鼻免疫新城疫弱毒(NDV)苗后其抗体水平的影响,观察其量效关系,确定口服GSLS的有效剂量范围。方法健康1日龄海兰蛋公雏84只,随机分为6组,每组14只。组1～4,在疫苗免疫前口服不同剂量的GSLS(2.5、5、10、20 mg/kg BW),饮水给药,连用3天；组5,免疫前口服10 mg/kg BW的盐酸左旋咪唑,饮水给药,连用3天；组6,免疫前不给药。在第14和28日龄给鸡滴鼻接种鸡新城疫Ⅳ系弱毒苗(LaSota株)。分别于免疫前和免疫后7、14、21、28和35天给动物称重、采血,分离血清,检测血清中血凝抑制效价(HI)。结果和结论与对照组相比,口服5 mg/kg BW GSLS可显着增强鸡血清NDV特异性HI效价(P<0.01),而口服左旋咪唑虽然在数值上增加了HI效价,但无统计学差异(P>0.05)。因此,在以后试验中选择5 mg/kg BW的GSLS给药剂量。试验二、口服不同天数GSLS对鸡滴鼻免疫新城疫疫苗引起的抗体水平的影响目的研究口服不同天数GSLS对鸡滴鼻免疫新城疫疫苗后其抗体水平的影响,观察其时效关系,确定口服GSLS的最佳天数。方法健康1日龄海兰蛋公雏120只,随机分为6组,每组20只。组1-3,在疫苗免疫前分别饮水给药GSLS 3、5、7天,剂量为5 mg/kg BW；组4,疫苗免疫前饮水口服盐酸左旋咪唑3天,剂量为10 mg/kgBW；组5,免疫前不给药,组6,不免疫也不给药。免疫方法与试验一相同。分别于免疫前和免疫后7、14、21、28和35天,采血,分离血清,检测血清中HI效价。结果和结论与对照组相比,口服不同天数GSLS均可显着增强鸡血清NDV特异性HI效价(P<0.05或P<0.01),不同给药天数增强HI效价的水平从高到低依次为：7天>5天>3天。因此,后来我们选择饮水口服GSLS 7天,剂量为5 mg/kg BW进行试验。试验叁、免疫前、后口服GSLS对鸡滴鼻免疫新城疫疫苗引起的免疫反应的影响目的研究免疫前、后口服GSLS对鸡滴鼻免疫新城疫疫苗引起的免疫反应的影响,从而确定口服GSLS最佳给药时间,并探讨口服GSLS免疫增强作用的机制。方法健康1日龄海兰蛋公雏88只,随机分为4组,每组22只。组1-2,在免疫前或者免疫后饮水口服GSLS 7天,剂量为5 mg/kg BW；组3,免疫但不给药,组4,不免疫也不给药。疫苗免疫方法同试验一。分别于免疫前和免疫后7、14、21、28和35天,采血,分离血清,检测血清HI效价。并于二免后2周和4周,处死鸡后取脾脏,分离脾淋巴细胞,用MTT法检测淋巴细胞增殖情况。二免后4周,取鸡十二指肠和空肠置中性甲醛溶液固定,采用免疫组化(IHC)及H.E.染色检测鸡小肠中IgA阳性细胞面积和肠内皮淋巴细胞(iIEL)数目。结果和结论与对照组相比,免疫前口服GSLS可显着增强鸡的血清HI效价,脾脏淋巴细胞对NDV的刺激指数,小肠IgA阳性细胞面积和小肠绒毛中ilEL的数目(P<0.05或P<0.01)；并且免疫前口服GSLS试验组在血清HI效价、脾脏淋巴细胞对NDV的刺激指数和小肠绒毛中ilEL的数目等多项指标上,要显着高于免疫后口服GSLS试验组(P<0.05)。因此,本试验结果表明免疫前口服GSLS对鸡的增强免疫效果要优于免疫后给药。免疫前口服GSLS不仅可以提高机体全身免疫功能,还可促进局部黏膜免疫功能。试验四、口服GSLS对鸡免疫新城疫灭活疫苗后抗体水平的影响目的评价饮水口服GSLS对鸡免疫鸡新城疫灭活疫苗后抗体水平的影响。方法健康1日龄海兰蛋公雏50只,随机分为2组,每组25只。组1,在免疫前连续饮水口服GSLS 7天,剂量为5 mg/kg BW；组2,免疫但不给药,为对照组。两组鸡在第14和35日龄进行胸肌注射接种鸡新城疫灭活疫苗(LaSota株)。于免疫前和免疫后7、14、21、28、35、42和49天采血,分离血清,检测血清HI效价。结果与结论与对照组相比,免疫前口服GSLS可显着增强鸡血清HI效价(P<0.05或P<0.01),表明免疫前口服GSLS对鸡ND灭活疫苗免疫具有增强作用。试验五、口服GSLS对鸡免疫禽流感灭活疫苗引起的抗体水平的影响目的评价饮水口服GSLS对鸡免疫鸡禽流感灭活疫苗后抗体水平的影响。方法健康28日龄海兰蛋鸡7500只,随机分为2组,每组3750只。组1,在免疫前连续饮水口服GSLS 7天,剂量为5 mg/kg BW；组2,免疫但不给药,为对照组；两组鸡于第35日龄颈部皮下注射鸡禽流感灭活疫苗(H5N1亚型)。于免疫前和免疫后2、9、16、23、49、56和63天,每组随机对45只鸡采血,分离血清,检测血清特异性HI效价。结果与结论与对照组相比,免疫前饮水口服GSLS均可显着增强鸡血清特异性HI效价(P<0.05或P<0.01),表明免疫前口服GSLS对鸡免疫禽流感灭活疫苗同样具有免疫增强作用。综上所述,饮水口服GSLS对鸡免疫鸡新城疫弱毒疫苗、鸡新城疫灭活疫苗和禽流感灭活疫苗均具有免疫增强作用。给鸡饮水口服GSLS(5 mg/kg BW)7天可显着提高鸡疫苗免疫后血清特异性HI效价、脾脏淋巴细胞增殖反应、小肠IgA阳性细胞面积及小肠上皮内淋巴细胞数目。疫苗免疫前给药效果要优于免疫后给药。本研究结果对于在养鸡生产上采用人参茎叶皂甙提高鸡的免疫效果具有重要实用价值。
曹发昊[5]2012年在《复方人参皂甙纳米乳的制备及其免疫增强作用的研究》文中研究表明目的：本研究通过纳米技术将人参皂甙（GS）和盐酸左旋咪唑（LH）组合成复方人参皂甙（GS-LH-NE），对其处方组成、质量性能、生物安全性以及免疫增强作用进行研究，旨在提高GS和LH稳定性的同时，开发一种复方免疫增强剂，减少LH用量，从而降低其毒副作用和药物残留。方法：（1）样品用甲醇超声处理后，过树脂将GS和LH分离，建立GS-LH-NE药物含量检测方法。（2）利用伪叁元相图考察不同纳米乳体系的形成情况，根据纳米乳区大小、纳米乳稳定性以及对药物的溶解能力，筛选出GS-LH-NE药用空白纳米乳配方；然后通过脾淋巴细胞增殖和单核巨噬细胞碳廓清试验，研究不同含药量纳米乳对免疫抑制小鼠的免疫增强作用，从中筛选出免疫增强作用较好的含药纳米乳作为GS-LH-NE处方，并对其进行质量评价。（3）通过家兔皮肤和肌肉刺激试验、小鼠急性毒性试验，考察GS-LH-NE生物安全性。（4）将免疫抑制小鼠分为：正常对照组、模型对照组、空白纳米乳组、LH-NE组、GS-NE组、GS-LH水溶液组、GS-LH-NE高、中、低剂量组，对其细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫的相关指标进行检测，研究GS-LH-NE中GS和LH合用的免疫增强效果。（5）将卵清白蛋白（OVA）免疫小鼠分为：正常对照组、OVA对照组、空白纳米乳组、LH-NE组、GS-NE组、GS-LH水溶液组、GS-LH-NE高、中、低剂量组，对其血清抗体及其亚类水平、脾淋巴细胞增殖活性、脾细胞因子产生、NK细胞活性进行检测，研究GS-LH-NE灌胃对抗原免疫的增强作用。（6）从脾淋巴细胞增殖、脾淋巴细胞因子产生以及腹腔巨噬细胞能量代谢、吞噬活性及其效应分子产生等方面，研究GS-LH-NE体外对小鼠主要免疫细胞的作用。结果：（1）比色-分光光度法测GS含量：平均回收率及其RSD分别为98.86%和0.38％，重复性试验RSD为0.46%，日内和日间精密度RSD分别为0.73%和2.38%；高效液相色谱法测LH含量：平均回收率及其RSD分别为99.02%和0.40％，重复性试验峰面积和保留时间的RSD分别为0.34%和0.77%，日内和日间精密度RSD分别为1.01%和2.03%。（2）GS-LH-NE处方为Solutol HS-15/甘油/PEG400/肉豆蔻酸异丙酯/蒸馏水（质量比为25.33:10.14:2.53:6:56），GS和LH含量分别为30.15mg/mL和30.04mg/mL。它是黄色透明O/W纳米乳，液滴呈球形，平均粒径为23.08nm，粒度分散指数为0.237，浊点为75.4℃，pH为5.67；稳定性好，有效期为18个月。（3）GS-LH-NE一次性或多次用药对完整皮肤和破损皮肤均无刺激；GS-LH-NE对股四头肌刺激反应级最高与最低之差小于2，刺激反应总分为2；GS-LH-NE对小鼠灌胃半数致死量为402.85mg/kg。（4）GS-LH-NE对免疫抑制小鼠免疫增强作用的研究GS-LH-NE中剂量组脾脏指数和胸腺指数与模型对照组比较均显着升高；较LH-NE组分别显着增加56.71%和52.76%；较GS-NE组分别显着增加52.98%和56.70%；较GS-LH水溶液组分别显着增加21.23%和20.63%；与高、低剂量比较均显着升高。GS-LH-NE中剂量组迟发型超敏反应耳重差和ConA诱导脾淋巴细胞增殖的刺激指数与模型对照组比较均显着升高；较LH-NE组分别显着增加43.02%和44.27%；较GS-NE组分别显着增加46.88%和47.66%；较GS-LH水溶液组分别显着增加18.50%和18.13%；与高、低剂量组比较均显着升高。GS-LH-NE中剂量组LPS诱导脾淋巴细胞增殖的刺激指数、血清溶血素水平和抗体形成细胞水平与模型对照组比较均显着升高；较LH-NE组分别显着增加41.27%、64.39%和41.88%；较GS-NE组分别显着增加35.88%、51.81%和39.17%；较GS-LH水溶液组分别显着增加16.34%、24.01%和22.75%；与高、低剂量组比较均显着升高。GS-LH-NE中剂量组单核巨噬细胞吞噬指数、腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数、血清溶菌酶水平和脾NK细胞杀伤率与模型对照组比较均显着升高；较LH-NE组分别显着增加33.97%、43.32%、38.46%、39.12%和36.49%；较GS-NE组分别显着增加37.80%、47.22%、44.00%、44.85%和40.69%；较GS-LH水溶液组分别显着增加14.84%、20.87%、18.03%、16.79%和14.96%；与高、低剂量组比较均显着升高。（5）GS-LH-NE对OVA免疫小鼠免疫增强作用的研究GS-LH-NE中剂量组IgG、IgG1和IL-4水平与OVA对照组和低剂量组比较均显着升高；与GS-NE组、GS-LH水溶液组、高剂量组比较均有所升高，但差异均不显着；较LH-NE组分别显着增加31.09%、45.63%和67.62%。GS-LH-NE中剂量组IgG2a和IFN-γ水平与OVA对照组比较均显着升高；较LH-NE组分别显着增加32.75%和40.94%；较GS-NE组分别显着增加34.46%和49.59%；较GS-LH水溶液组分别显着增加11.27%和11.90%；与高、低剂量组比较均显着升高。GS-LH-NE中剂量组ConA、OVA诱导脾淋巴细胞增殖的刺激指数和脾NK细胞活性与OVA对照组均显着升高；较LH-NE组分别显着增加35.96%、39.07%和31.44%；较GS-NE组分别显着增加39.64%、35.48%和36.16%；较GS-LH水溶液组分别显着增加11.91%、15.38%和16.40%；与高、低剂量组比较均显着升高。GS-LH-NE中剂量组LPS诱导脾淋巴细胞增殖的刺激指数与OVA对照组和低剂量组比较显着升高；较LH-NE组显着增加30.41%；与GS-NE组、GS-LH水溶液组和高剂量组比较有所升高，但差异不显着。（6）GS-LH-NE体外对脾淋巴细胞的作用：GS-LH-NE在3.13～12.50μg/mL既能单独又能协同ConA或LPS显着促进脾淋巴细胞增殖，促进脾淋巴细胞产生IL-2和IFN-γ，并且GS-LH-NE在3.13和6.25μg/mL时对脾淋巴细胞免疫功能的增强作用显着强于GS-LH水溶液。GS-LH-NE体外对腹腔巨噬细胞的作用：GS-LH-NE在1.57～6.25μg/mL能显着提高巨噬细胞的能量代谢水平和吞噬活性，促进巨噬细胞产生NO和IL-1β，并且GS-LH-NE在1.57μg/mL时对巨噬细胞免疫功能的增强作用显着强于GS-LH水溶液。结论：（1）GS和LH含量检测方法的回收率、重复性和精密度均能满足要求，为GS-LH-NE的制备及其质量评价提供了可靠的质检方法。（2）GS-LH-NE处方为Solutol HS-15/甘油/PEG400/肉豆蔻酸异丙酯/蒸馏水（质量比为25.33:10.14:2.53:6:56），GS和LH含量分别为30.15mg/mL和30.04mg/mL，是黄色透明的水包油纳米乳，平均粒径为23.08nm，有效期为18个月。（3）GS-LH-NE对皮肤和肌肉无刺激，对小鼠灌胃半数致死量为402.85mg/kg。（4）GS-LH-NE中GS和LH合用能协同增强免疫抑制小鼠的细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫功能，并且其免疫增强作用显着强于GS-LH水溶液；其免疫增强作用和其剂量呈“钟罩”型量效关系。（5）GS-LH-NE灌胃能诱导OVA免疫小鼠产生Th1/Th2混合型免疫反应，增强其细胞免疫、体液免疫以及NK细胞活性；其免疫增强作用和剂量呈“钟罩”型量效关系。GS-LH-NE对细胞免疫和NK细胞活性的增强作用显着强于LH-NE、GS-NE和GS-LH水溶液；对体液免疫的增强作用显着强于LH-NE，较GS-NE和GS-LH水溶液有所增强，但无统计学意义。（6）GS-LH-NE在一定浓度范围内能增强淋巴细胞和巨噬细胞的免疫功能，并且其作用显着强于GS-LH水溶液。GS-LH-NE是一种稳定、安全、有效的复方免疫增强剂，提高了药物的免疫增强效果，有助于减少LH用量，从而降低其毒副作用和药物残留，可用于增强免疫低下机体的免疫功能和抗原的免疫效果。
王云皓[6]2014年在《人参茎叶皂甙制剂的安全性评价》文中研究指明人参皂甙具有广泛的免疫调节作用。但从人参根中提取皂甙成本过于高昂，难以在畜牧业生产上推广。化学分析和药理试验表明，人参茎叶皂甙，即本文使用的益气扶正颗粒的主要成分，与人参根皂甙具有相似的药理作用。因此，开发利用人参地上部位来源的皂甙很有意义。为探究该药物在畜牧养殖业上使用的安全性，本文设计了3个试验，为进一步开发提供依据。目的：通过研究该药物经口给药的急性、亚慢性毒性以及对靶动物的影响，评价其安全性。方法：1)急性毒性试验：将体重约20g清洁级ICR小鼠40只均衡分为试验组和对照组，每4小时分别以最大溶解浓度(1.3g·mL-1)的药物或蒸馏水0.6mL灌胃，连续3次。给药后观察14天。记录给药前以及给药后第7、14天时小鼠的体重。观察心、肝、脾、肺、肾、脑等脏器的病理变化；2)亚慢性毒性试验：约200g清洁级SD大鼠80只，均衡分为4组，连续7天分别灌服0、0.1、4.875和9.75g·kg体重-1剂量药物。停药后，连续四周记录体重，然后进行血常规及血生化指标检测以及对试验动物的心、肝、脾、肺、肾等主要脏器进行病理学检查；3)靶动物安全性试验：约35g SPF级白羽蛋鸡120羽，均衡分为4组，连续7天分别以0、0.05、0.25和0.5g·kg体重-1剂量混饮给药。停药后，连续四周记录体重，然后每组鸡随机选取10羽，于第7、14、21天颈静脉采血进行白细胞分类计数以及血生化指标检测。观察心、肝、脾、肺、肾等脏器的病理变化。结果：1)急性毒性试验：试验期内，试验组小鼠无明显异常现象发生；给药14天内小鼠未出现死亡；试验组小鼠体重与对照组相比无显着差异。尸检心、肝、脾、肺、肾、脑均无明显组织学变化，病理组织学检查也未见明显异常；2)亚慢性毒性试验：试验期内，大鼠行为无明显异常。血液学和血液生化指标也未见异常。试验动物的心、肝、脾、肺、肾均无明显组织学变化；3)靶动物安全性试验：试验期内，动物全身状况、行为活动和排泄物等均无明显异常；白细胞分类计数和血生化指标亦无明显异常；试验动物的心、肝、脾、肺、肾均无明显组织学变化。结论：在养殖生产上使用益气扶正颗粒提高鸡的免疫力是安全可行的。
孔祥峰[7]2003年在《中药成分对细胞增殖、病毒感染和抗体生成的影响》文中研究表明本研究完成了国家自然科学基金资助项目“中药成分的免疫增强作用和机理及新型免疫增强剂的研究”的部分工作，试验分为五部分： 1．中药成分提取和含量测定 选定黄芪多糖(APS)、当归多糖(CAPS)、板蓝根多糖(IRPS)、淫羊藿多糖(EPS)、蜂胶多糖(PPS)、黄芪黄酮(AF)、淫羊藿黄酮(EF)、蜂胶黄酮(PF)、黄芪皂甙(AS)和人参皂甙(GS)为研究对象。其中，GS购自吉林省亚成制药厂(含量75％)，其余九种中药成分自备。五种多糖用水煎醇沉法提取，硫酸蒽酮法测定含量；AF和EF用聚酰胺柱层析法提取，PF用酸碱沉淀法提取，均用芦丁法测定含量；AS用大孔吸附树脂柱层析法提取，TLC分光光度法测定含量。九种中药成分的提取率(g·Kg~(-1))分别为13.6、14.5、10.0、4.1、36.0、2.1、5.7、11.0、1.0，净含量(％)分别为82.48、77.28、82.94、66.38、51.41、1.39、38.37、46.92、72.88。 2．中药成分对鸡胚成纤维细胞(CEF)安全浓度的测定 将十种中药成分用细胞维持液分别稀释成一系列浓度，以两种方式(与细胞同时和细胞形成单层后)加入到培养的CEF中，通过测定细胞OD值和观察细胞形态学的变化判定安全浓度的范围。结果表明，各中药成分的最大安全浓度(μg．mL~(-1))分别为APS，1600；CAPS，1200；IRPS，600；AS，150；GS，120；PPS和EPS，40；EF和PF，20；AF，2.5。 3．中药成分对CEF增殖的影响 将十种中药成分分别稀释成安全浓度范围内的五种浓度，分别与CEF同时加入和CEF培养24 h后加入培养板，前者在加药后24、36、48、60、72 h、后者在加药后12、24、36、48、60 h用MTT法测定细胞OD值的动态变化，判定各中药成分对CEF增殖的影响。结果表明，同时加药时，所有成分均显着促进CEF增殖；细胞形成单层后加药时，As、APS、IRPS和PF促进细胞增殖，EPS抑制细胞增殖，其余五种成分在一定的浓度和时间点促进或抑制细胞增殖，且显示一定的量效和时效关系。 4．中药成分对病毒感染细胞能力的影响 将中药成分(浓度同3)和新城疫病毒以叁种方式加入(先加入中药后接种病毒、先接种病毒后加入中药、中药与病毒混合感作后加入)到培养的CEF中，通过测定CEF OD值的变化评价各中药成分对病毒的感染细胞能力的影响。结果表明，几乎所有中药成分均能一定程度地抑制病毒感染细胞能力，其作用由强到弱的顺序依次为：AS＞PPS＞EF＞IRPS＞APS、AF＞CAPS＞EPS、PF、GS，且与浓度有一定的相关性；不同中药成分的作用机理不同，或直接杀灭病毒，或 中药成分对细胞增殖、病毒感染和抗体生成的影响 通过提高细胞抵抗力抑制病毒感染，或二者兼有。 5．中药成分对 ND疫苗免疫后抗体生成的影响用新城疫 IV系疫苗免疫雏鸡，试 验 1先免疫，然后分别注射高、低剂量的 CAPS、APS、IRPS、EPS、PPS、EF、PF、AS 和站等丸种中药成分，连续 3 k，分别于免疫后第 7、14、21、35天采血；试验 2 先用药（种类和剂量同试验1）3天，然后首免，两周后二免，于首免后第7、14、21、 28、35和49天采血。用卜微量法监测血清中血凝抑制杭体效价的动态变化．结果表 明，九种中药成分均能不同程度地提高抗体效价，且与给药时间、剂量和免疫次数有 一定的关系．
张红[8]2008年在《壳聚糖、人参皂甙和山楂提取物对小鼠免疫功能的影响》文中研究表明目的:健康与保健是二十一世纪全球最为关注的问题之一,随着人们生活水平的改善,对健康关注意识的增加,以中药为主要功效成分的保健食品层出不穷,这样的保健食品更是成为当前社会的热点。我们对壳聚糖、人参皂甙和山楂提取物复合制剂对小鼠免疫功能的调节作用进行了初步的分析,观察其效果,以期达到生活保健和临床应用的目的。方法:将小鼠随机分组,分为高剂量组(壳聚糖400mg/kg,人参皂甙360mg/60kg,山楂提取物200mg/kg),中剂量组(壳聚糖200mg/kg,人参皂甙200mg/60kg,山楂提取物100mg/kg),低剂量组(壳聚糖100mg/kg,人参皂甙50mg/60kg,山楂提取物50mg/kg),以及对照组。每组动物10只,雌雄各半,彼此分开,每天灌胃一次,连续30天。对照组给予同等数量的生理盐水。利用用药前后脾脏和胸腺与体重之比测定药物对此的影响情况;利用MTT法检测用药后各组T淋巴细胞增殖情况;用半体内法检测用药后巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况。结果:各剂量组药物对小鼠的胸腺指数影响均不明显;高剂量组和中剂量组与对照组相比脾指数有所增高。与空白对照组相比,中、高剂量组的ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力有所增高。和中、高剂量组小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬率与对照组比较分别有所提高。中、高剂量组小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬指数与对照组比较分别有所提高。该药物能提高巨噬细胞吞噬能力,从而对机体的免疫功能具有一定的调节作用。腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数、高剂量的作用较为明显。结论:研究结果证实,壳聚糖、人参皂甙和山楂提取物能提高小鼠巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数,表明该药物对正常机体的免疫功能具有增强作用。B淋巴细胞具有体液免疫活性,T淋巴细胞具有细胞免疫活性。胸腺是T淋巴细胞发育分化成熟的场所;脾脏是T、B淋巴细胞移居和接受抗原刺激后产生免疫应答的场所。胸腺和脾脏与机体免疫密切相关。试验结果表明该药物能使脾脏的重量增加,对机体免疫有一定的促进作用。ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验表明淋巴细胞增殖能力分别有所升高,表现为显着性差异,有统计学意义,表明该药物能够提高ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力。
邓茉香[9]2006年在《增强免疫力、缓解体力疲劳保健饮料的研究与开发》文中认为本文基于传统中医药学、现代营养医学和生命科学等综合学科,将动、植物活性成分和维生素、矿物质等营养元素配伍,研制出具有增强免疫力、缓解体力疲劳的复合保健饮料。从本饮料具有的缓解体力疲劳和增强免疫力功能出发,研究功效成分与功能的关系、各成分配伍科学依据、功效成分用量与安全性、功效用量间的关系等,确定本保健饮料选用的主要原料为:西洋参、黄芪、蜂王浆、牛磺酸等。通过保健饮料生产工艺的研究,得到:一、保健饮料主要植物活性成分的最佳提取工艺为溶剂使用80%(V/V)乙醇,料液比1:12(W/V),浸提温度60℃,提取时间30min,超声功率100W,超声频率19KHZ,在此条件下提取2次;通过对影响超声波辅助提取量能变化的研究,本实验发现:当超声器中水量占超声容器的比例达到一定值时,超声作用强度最大,提取效果最好。而其他情况,超声强度相对减弱;超声波作用强度大小具有对称性质,以超声器原点为中心,在同一水平面半径相同的位置上超声强度大小基本相等。并且远离原点,超声作用强度有所增强,总皂甙提取率增大;此外,超声波作用强度在垂直Z轴方向上也有变化,本实验中,离超声器原点越近,超声波作用强度越弱;二、采取热溶沉淀再精滤的工艺配制澄清母液;叁、饮料调配时将非热敏性物料先高温灭菌冷却后与热敏性物料总配,再无菌灌装;四、辅料最优配方为:柠檬酸1.0‰,蜂蜜3%,果汁3%,西洋参香料0.4‰;通过叁个月恒温加速实验,对保健饮料进行卫生指标和主要功效成分稳定性实验,结果表明本保健饮料的感观鉴定、卫生理化指标和保藏实验结果符合
申海清[10]2005年在《抗IBDV中药筛选、作用机制及其临床应用研究》文中研究指明利用细胞培养法对80 种文献记载具有抗病毒作用中药的水提物在CEF 单层上确定了安全浓度,其中76.25%的中药在5.00～0.25mg/ml,石膏最大,为125mg/ml,大黄、黄连最小,仅为0.0025mg/ml。用MTT 法以先病毒后中药、中药病毒同时与先中药后病毒3 种作用方式在CEF 上进行中药抗IBDV 筛选,结果筛选出石膏、黄芪等24 种有效抗IBDV 中药。在此基础上,将1g/ml 中药液按1︰2、1︰4、1︰8稀释,以上述3 种作用方式,用鸡胚法做进一步的筛选,得到石膏等11 种抗IBDV作用最好的中药。根据辨证论治原则组成了祛邪饮、扶正饮、祛邪扶正饮3 个方剂,以其同单味中药石膏和卵黄体进行对比试验,证明祛邪扶正饮治疗IBD 效果最好、病理变化最轻、增重效果最明显,临床试验进一步证明该方剂效果最好。毒性试验表明该方剂安全、无毒。中药药理学研究证明,祛邪扶正饮除直接抑制病毒外,还能大幅度提高机体的免疫功能:增加机体免疫器官重量、提高T、B 淋巴细胞数量、促进干扰素的产生。通过FcM 检测表明,祛邪扶正饮可在一定程度上抑制IBDV 所致的细胞凋亡。
参考文献：
[1]. 人参叶皂甙对鸡免疫功能调节的研究[D]. 骆艳秋. 吉林农业大学. 2003
[2]. 人参叶皂甙对鸡免疫功能调节的研究[J]. 骆艳秋, 尹柏双, 徐文勇, 姜成. 安徽农业科学. 2008
[3]. 人参茎叶皂甙提高口蹄疫和新城疫油佐剂疫苗免疫效果的研究[D]. 李禹涛. 浙江大学. 2012
[4]. 口服人参茎叶皂甙对鸡的疫苗免疫增强作用的研究[D]. 翟利娟. 浙江大学. 2011
[5]. 复方人参皂甙纳米乳的制备及其免疫增强作用的研究[D]. 曹发昊. 西北农林科技大学. 2012
[6]. 人参茎叶皂甙制剂的安全性评价[D]. 王云皓. 浙江农林大学. 2014
[7]. 中药成分对细胞增殖、病毒感染和抗体生成的影响[D]. 孔祥峰. 南京农业大学. 2003
[8]. 壳聚糖、人参皂甙和山楂提取物对小鼠免疫功能的影响[D]. 张红. 吉林大学. 2008
[9]. 增强免疫力、缓解体力疲劳保健饮料的研究与开发[D]. 邓茉香. 四川大学. 2006
[10]. 抗IBDV中药筛选、作用机制及其临床应用研究[D]. 申海清. 吉林大学. 2005
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