一、多药耐药基因mdr_1在食管癌组织中的表达及其意义（论文文献综述）
王兵[1]（2021）在《MTDH在食管鳞癌组织及血清中的表达及其临床预后相关性的实验研究》文中进行了进一步梳理目的:食管癌是全世界恶性肿瘤中发病和死亡排名前十之一的肿瘤,疾病早期诊断不易,患者预后较差。近年来研究发现异粘蛋白（Metadherin,MTDH）在人类多种癌症中上调,被报道与人类多种癌症的发生发展密切相关。然而,MTDH在人食管鳞状细胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）中的功能意义还不明晰。本研究拟探讨MTDH在ESCC组织和血清中的作用和机制。方法:1.通过生物信息学分析GEO等多种数据库筛选出人ESCC中的差异表达基因MTDH及其与人ESCC中的共表达基因。2.公共数据库明确MTDH在食管癌组织中与正常食管黏膜组织的差异表达,并探索MTDH高低表达是否与患者临床特征有关联。3.应用公共数据库分析MTDH的表达水平与食管癌患者生存的关系。4.将前期得到的差异基因应用R软件进行GO和KEGG富集分析,预测MTDH在人体ESCC中的分子生物学机制。5.公共数据库分析绘制蛋白共表达网络图和MicroRNA表达相关的热图。6.分析与信号通路、共表达蛋白网络的基因以及MicroRNA的相关性。7.应用QRT-PCR、免疫组化实验或酶联免疫吸附实验对ESCC患者的组织和血清的MTDH水平进行检测,并分析其与患者临床特征是否有关联。8.应用统计学中的Kaplan-Meier方法来分析MTDH的表达水平与ESCC患者预后生存的关系,并绘制总生存期和疾病无进展生存期的生存曲线。9.使用COX比例风险模型分析ESCC患者预后风险因素。10.分析其作为ESCC血清诊断标志物的诊断效能,并绘制ROC曲线。结果:1.生信分析显示,MTDH是ESCC的差异表达基因,其在ESCC中显着上调,并且与肿瘤分期及预后生存相关,MTDH高表达的食管癌患者比低表达患者的OS和DFS更短,均有统计学差异（P<0.05）。并预测其参与肿瘤发展的多条信号通路及多项生物过程和功能,并与多种蛋白、MicroRNA相互联系,均有统计学差异（P<0.05）。2.ESCC组织中MTDH的mRNA及蛋白水平均高于癌旁组织（P<0.05）。与患者的G分级、T分期、N分期、M分期及p TNM分期显着相关（P<0.05）,与年龄、性别、饮酒史、吸烟史、肿瘤位置以及肿瘤最大直径均无关（P>0.05）。3.MTDH阳性表达患者的OS为16.262±0.855个月,DFS为14.943±0.981个月;而MTDH阴性表达患者的OS为20.533±1.278个月,DFS为19.857±1.436个月;MTDH表达阳性者的OS（P=0.014）和DFS（P=0.029）均显着低于MTDH表达阴性者。单因素分析显示,MTDH表达（P=0.007）、T分期（P=0.013）、N分期（P=0.028）、M分期（P=0.041）和p TNM分期（P=0.016）显着影响了ESCC患者的预后生存;多因素分析显示,MTDH是独立影响ESCC患者预后生存的危险因素（P=0.020）。4.ESCC患者血清中MTDH和SCC浓度高于健康体检者（P<0.05）。血清MTDH与患者的T分期、N分期、M分期及p TNM分期显着相关（P<0.05）;且血清SCC与患者的N分期、M分期及p TNM分期显着相关（P<0.05）;而与其它的因素均无明显相关性。5.ESCC死亡组患者血清中MTDH浓度高于存活组患者（P<0.001）。6.ROC分析显示,MTDH单独检测、SCC单独检测及两者联合检测的AUC值分别为0.850、0.821和0.927,具有统计学差异（P<0.05）。结论:1.ESCC组织和血清中MTDH表达显着增高,表达的高低与ESCC的G分级、T分期、N分期、M分期、pTNM分期及患者预后不良相关,并且MTDH的高表达是影响ESCC患者预后生存的独立危险因素,血清中MTDH表达可能作为辅助诊断ESCC的生物标志物。2.MTDH在人体内可能参与肿瘤发展的多条信号通路及多项生物学过程和功能,并与多种蛋白、MicroRNA相互联系。3.MTDH参与ESCC的发生发展,是ESCC诊断、治疗以及预测预后的潜在生物标志物。
白桦[2]（2020）在《miR-451靶向MIF调控宫颈癌细胞生物学功能并通过外泌体释放影响其化疗敏感性》文中研究表明宫颈癌是严重影响女性健康的一大杀手,是妇科恶性肿瘤患者最常见的死亡原因。虽然宫颈癌疫苗的应用能够有效减少宫颈癌的发生,但每年仍有约80%的新发病例和85%的死亡病例发生在发展中国家,并且其中超过70%的病例在诊断时已处于局部晚期,称为局部晚期宫颈癌。虽然目前宫颈癌的治疗方式已很全面—手术、化疗、放疗及免疫治疗等,但并不是所有患者都能获得较好疗效,尤其对于局部晚期宫颈癌患者疗效仍较差。对于局部晚期宫颈癌,目前的治疗方式是新辅助化疗后对化疗敏感患者采取手术治疗,不敏感患者直接转为放疗,如果有能有效预测患者对化疗敏感性的指标,这部分对化疗不敏感患者就可以免去新辅助化疗的时间及花费,直接转去放疗,得到更好疗效。因此,继续深入研究宫颈癌的发病机制,寻找特异性的治疗靶点以及预测化疗敏感性的标志物对于宫颈癌的治疗仍极为重要。生物信息学是一门交叉学科,随着人类基因组计划的完成,测序数据的爆炸式增长,应用生物信息学技术分析基因组数据之间的关系成为目前一大趋势,用于揭示疾病发生发展及耐药的分子机制。GEO数据库,是美国国立卫生研究院NCBI于2000年创建的公共数据库,是目前最大、最全面的公共基因表达数据资源。外泌体是一种能被机体内大多数细胞分泌的直径大约为30-150nm的具有脂质双层膜的微小膜泡,富含miRNA等物质,通过内吞、外排等作用调节机体多种生理或病理反应,参与肿瘤微环境的调节,还可以作为载体靶向传递药物至器官发挥作用等。在本研究中,近年的研究发现miR-451不仅参与肿瘤的发生进展,还参与肿瘤化疗敏感性的调控,相较于其他miRNA,miR-451更易于在外泌体中富集。基于以上研究背景,在本研究中,先使用生物信息学方法筛选在宫颈癌中差异表达的miRNA,结合文献筛选确定miR-451为研究对象,进一步分析其下游靶标及涉及的机制通路后,通过体外实验验证miR-451的生物学功能。近几年的研究表明miR-451可通过包裹于外泌体中影响肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,因此我们试验性在的在宫颈癌亲代及其耐药细胞株中研究了miR-451在预测宫颈癌化疗敏感性中的作用。本研究为寻找预测宫颈癌患者特异性治疗靶点及预测宫颈癌患者化疗敏感性的标志物提供理论及实验室依据,并为以外泌体作为治疗载体治疗宫颈癌提供了新的治疗思路。第一部分宫颈癌相关差异miRNA生物信息学研究目的:研究整理分析GEO中公共数据库中储存的宫颈癌miRNA数据集,筛选差异表达的miRNA基因,并对差异表达基因进行靶基因预测,ce RNA网络构建,GO功能注释,KEGG功能富集分析及PPI网络分析。为后续实验探索宫颈癌的发生进展的分子机制提供理论基础。方法:本研究以宫颈癌的相关芯片数据集作为研究对象,其中以正常样本作为对照,从GEO数据库中筛选出miRNA数据集GSE30656为研究对象,通过limma和affy包对质控后的RNA表达谱进行差异表达分析。在Pubmed中对差异miRNA逐个筛选,经过通读文献,对宫颈癌相关文献中已被证实及研究过的miRNA予以去除,确定下一步研究的目标miRNA。再针对目标miRNA进行靶基因预测,DAVID软件进行GO功能注释,KEGG功能富集分析,STRING在线数据库进行PPI网络分析。结果:1)本研究在宫颈癌中发现50个差异表达的miRNA,其中表达上调的21个,表达下调的29个。结合文献筛选,选取miR-451作为下一步实验验证的基因。2)针对于miR-451筛选到的m RNA基因进行功能富集分析,发现差异表达基因主要参与氮化合物代谢过程的调控、蛋白磷酸化过程的调控、RNA代谢过程的调控、细胞蛋白质代谢的调节等生物学功能。KEGG通路富集分析发现差异表达的基因主要集中在PI3K/AKT通路及m TOR等信号通路。结论:1)成功筛选出宫颈癌中差异表达的50个miRNA,包括21个上调的miRNA和29个下调的miRNA;结合文献检索筛选检出miR-451作为后续研究基因;2)对miR-451进行了lnc RNA-miRNA-m RNA ce RNA网络,并分析对其下游m RNA靶基因进行了GO功能富集分析与KEGG通路分析,以及对差异m RNA进行了PPI蛋白互作网络分析,为后续进行实验验证提供了基于宫颈癌组织测序数据分析的理论依据。第二部分:miR-451通过靶向MIF抑制宫颈癌细胞增殖迁移等功能目的:探讨miR-451通过靶向MIF对宫颈癌细胞增殖、凋亡、周期、侵袭及迁移能力的影响及其分子机制。方法:在Si Ha细胞中转染miR-451 NC/mimic,Ca Ski细胞中转染miR-451 NC/inhibitor后,CCK-8法检测miR-451对细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-451对细胞凋亡及周期的影响;细胞划痕实验检测miR-451对细胞迁移能力的影响;Transwell实验检测miR-451对细胞侵袭能力的影响;荧光素酶报告实验验证MIF是miR-451的下游靶标;Western Blot法检测miR-451靶向MIF对下游PI3K/AKT/m TOR信号通路的调节。结果:1)miR-451在人宫颈癌细胞系中差异表达;2)在Si Ha细胞中过表达miR-451可对细胞产生抑制增殖、促进凋亡、阻滞周期、降低细胞迁移及侵袭能力的作用;在Ca Ski细胞中抑制miR-451表达可对细胞产生促进增殖、抑制凋亡、促进周期进展、促进细胞迁移及侵袭能力的作用;3)MIF为miR-451的下游靶标;4)miR-451的生物学功能是通过影响PI3K/AKT/m TOR通路实现的。结论:过表达miR-451可抑制宫颈癌细胞增殖、促进凋亡、阻滞周期、降低细胞迁移及侵袭能力,抑制miR-451表达可促进宫颈癌细胞增殖、抑制凋亡、促进周期进展、促进细胞迁移及侵袭能力;其功能是通过靶向MIF及其下游PI3K/AKT/m TOR信号通路实现的。第三部分miR-451通过外泌体释放的形式维持宫颈癌细胞对顺铂的敏感性目的:研究miR-451在宫颈癌顺铂耐药中的作用,探索其功能是否是通过将miR-451包裹于外泌体中释放的形式实现的。方法:CCK-8法检测宫颈癌顺铂耐药株He La/DDP细胞及其亲代He La细胞的耐药指数;使用超高速离心法成功分离了两种细胞上清中的外泌体,通过电镜下观察形态、粒径大小检测、表面标记物检测鉴定外泌体;又定量分析了细胞及外泌体中miR-451的相对含量,进一步研究过表达或抑制miR-451后细胞IC50的变化及多药耐药基因MDR1的表达变化。结果:1)成功分离提取并鉴定了外泌体;2)miR-451在He La细胞中高表达,在其上清中低表达;miR-451在He La/DDP细胞中低表达,在其上清中高表达;3)在He La/DDP细胞中过表达miR-451后细胞对顺铂IC50明显下降,在He La细胞中抑制miR-451表达后细胞对顺铂IC50明显上调,提示miR-451可增强细胞对顺铂的敏感性;4)过表达miR-451后MDR1表达显着下调,提示He La/DDP细胞可能将抑癌基因miR-451包裹入外泌体中排出以维持细胞的耐药性。结论:miR-451可通过外泌体释放的形式影响宫颈癌耐药细胞对顺铂的敏感性。
黄艳洁[3]（2020）在《miR-15a-5p通过Wnt/β-catenin通路调控大肠癌多药耐药的研究》文中研究指明大肠癌（colorectal cancer,CRC）是常见的消化道恶性肿瘤,目前临床上治疗中晚期大肠癌仍以化疗作为辅助手术治疗的主要手段,但由于肿瘤多药耐药的发生,常常会影响化疗疗效,因此寻找化疗药物的耐药靶点是提高大肠癌临床治疗效果的关键。多药耐药是指肿瘤细胞不仅对一种药物产生耐药性,而且对作用机制和化学分子结构均不同的其他药物也产生交叉耐药。肿瘤产生多药耐药的重要原因之一是由于多药耐药基因1（multidrug resistance 1 gene,MDR1）编码的P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）的过度表达,P-gp是三磷酸腺苷结合盒式（ATP-binding cassette,ABC）结构转运蛋白超家族中的一员,可以利用ATP水解释放的能量,在化疗药物尚未发挥细胞毒性作用时就将其泵出到细胞外,从而导致肿瘤细胞产生耐药性。大量研究发现,Wnt/β-catenin信号通路的异常激活可参与调节多种肿瘤的多药耐药,并且发现Wnt/β-catenin信号通路可以通过调控P-gp的表达从而影响肿瘤的多药耐药。micro RNA是一类非编码小分子单链RNA,可以调控靶基因的表达。其中miR-15a-5p是miR-15家族的成员,近年来研究表明其可以通过靶向结合多种编码基因m RNA的3’UTR,抑制靶m RNA的翻译或促进靶m RNA的降解,对基因进行转录后调控。但目前关于miR-15a-5p在大肠癌中的表达情况及与大肠癌多药耐药的关系鲜见报道。本研究旨在探讨miR-15a-5p在大肠癌中的表达情况以及在大肠癌多药耐药中的作用机制。目的:在组织水平检测miR-15a-5p与P-gp在大肠癌组织中的表达情况并分析二者的相关性。在细胞水平研究miR-15a-5p对Wnt/β-catenin信号通路中的关键蛋白Wnt3a、β-catenin及P-gp表达的影响,探讨miR-15a-5p在大肠癌多药耐药中的调节作用及机制。方法:1.通过实时荧光定量PCR法检测miR-15a-5p和MDR1 m RNA在大肠癌组织和癌旁正常肠黏膜组织中的表达情况,并分析miR-15a-5p和MDR1 m RNA在大肠癌组织中表达的相关性。2.通过实时荧光定量PCR法检测miR-15a-5p在大肠癌细胞HCT-116及大肠癌耐药细胞HCT-116/LOHP细胞中表达情况。3.通过Western blot实验检测Wnt3a、β-catenin、P-gp在大肠癌细胞HCT-116及大肠癌耐药细胞HCT-116/LOHP细胞中表达情况。4.通过细胞转染,将HCT-116/LOHP细胞分为五组:空白对照组、转染miR-15a-5p mimics NC的对照组、转染miR-15a-5p mimics的实验组、转染miR-15a-5p inhibitor NC的对照组、转染miR-15a-5p inhibitor的实验组,通过实时荧光定量PCR法检测miR-15a-5p的表达,MTT实验检测各组细胞在不同浓度奥沙利铂下的增殖情况并计算其生长抑制率、半数抑制浓度(IC50)以及耐药指数（RI）。5.通过实时荧光定量PCR法检测转染后各组Wnt3a、β-catenin、MDR1m RNA的表达情况,通过Western blot实验检测转染后各组Wnt3a、β-catenin、P-gp的表达情况。结果1组织水平1.1 miR-15a-5p及MDR1 m RNA在大肠癌组织与癌旁正常肠黏膜组织的表达情况miR-15a-5p在大肠癌组织中的表达量为0.51（0.25）,明显低于癌旁正常肠黏膜组织1.17（2.95）。MDR1 m RNA在大肠癌组织中的表达量为2.21（4.07）,明显高于癌旁正常肠黏膜组织1.13（2.28）,（P均<0.05）。1.2大肠癌组织中miR-15a-5p表达与MDR1 m RNA表达的相关性Spearman相关分析显示,大肠癌组织miR-15a-5p表达与MDR1m RNA表达呈负相关关系（r=-0.343,P<0.05）。2细胞水平2.1 MTT实验验证HCT-116/LOHP细胞对奥沙利铂的耐药奥沙利铂对HCT-116细胞和HCT-116/LOHP细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为（13.51±2.62）μg/ml和（103.08±12.29）μg/ml（P<0.01）,计算得出耐药指数RI为7.63。2.2实时荧光定量PCR检测miR-15a-5p在HCT-116细胞和HCT-116/L-OHP细胞中的相对表达量分别为1.00±0.00和0.16±0.05,差异有统计学意义（P<0.01）。2.3 Western blot实验检测HCT-116/LOHP细胞中Wnt3a、β-catenin及P-gp的相对表达量均高于HCT-116细胞,差异有统计学意义（P<0.05）。2.4实时荧光定量PCR检测转染后各组miR-15a-5p的表达情况,空白对照组、转染miR-15a-5p mimics NC的对照组、转染miR-15a-5p mimics的实验组、转染miR-15a-5p inhibitor NC的对照组、转染miR-15a-5p inhibitor的实验组中miR-15a-5p的相对表达量分别为1.00±0.00、1.08±0.10、277.01±20.81、1.07±0.12和0.38±0.04。转染miR-15a-5p mimics组HCT-116/LOHP细胞中miR-15a-5p的相对表达量明显升高（F=527.82,P<0.001）,转染miR-15a-5p inhibitor组HCT-116/LOHP细胞中miR-15a-5p的相对表达量明显下降（F=79.93,P<0.001）。2.5 MTT实验检测转染后各组细胞对奥沙利铂的耐药情况,奥沙利铂对miR-15a-5p mimics NC对照组的半数抑制浓度(IC50)为（100.35±10.57）μg/ml,miR-15a-5p mimics实验组为（40.78±2.47）μg/ml,差异有统计学意义（P<0.01）。奥沙利铂对miR-15a-5p inhibitor NC对照组半数抑制浓度(IC50)为（102.08±5.95）μg/ml,miR-15a-5p inhibitor实验组为（132.77±7.97）μg/ml,差异有统计学意义（P<0.01）。奥沙利铂对空白对照组的半数抑制浓度(IC50)为（99.98±2.63）μg/ml,空白对照组与阴性对照组HCT-116/LOHP细胞的差异均无统计学意义（P均>0.05）。2.6通过Western blot实验发现,HCT-116/LOHP细胞转染miR-15a-5p mimics实验组与转染miR-15a-5p mimics NC对照组相比Wnt3a、β-catenin与P-gp表达均降低（P<0.05）,空白对照组与转染miR-15a-5p mimics NC对照组相比Wnt3a、β-catenin与P-gp表达均无明显变化（P>0.05）。2.7通过Western blot实验发现,HCT-116/LOHP细胞转染miR-15a-5p inhibitor实验组与转染miR-15a-5p inhibitor NC对照组相比Wnt3a、β-catenin与P-gp表达均升高（P<0.05）,空白对照组与转染miR-15a-5p inhibitor NC对照组相比Wnt3a、β-catenin与P-gp表达均无明显变化（P>0.05）。2.8实时荧光定量PCR法检测结果显示HCT-116/LOHP细胞转染miR-15a-5p mimics实验组与转染miR-15a-5p mimics NC对照组相比Wnt3a、β-catenin与MDR1m RNA表达均降低（P<0.05）,空白对照组与转染miR-15a-5p mimics NC对照组相比Wnt3a、β-catenin与MDR1m RNA表达均无明显变化（P>0.05）。2.9实时荧光定量PCR法检测结果显示HCT-116/LOHP细胞转染miR-15a-5p inhibitor实验组与转染miR-15a-5p inhibitor NC对照组相比Wnt3a、β-catenin与MDR1m RNA表达均升高（P<0.05）,空白对照组与转染miR-15a-5p inhibitor NC对照组相比Wnt3a、β-catenin与MDR1m RNA表达均无明显变化（P>0.05）。结论:1.miR-15a-5p在大肠癌组织中低表达,MDR1在大肠癌组织中高表达,并在组织水平证明二者表达呈负相关关系。2.miR-15a-5p在大肠癌耐药细胞HCT-116/LOHP中的表达水平明显低于敏感细胞HCT-116,Wnt3a、β-catenin及P-gp在大肠癌耐药细胞HCT-116/LOHP细胞中表达水平明显高于敏感细胞HCT-116细胞,miR-15a-5p及Wnt/β-catenin信号通路在大肠癌多药耐药的形成中发挥重要作用。3.上调miR-15a-5p表达可显着提高大肠癌耐药细胞HCT-116/LOHP对化疗药物的敏感性,而下调miR-15a-5p表达可显着降低大肠癌耐药细胞HCT-116/LOHP对化疗药物的敏感性,表明miR-15a-5p参与调控大肠癌多药耐药。4.上调miR-15a-5p表达能显着抑制Wnt/β-catenin信号通路的关键蛋白表达,如Wnt3a、β-catenin及其下游P-gp的表达,而下调miR-15a-5p表达则显着增加Wnt3a、β-catenin及P-gp的表达,miR-15a-5p通过影响Wnt/β-catenin通路的活性,介导转运蛋白P-gp的表达从而参与调控大肠癌多药耐药。
王维兵[4]（2019）在《姜黄素通过调节p38MAPK信号通路逆转食管癌Eca-109/VCR细胞耐药研究》文中研究指明随着食管癌发病率的增加,临床化疗过程中产生的多药耐药（multidrug resistance,MDR）现象是影响食管癌临床疗效的主要因素之一。目前,MDR的机制尚未完全阐明。姜黄素（Curcumin,Cur）是从姜黄中提取的一种天然膳食多酚,具有多种药理作用,例如抗氧化、抗癌、抗炎和抗微生物活性等作用。p38丝裂原活化蛋白激酶（p38mitogen-activated protein kinase,p38MAPK）信号转导通路调节细胞生存和细胞死亡之间的平衡,对各种癌症的发展存在直接影响。p38MAPK特异抑制剂SB203580可以有效降低肿瘤细胞内的P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）表达,是有效的多药耐药逆转剂。然而,Cur能否通过p38MAPK信号通路提高食管癌对化疗药物的敏感性并逆转食管癌MDR机制仍有待探索。本实验以食管癌耐药Eca-109/VCR细胞为研究对象,通过姜黄素与长春新碱（Vincristine,VCR）联合作用,研究姜黄素逆转耐药作用的可能机制。应用MTT法检测不同浓度的奥沙利铂（Oxaliplatin,OXA）、紫杉醇（Taxol,TAX）、5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）对食管癌Eca-109和食管癌Eca-109/VCR耐药细胞增殖的影响。MTT检测不同浓度的VCR对食管癌Eca-109/VCR耐药细胞增殖的影响,以及Cur（20μmol/L）对Eca-109/VCR细胞多药耐药的逆转作用。Cur组（20μmol/L）、VCR组（2.0μg/mL）、联合组（Cur 20μmol/L、VCR 2.0μg/mL）以及SB203580组（p38MAPK信号通路抑制剂SB203580:10、20、40μmol/mL）作用于Eca-109/VCR细胞24h后:（1）FCM法检测细胞凋亡率;（2）RT-PCR法分析切除修复交叉互补基因1（excision repair cross-complementing,ERCC1）、p38MAPK mRNA及多药耐药基因1（multidrug resistance-1,MDR1）mRNA的表达;（3）Western blot法检测p38MAPK信号转导通路的关键分子标志p38MAPK蛋白、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（phospho-p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38MAPK）蛋白、及其下游耐药相关靶分子人切除修复交叉互补蛋白（excision repair cross-complementation group 1,ERCC1）、P-gp的表达情况。结果显示:Cur作用于Eca-109/VCR细胞抑制率呈剂量依赖性,Cur 20μmol/L时细胞的增殖抑制率为（8.33±0.12）%。VCR联合Cur作用细胞增殖抑制率显着升高,逆转耐药倍数为3.57。Cur 20μmol/L,与VCR 2.0μg/mL联合作用于Eca-109/VCR细胞24h后:（1）细胞凋亡率为（39.53±6.02）%,较单用VCR组明显提高（P<0.05）;（2）p38MAPK mRNA、ERCC1 mRNA及MDR 1 mRNA表达率均较单用VCR组降低（P<0.05）;（3）p38MAPK、p-p38MAPK、ERCC1、P-gp蛋白表达率均较单用VCR组明显下降（P<0.05）。p38MAPK信号通路抑制剂SB203580（10、20、40μmol/mL）作用24h后,Eca-109/VCR细胞中p-p38、ERCC1、P-gp蛋白表达及ERCC1、MDR1 mRNA水平均明显降低（P<0.05）。上述结果提示,Cur逆转食管癌细胞多药耐药的作用可能与下调p38MAPK通路相关的p38MAPK、ERCC1、MDR1基因mRNA表达及通路相关的p38MAPK、p-p38MAPK、ERCC1、P-gp蛋白表达有关。
王喜成[5]（2017）在《MiR-145在食管癌细胞多药耐药中的作用及其机制研究》文中进行了进一步梳理背景食管癌（Esophageal carcinoma,EC）治疗产生多药耐药（multidrug resistance,MDR）是导致化疗失败的主要原因,也是引起肿瘤复发转移的重要因素。研究表明micro RNA（miRNA）与肿瘤细胞产生MDR密切相关。本课题组前期研究表明,miR-145过表达抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡。本研究预实验结果提示:miR-145过表达的食管癌细胞株Eca109对化疗药物顺铂的敏感性有显着影响。为探索miR-145对食管癌多药耐药的影响,本课题拟研究在不同食管癌细胞株Eca109和EC9706中miR-145过表达对化疗药物敏感性的影响并从细胞和分子水平分析其作用机制。研究结果将为进一步阐明miR-145及其靶基因在食管癌耐药中的作用,以及为后续食管癌耐药分子靶向治疗及临床治疗方案的选择等临床转化研究奠定实验和理论基础。目的（1）研究在食管癌细胞Eca109和EC9706中miR-145过表达对顺铂和紫杉醇药物敏感性的影响;（2）研究miR-145过表达对耐药基因MDR1和MVP的影响;（3）研究miR-145过表达对其候选靶基因的影响。方法利用miR-145慢病毒过表达载体（lenti-miR-145）及空载体（lenti-NC）分别转染食管癌细胞Eca109和EC9706建立miR-145稳定过表达细胞株;利用噻唑蓝（3-（4,5-Dimethylthiazol-2-yl）-2;5-diphenyltetrazolium bromide,MTT）法检测miR-145过表达的食管癌细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性;用实时荧光定量PCR（q PCR）法在分子水平检测miR-145和多药耐药基因MDR1（Multidrug Resistance Gene1）、MVP（Majo r Vault Protein）在食管癌细胞Eca109和EC9706细胞株中的表达,使用蛋白质印迹法（Western Blot）检测MDR1、MVP在蛋白水平的表达;通过生物信息学数据库Target Scan（http://www.targetscan.org/）,Pictar（http://pictar.mdc-berlin.de/）和Diana（http://diana.cslab.ece.ntua.gr）确认miR-145的候选靶基因,并使用q PCR法、蛋白质印迹法和荧光素酶报告基因法（luciferase reporter assay）进一步确认YES1（Yama guchi Sarcoma viral related oncogene homolog1）是miR-145的靶基因。结果（1）荧光镜下观察和q PCR检测结果提示,miR-145过表达食管癌细胞成功建立（P<0.001）;（2）q PCR分析结果表明,miR-145在顺铂或紫杉醇刺激后的食管癌细胞株EC9706和Eca109中的表达显着降低（P<0.05）;（3）MTT检测结果发现,miR-145过表达食管癌细胞株EC9706和Eca109对顺铂和紫杉醇的敏感性均明显增加（P<0.01,P<0.05）;（4）q PCR和Western blot检测结果表明,多药耐药基因MDR1和MVP在顺铂或紫杉醇刺激后的食管癌细胞EC9706和Eca109中的表达显着升高（P<0.01）;而这两种基因在miR-145过表达的食管癌细胞EC9706和Eca109中的表达显着降低（P<0.05）;（5）生物信息学分析,YES1为miR-145作用的候选靶基因。q PCR和蛋白质印记法表明YES1的表达与miR-145的表达呈负相关（P<0.01）。荧光素酶报告基因法表明miR-145调控YES1的表达（P<0.05）。结论（1）miR-145与食管癌细胞EC9706和Eca109的多药耐药密切相关,miR-145过表达可显着提高食管癌细胞株EC9706和Eca109对化疗药物顺铂或紫杉醇的敏感性。（2）miR-145过表达可显着降低多药耐药基因MDR1和MVP在食管癌细胞株EC9706和Eca109中的表达。（3）YES1是miR-145的直接靶基因,并且与MDR1和MVP的表达呈正相关关系,提示miR-145可能通过调控YES1参与调控食管癌细胞的多药耐药,此结果将有助于发现新的食管癌细胞耐药治疗靶点。
张先稳[6]（2017）在《薏苡仁油注射液抑制LncRNA-PVT1表达影响胃癌细胞耐药性的研究》文中进行了进一步梳理背景目前中晚期胃癌的治疗主要以减轻症状、缓解病情为主,而难以达到根治的目的。治疗方法包括手术治疗、放疗和化疗,而化疗由于兼顾局部与全身的特点,在晚期胃癌的综合治疗中占有重要地位。然而,随着大量化学药物的使用,多药耐药性也随之而来,据美国癌症协会统计,每年死亡的49万例癌症患者中,90%以上与多药耐药有关。所谓多药耐药（multidrug resistance,MDR）,指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物出现耐药的同时,对其他结构不同、作用机理不同、作用靶位不同的抗肿瘤药物也产生耐药性的现象。长期以来,肿瘤的MDR现象是肿瘤化疗过程中的一个棘手问题,也是肿瘤治疗的一大障碍,认识肿瘤的多药耐药机制,寻找高效的耐药逆转剂,有重大的临床意义。肿瘤多药耐药机制非常复杂,已有研究报道,药物外排、药物失活、DNA损伤、细胞凋亡和生存信号途径改变是引起肿瘤耐药的主要机制。在胃癌研究中,参与胃癌耐药的调控因子有多种,其中主要表现为非编码RNA、转录因子、多药耐药相关分子等的调控。尽管部分胃癌耐药性的分子机制已经被研究,然而由于胃癌耐药性本身的复杂性及已有研究的局限性,现有的研究无法满足临床的需求,因此,深入研究胃癌耐药性产生的分子机制具有重要意义。目前中医认为,胃癌术后化疗后发生转移的病理因素,脾虚发病为内在因素,湿滞是其病理产物,又是治病病因,在脾虚的同时加重湿滞,胃癌术后化疗后有脾虚湿滞症患者应尤为重点预防转移。薏苡仁是治疗脾虚湿滞症的首选药。薏苡仁油注射液是一种以薏苡仁为主要原材料的中药注射剂,其有效成分为薏苡仁酯及薏苡仁素,该物质具有多种对抗肿瘤的作用机制,在免疫调节、降血糖、诱发排卵及抗肿瘤方面发挥重要作用。已有研究报道薏苡仁油注射液对多种肿瘤,包括肺癌、胰腺癌、肝癌及胃癌的治疗均有显着效果,同时,薏苡仁油注射液在抑制肿瘤生长的同时,还可加强肿瘤耐药的敏感性。胃癌研究中,有报道称化疗治疗结合薏苡仁油注射液对胃癌治疗具有较好的效果;同时,薏苡仁油注射液具有抑制胃癌多药耐药相关基因表达的作用。然而,薏苡仁油注射液在胃癌耐药性的分子机制中所发挥的作用还有待研究。长链非编码RNA作为非编码RNA的一种,广泛存在于哺乳动物体内。LncRNA虽然不具备编码蛋白质的功能,但其通过调控蛋白质的表达进而参与到生命体的生长、分化、增殖和凋亡等过程。大量研究表明,LncRNA在转录、转录后及表观遗传水平调控肿瘤相关通路,同时有研究表明:几乎所有的肿瘤中,都存在LncRNA表达异常。因此,lncRNA正逐渐成为研究肿瘤致病机制中的一个重要因子。LncRNA由于其本身的不保守性,它不只是参与到生命活动的各个进程,同时还调节着肿瘤耐药性及药物敏感性。已有研究证实多种LncRNA通过提高DNA修复功能,改变药物代谢和跨膜外排,调节细胞凋亡率以及影响上皮-间充质进程而改变细胞的耐药性。PVT1作为LncRNA的一种,其位于原癌基因MYC启动子上游60 kb处。有研究表明PVT1的过表达具有促癌作用,其在促进癌细胞增殖和侵袭的同时,还增强了肿瘤细胞对化疗的耐药性,相关研究已经在肝癌、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌中得到证实。在胃癌中,PVT1的表达也显着上调,然而其对胃癌耐药性的影响暂无报道。因此,本研究首先在胃癌耐药组织和细胞中,利用qPCR检测了 PVT1的表达;然后通过调控PVT1的表达,观察其对胃癌耐药细胞中耐药相关蛋白的影响;随后利用薏苡仁油注射液处理胃癌耐药细胞株,观察PVT1的表达变化;最后通过调控胃癌耐药细胞中PVT1的表达并利用薏苡仁油注射液处理后,观察胃癌耐药相关蛋白的表达变化。最终阐明PVT1在胃癌耐药性中所扮演的角色及其发挥功能的分子机制。本研究为深入阐明胃癌耐药性的分子机制提供了依据,同时为胃癌耐药性的治疗提供了理论基础。研究内容分为4部分:1.LncRNA-PVT1对胃癌细胞耐药性的影响目的:分析胃癌耐药性患者肿瘤组织和胃癌耐药细胞株中PVT1的表达情况,并进一步在体外观察PVT1过表达或表达抑制对胃癌细胞耐药性的影响。方法:首先分离顺铂耐药性和顺铂敏感性胃癌患者肿瘤组织,利用qPCR检测两组样本中PVT1的表达量;而后利用qPCR测定胃癌耐药细胞株BGC823/DDP和SGC7901/DDP中PVT1的表达量。BGC823/DDP和SGC7901/DDP细胞株分别转染干扰序列si-PVT1后,利用qPCR测定PVT1的表达量;随后利用11μg/ml的顺铂分别处理细胞株24 h、36 h和48 h后,CCK-8检测细胞的存活率。BGC823和SGC7901分别转染过表达载体LV-PVT1-GFP后,利用qPCR测定PVT1的表达量;随后再利用1 μg/ml的顺铂处理细胞株48 h后,流式细胞术结合Annexin V-PI法测定细胞的凋亡率结果:胃癌耐药性患者肿瘤组织和胃癌耐药细胞株（BGC823/DDP和SGC7901/DDP）中PVT1的表达量显着上调;PVT1干扰序列显着降低了胃癌耐药细胞株中PVT1的表达;胃癌耐药细胞转染si-PVT1并用顺铂处理后,显着降低了胃癌耐药细胞的存活率,并增加了其凋亡率;胃癌细胞株BGC823和SGC7901转染LV-PVT1-GFP并利用顺铂处理后,显着增加了胃癌细胞株中PVT1的表达,并抑制了细胞的凋亡率。结论:胃癌耐药性患者肿瘤组织及胃癌耐药细胞株中,PVT1的表达上调;过表达PVT1,增加了胃癌细胞株对顺铂的耐药性;抑制PVT1的表达,增加了胃癌细胞株对顺铂的敏感性。2.PVT1增加胃癌细胞耐药性的分子机制研究目的:体外过表达PVT1,检测顺铂处理后的胃癌细胞多药耐药性相关分子MDR-1、MRP1、mTOR和HIF-1α的表达变化,旨在探讨PVT1促进胃癌细胞耐药性的分子机制。方法:构建PVT1过表达载体LV-PVT1-GFP转染胃癌细胞BGC823和SGC7901,并用顺铂处理48h后,利用qPCR检测MDR-1、MRP1、mTOR和HIF-1α的mRNA的表达量;利用western blotting检测MDR-1和MRP1的蛋白表达量。结果:PVT1过表达显着增加了经顺铂处理的胃癌细胞株中MDR-1和MRP1的表达,而mTOR和HIF-1α的表达量不受PVT1的调控。结论:PVT1调控胃癌细胞对顺铂的耐药性极有可能是通过调控MDR1及MRP1的表达而实现的,而mTOR和HIFα的表达却不受PVT1的调控而参与胃癌耐药性机制。3.薏苡仁油注射液对胃癌细胞耐药性的影响目的:采用不同浓度薏苡仁油注射液处理胃癌耐药株细胞BGC823/DDP和SGC7901/DDP,旨在探讨薏苡仁油注射液对胃癌细胞耐药性的影响。方法:选取胃癌耐药株细胞BGC823/DDP和SGC7901/DDP,用浓度梯度不同的薏苡仁油注射液（1、2.5、5μl/ml）分别处理24、36、48h,利用CCK-8检测细胞活力;薏苡仁油注射液处理48 h后,流式细胞术结合Annexin V-PI法检测细胞凋亡情况;利用qPCR检测MDR1和MRP1的mRNA的表达量;利用western blotting测定MDR1和MRP1蛋白表达量。结果:利用不同浓度薏苡仁油注射液处理胃癌耐药株细胞BGC823/DDP和SGC7901/DDP一段时间后,结果显示:同一时间点,随着薏苡仁油注射液浓度的增加,细胞活力显着降低,而其凋亡率显着升高;同一浓度的薏苡仁油注射液,随着处理时间的增加,细胞活力显着下降,而其凋亡率显着升高。随后我们检测了不同浓度薏苡仁油注射液处理胃癌耐药株细胞BGC823/DDP和SGC7901/DDP 24 h和48 h后,MDR1和MRP1的表达量。结果显示:无论处理时间是24 h还是48 h,MDR1和MRP1的表达都随着处理浓度的增加而显着降低,呈剂量依赖性。结论:薏苡仁油注射液处理胃癌耐药细胞株促进了细胞的凋亡而抑制了其活性,同时降低了 MDR1和MRP1的表达。即表明:薏苡仁油注射液处理显着降低了胃癌细胞对顺铂的耐药性。4.薏苡仁油注射液抑制胃癌细胞耐药性的分子机制研究目的:体外过表达PVT1,检测薏苡仁油注射液处理后胃癌耐药细胞株多药耐药性相关分子MDR1、MRP1的表达,旨在探讨薏苡仁油注射液抑制胃癌细胞耐药性的分子机制。方法:不同浓度薏苡仁油注射液处理胃癌耐药细胞株BGC823/DDP和SGC7901/DDP 24 h后,qPCR检测PVT1的表达。PVT1高表达慢病毒转染胃癌耐药细胞BGC823/DDP和SGC7901/DDP后,再利用2.5μl/ml浓度薏苡仁油注射液处理。流式细胞术检测细胞凋亡率;qPCR 检测 MDR1 和 MRP1 的 mRNA 表达量;western blotting 检测 MDR1 和 MRP1的蛋白表达量。结果:不同浓度薏苡仁油注射液处理胃癌耐药细胞BGC823/DDP和SGC7901/DDP后,PVT1的表达随着薏苡仁油注射液浓度的增加而显着降低;PVT1高表达慢病毒转染胃癌耐药细胞BGC823/DDP和SGC7901/DDP,并用薏苡仁油注射液处理后,显着抑制了细胞的凋亡率,同时显着上调了 MDR1和MRP1的表达。结论:薏苡仁油注射液通过抑制PVT1降低多药耐药性相关分子MDR1和MRP1的表达进而抑制了胃癌细胞耐药性。综上所述,本文深入探讨了 PVT1对胃癌耐药性的影响,在明确胃癌耐药组织及细胞中PVT1的表达显着上调的基础上,部分揭示了 PVT1参与胃癌耐药性的机制。同时,PVT1调控胃癌细胞耐药性机制可能是通过调控MDR1及MRP1的表达而实现的。薏苡仁油注射液处理显着降低了胃癌细胞的耐药性,其具体分子机制是通过抑制PVT1的表达,降低多药耐药相关分子MDR1和MRP1的表达,从而降低胃癌细胞耐药性。
赵炳军[7]（2016）在《MDR1、MRP1和ABCG2在结直肠腺癌的表达及其临床意义》文中提出本课题采用免疫组化技术和原位分子杂交技术检测MDR1、MRPl和ABCG2蛋白及其m RNA在结直肠腺癌切端正常粘膜、结直肠腺瘤和结直肠腺癌中的表达,探讨三者在结直肠腺癌切端正常粘膜、腺瘤和腺癌中的表达差异;三者与结直肠腺癌临床病理特征的关系;以及三者在结直肠腺癌组织中表达的相关性。旨在进一步了解结直肠腺癌的发生、发展机制,并为临床结直肠腺癌化疗以及判断预后提供有价值的参考指标及实验依据。收集河北北方学院附属第一医院2013年1月至2014年6月存档的蜡块标本,结直肠腺癌116例,结直肠腺瘤50例,结直肠腺癌切端正常粘膜30例。所选结直肠腺癌患者术前均未进行放化疗。分别采用免疫组化和原位分子杂交技术检测MDR1、MRPl和ABCG2蛋白及相应m RNA的表达情况;分析结直肠腺癌中MDR1、MRPl和ABCG2蛋白及m RNA的表达与患者年龄、性别、组织分化程度、病变部位、淋巴结转移和TNM分期的关系及其三者之间的相关性;免疫组化结果显示:MDR1蛋白在结直肠腺癌切端正常粘膜、结直肠腺瘤和结直肠腺癌组织中的阳性表达率分别为30%（9/30）、10%（5/50）、72.4%（84/116）,三组间差异均具有统计学意义（P<0.05）;MDR1蛋白在结直肠腺癌组织中的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移和TNM分期相关（P<0.05）,而与肿瘤患者的性别、年龄及肿瘤部位无关（P>0.05）。MRP1蛋白在切端正常黏膜、腺瘤和腺癌组织中的阳性表达率分别为16.7%（5/30）、40%（20/50）、70.6%（82/116）,三组间差异均具有统计学意义（P<0.05）;MRP1蛋白在结直肠腺癌组织中的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移和TNM分期相关（P<0.05）,而与肿瘤患者的性别、年龄及肿瘤部位无关（P>0.05）。ABCG2蛋白在切端正常黏膜、腺瘤和腺癌组织中的阳性表达率分别为43.3%（13/30）、12%（6/50）、75.6%（88/116）,三组间差异均具有统计学意义（P<0.05）;ABCG2蛋白在结直肠腺癌组织中的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移和TNM分期相关（P<0.05）,而与肿瘤患者的性别、年龄及肿瘤部位无关（P>0.05）。经Spearman相关分析显示MDR1,MRPl和ABCG2蛋白在结直肠腺癌中的表达均呈正相关（P<0.05）。原位杂交结果显示:MDR1 m RNA在结直肠腺癌切端正常粘膜、结直肠腺瘤和结直肠腺癌组织中的阳性表达率分别为33.3%（10/30）、6%（3/50）、72.4%（80/116）,三组间差异均具有统计学意义（P<0.05）;MDR1 m RNA在结直肠腺癌组织中的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移和TNM分期相关（P<0.05）,而与肿瘤患者的性别、年龄及肿瘤部位无关（P>0.05）。MRP1蛋白在切端正常黏膜、腺瘤和腺癌组织中的阳性表达率分别为20%（6/30）、44%（22/50）、74.1%（86/116）,三组间差异均具有统计学意义（P<0.05）;MRP1 m RNA在结直肠腺癌组织中的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移和TNM分期相关（P<0.05）,而与肿瘤患者的性别、年龄及肿瘤部位无关（P>0.05）。ABCG2 m RNA在切端正常黏膜、腺瘤和腺癌组织中的阳性表达率分别为36.7%（11/30）、10%（5/50）、72.4%（84/116）,三组间差异均具有统计学意义（P<0.05）;ABCG2蛋白在结直肠腺癌组织中的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移和TNM分期相关（P<0.05）,而与肿瘤患者的性别、年龄及肿瘤部位无关（P>0.05）。经Spearman相关分析显示MDR1,MRPl和ABCG2 m RNA在结直肠腺癌中的表达均呈正相关（P<0.05）。以上结果提示:大多数结直肠腺癌中可能存在MDR1,MRPl和ABCG2介导的原发性多药耐药,且MDR1,MRPl和ABCG2的高表达与结直肠腺癌的淋巴结转移、TNM分期及肿瘤分化程度密切相关,同时三者在结直肠腺癌的上述恶性生物学行为中可能存在相互协同作用。MRPl表达的上调及MDR1和ABCG2在腺瘤表达的下调可能与结直肠腺癌的形成有关。联合检测MDR1,MRP1及ABCG2在结直肠腺癌组织中的表达,有助于评估结直肠腺癌患者耐药状态及肿瘤潜在的转移能力,有可能成为指导结直肠腺癌临床化疗及判断预后有价值的参考指标。
张松[8]（2016）在《Caveolin-1在食管鳞癌中的表达及其调控食管鳞癌细胞多药耐药性的机制研究》文中研究表明食管癌是我国高发的恶性肿瘤之一,其中河南省太行山区林州市人群中的食管癌发病率位居世界首位。我国食管癌以食管鳞癌为主,侵袭性强,预后差,临床进展迅速,多伴有淋巴结转移,且易复发,5年生存率仅为10%左右。Caveolin-1（Cav-1）是胞膜窖标志性蛋白质之一,主要通过脚手架结构域（Caveolin-1 Scaffording Domain,CSD）、跨膜结构域以及Y14位点等与其它蛋白相互作用,来调节多种信号传导分子和通路的活性,从而影响细胞的分化、增殖、迁移和凋亡等。不少研究表明,Cav-1在肿瘤细胞转化、肿瘤生成和转移等病理过程中起着非常重要的作用,其不仅在多种肿瘤中表达异常,而且在不同肿瘤中具有不同的作用和机制。如在乳腺癌、结肠癌、卵巢癌中Cav-1呈低表达状态,可能是人类肿瘤抑制因子;而在前列腺癌、膀胱癌中Cav-1则过度表达,充当癌基因的作用。目前,Cav-1及其调控的下游信号传导途径已成为肿瘤研究的热点之一。研究发现,Cav-1在癌旁组织及食管鳞状细胞癌组织中表达量升高,具有促进食管鳞癌发生的作用,但目前鲜少有Cav-1与ESCC多药耐药之间相关性的研究报道。因此为弥补该方面研究的欠缺,本实验对食管鳞状细胞癌组织、癌旁组织及正常食管组织中Cav-1、P53、BDNF、P-gp、MRP1和β-catenin的表达进行检测,分析食管鳞状细胞癌发生过程中Cav-1与五者间的相关性;采用cav-1基因超表达方法进一步提高Cav-1食管鳞癌细胞Ec9706中的表达,分析Cav-1的高表达对癌细胞多药耐药性相关蛋白表达和药物外排的影响;最后采用sh RNA干扰技术抑制Ec9706细胞中cav-1基因的表达,进一步检测Cav-1的降低表达对食管鳞癌细胞多药耐药性蛋白表达和药物外排的影响。上述研究不仅为食管癌发生发展机制的研究提供新的思路和为其临床治疗提供新的靶点,还可为降低ESCC患者多药耐药性提供科学依据。第一部分Caveolin-1及多药耐药相关蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及相关性分析方法1.免疫组织化学法检测86例食管鳞状细胞癌组织、癌旁组织和癌旁正常食管粘膜组织中Cav-1、P53、P-gp、MRP1、β-catenin和BDNF蛋白的表达情况。2.统计学处理:SPSS21.0软件统计软件包进行分析,两个变量之间的相关性检验用Spearman相关分析,两分类变量的比较用Pearson’sχ2检验;以P≤0.05为差异有统计学意义。结果1.免疫组织化学法结果显示:Cav-1蛋白在癌旁正常食管组织、癌旁组织及食管鳞状细胞癌组织中主要分布于细胞质和细胞膜,阳性表达率依次升高,分别为15.11%、38.37%、61.63%,组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。2.多药耐药相关蛋白免疫组织化学法结果显示:MRP1、P-gp、P53蛋白在正常食管组织、癌旁组织及食管鳞状细胞癌组织中阳性表达率依次升高,分别为17.44%、39.53%、63.95%,22.09%、44.18%、72.09%,9.30%、46.51%、59.30%,各蛋白组间差异具有统计学意义（P<0.05）。BDNF蛋白在正常食管组织、癌旁组织及食管鳞状细胞癌组织中阳性表达率依次升高,为6.98%、10.47%、18.6%,但各蛋白组间比较无显着差异（P>0.05）。β-catenin蛋白在正常食管组织、癌旁组织及食管鳞状细胞癌组织中高表达,其阳性表达率基本无变化,但在核质中的阳性表达率分别为8.14%、52.32%、80.23%,有明显的统计学意义（P<0.05）。3.经SPSS21.0检验分析,食管鳞癌组织中Cav-1与P-gp、MRP1、P53具有明显的正相关性（γ分别为0.77、0.453、0.581;P均为0.000）,而与BDNF的表达相关性不明显（γ=0.000;P=0.391）;此外,Cav-1的表达虽与β-catenin的整体表达没有明显的相关关系,但与细胞核质表达的β-catenin有一定的相关性（γ=0.003;P=0.000）。第二部分Caveolin-1表达对食管鳞癌细胞多药耐药相关蛋白的影响方法1.通过超表达cav-1基因和载体介导的RNA干扰技术来研究食管鳞癌细胞Ec9706中多药耐药相关基因的表达,运用RT-PCR和Western blots检测基因超表达是否成功和RNA干扰效率。2.运用RT-PCR和Western blots检测超表达cav-1基因和RNA干扰前后Ec9706细胞中MRP1、P-gp、P53、BDNF、β-catenin的m RNA和蛋白质表达变化。3.应用药物外排实验检测超表达cav-1基因和RNA干扰前后Ec9706细胞外排Calcein AM和Rhodamine123的变化,采用荧光显微镜拍照。4.统计学处理:采用SPSS21.0软件统计软件包进行分析。统计学数据用均数±标准差表示,两样本均数比较采用t检验,多个样本均数比较应用单因素方差分析（One-way ANOVA）,Western blots灰度值及荧光强度应用Image-Pro Plus6.0进行分析。以α=0.05为检验水准。结果1.cav-1基因超表达和si RNA干扰表达质粒构建成功:与对照组相比,转染后48h和72h超表达组中cav-1基因m RNA相对表达量分别为221.46±25.14,290.13±43.36,蛋白质相对表达量为3.19、5.97,表达量均显着增加（P<0.01）。表明cav-1基因超表达质粒构建成功。与对照组相比,转染P3-1和P3-3质粒的细胞中cav-1基因m RNA和蛋白质表达量没有明显改变（P>0.05）,而转染P3-2质粒的实验组表达量显着下降（P<0.01）,即cav-1基因m RNA相对表达量降为0.454±0.17,蛋白质相对表达量降为0.52。表明构建成功的si RNA质粒为P3-2。2.cav-1基因表达水平改变对ESCC细胞中多药耐药相关蛋白P-gp、MRP1、P53、BDNF、β-catenin表达的影响:（1）cav-1基因表达水平改变对P-gp表达的影响:cav-1基因超表达48h和72h的Ec9706细胞中P-gp m RNA和蛋白相对表达量为0.84±0.31、0.72±0.20和1.01、0.91,虽然其表达量有少许降低,但并没有显着统计意义（P>0.05）;干扰cav-1表达72h的Ec9706细胞中P-gp m RNA和蛋白相对表达量为0.56±0.07、0.71,表达量显着降低（P<0.05）。（2）cav-1基因表达水平改变对MRP1表达的影响:cav-1基因超表达48h和72h的Ec9706细胞中MRP1 m RNA和蛋白相对表达量为1.58±0.18、3.55±0.21和1.76、3.51,表达量显着增加（P<0.05）;干扰cav-1表达72h的Ec9706细胞中MRP1 m RNA和蛋白相对表达量为0.33±0.09、0.62,表达量显着降低（P<0.05）。（3）cav-1基因表达水平改变对P53表达的影响:cav-1基因超表达48h和72h的Ec9706细胞中P53 m RNA和蛋白相对表达量为0.90±0.13、2.30±0.11和1.14、0.95,m RNA表达量在72h显着增加（P<0.05）,但蛋白质表达量几乎不改变;干扰cav-1表达72h的Ec9706细胞中P53 m RNA和蛋白相对表达量为0.63±0.14、0.42,表达量显着降低（P<0.05）。（4）cav-1基因表达水平改变对β-catenin表达的影响:cav-1基因超表达48h和72h的Ec9706细胞中β-catenin m RNA和蛋白相对表达量为0.98±0.10、1.27±0.07和1.20、0.98,表达量改变不显着（P>0.05）;干扰cav-1表达72h的Ec9706细胞中β-catenin m RNA和蛋白相对表达量为0.92±0.08、0.89,表达量无明显改变（P>0.05）。（5）cav-1基因表达水平改变对BDNF表达的影响:Ec9706细胞中并没有检测到BDNF基因和蛋白质的表达。在cav-1基因超表达和降低表达的Ec9706细胞中,同样未检测到BDNF m RNA和蛋白质的表达。3.细胞外排Calcein AM和Rhodamine123研究:超表达cav-1 48h和72h的细胞中Calcein AM的荧光强度分别为852322.6±211.2、827510.3±1567.5,与对照组细胞（1364586.8±589.2、1445295.3±1134.6）相比,Calcein AM荧光强度明显降低（P<0.01）;相反,与对照组细胞（434570.1±1854.2、470330.8±3234.6）相比,超表达cav-1 48h和72h的细胞中Rhodamine123的荧光强度没有明显改变（P>0.05）,其荧光强度分别为412125±2175.4、403155.4±562.8。cav-1敲低表达的细胞中Calcein AM的荧光强度分别为1757270.7±7650.1,与对照细胞（1293502.9±1729）相比,Calcein AM荧光强度明显升高（P<0.01）;同样,与对照细胞（464069.4±2256.5）相比,cav-1敲低表达的细胞中Rhodamine123的荧光强度亦明显升高（P<0.01）,其荧光强度为687517.4±692.7。结论1.Cav-1、MRP1、P-gp、P53的表达与食管癌的发生发展密切相关,上述四者的表达上调可能促进食管鳞癌的发生发展;β-catenin的表达与食管癌变之间无明显相关性,但其从细胞膜到细胞核、细胞质的定位变化可能与食管癌的发生发展密切相关。2.食管鳞癌中,Cav-1的表达分别与P-gp、MRP1、P53表达具有明显的相关关系,但与BDNF、β-catenin的表达相关性不明显。3.cav-1上调表达基本上不影响P-gp和P53 m RNA和蛋白质表达,但低表达可降低P-gp和P53 m RNA和蛋白质的表达水平,提示Cav-1在食管鳞癌细胞中对P-gp和P53表达的调节作用可能存在剂量效应。4.食管鳞癌的耐药性改变与Cav-1表达水平密切相关:Cav-1表达水平改变显着影响多药耐药相关基因和蛋白即P-gp和MRP1的表达水平,从而改变食管鳞癌细胞对药物的外排作用。因此,Cav-1可作为一个有效的逆转食管鳞癌多药耐药的相关靶点。
张宏鑫,张颖[9]（2015）在《食管癌多药耐药机制的研究进展》文中研究指明化疗是食管癌治疗的主要方法之一,而多药耐药（MDR）现象是目前食管癌化疗过程中遇到的最大障碍。肿瘤MDR是指肿瘤患者经过某种化疗药物长期治疗后,除了对该化疗药物产生耐药性,对其他多种结构和功能不同的抗肿瘤药物亦产生耐药。肿瘤MDR是一个多阶段、多因素参与的复杂过程,包括药物转运蛋白的外排作用、靶酶的变化以及其他参与因素的改变等,主要对食管癌多药耐药机制及其逆转剂的研究进展进行综述。
刘亮,左连富,郭建文[10]（2014）在《食管鳞癌中MDR1基因的表达与多药耐药的关系》文中研究指明目的探讨MDR1基因与食管鳞癌多药耐药的关系。方法逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测80例食管鳞癌、不典型增生及正常食管组织中MDR1基因的表达水平,并比较食管鳞癌组织中MDR1基因表达与不同临床参数之间的关系。利用阿霉素（ADM）药物浓度递增细胞培养方法建立食管癌多药耐药细胞Eca109/ADM,利用RT-PCR、流式细胞术及激光共聚焦显微镜检测Eca109/ADM细胞中MDR1基因及蛋白表达水平。结果 MDR1基因在食管鳞癌中的表达水平显着高于不典型增生及正常食管组织（P<0.05）。食管鳞癌中MDR1基因表达与食管癌细胞分化程度、有无淋巴结转移及浸润深度密切相关（P<0.05）。Eca109/ADM细胞中MDR1基因及蛋白表达水平显着高于其亲代细胞Eca109中的表达水平（P<0.05）。结论 MDR1基因在食管鳞癌中的异常高表达可能参与了多药耐药的形成。
二、多药耐药基因mdr_1在食管癌组织中的表达及其意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、多药耐药基因mdr_1在食管癌组织中的表达及其意义（论文提纲范文）
（1）MTDH在食管鳞癌组织及血清中的表达及其临床预后相关性的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第1章 材料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.2.1 食管鳞状细胞癌确诊标准 |
| 1.2.2 食管鳞癌位置分类标准(见表 1) |
| 1.2.3 食管癌TNM分期标准(见表 2) |
| 1.2.4 食管鳞癌的组织学分级(见表 3) |
| 1.2.5 食管鳞癌的病理TNM分期(pTNM)预后分组(见表 4) |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 实验试剂耗材及相关仪器 |
| 1.5.1 实验主要试剂和耗材(见表 5) |
| 1.5.2 实验主要仪器(见表 6) |
| 1.6 实验方法 |
| 1.6.1 资料的统计与收集 |
| 1.6.2 实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative Real-time PCR, QRT-PCR) |
| 1.6.3 免疫组化(Immunohistochemistry,IHC) |
| 1.6.4 酶联免疫吸附实验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA) |
| 1.6.5 生物信息学分析 |
| 1.7 统计学分析及处理 |
| 1.8 技术路线图 |
| 第2章 研究结果 |
| 2.1 基于公共数据库探索 MTDH 在食管癌组织和食管正常黏膜组织中的表达水平、临床意义及相关机制 |
| 2.1.1 聚类分析筛选食管鳞癌样本的差异表达基因 |
| 2.1.2 MTDH 在不同肿瘤组织中的表达 |
| 2.1.3 食管癌中 MTDH 的表达差异水平 |
| 2.1.4 MTDH与食管癌患者临床病理资料的关系 |
| 2.1.5 基于公共数据库对 MTDH 预后生存分析结果 |
| 2.1.6 食管鳞癌差异基因的富集分析结果 |
| 2.1.7 蛋白互作分析结果 |
| 2.1.8 MTDH 与富集通路和蛋白互作网络中基因的相关性分析结果 |
| 2.1.9 MTDH与MicroRNA相关性分析结果 |
| 2.2 MTDH在食管鳞癌组织中的表达情况 |
| 2.2.1 食管鳞癌组织中MTDH在 m RNA水平上的表达情况 |
| 2.2.2 食管鳞癌组织中MTDH在蛋白水平上的表达情况 |
| 2.2.2.1 免疫组化的结果 |
| 2.2.2.2 MTDH在食管鳞癌的表达情况与临床病理特征的关系 |
| 2.2.2.3 食管鳞癌组织中MTDH表达与患者生存之间的关系 |
| 2.2.2.4 影响食管鳞癌患者术后生存时间的COX回归分析 |
| 2.3 MTDH在食管鳞癌患者及正常人血清中的表达情况 |
| 2.3.1 食管鳞癌组和健康体检组的一般资料 |
| 2.3.2 食管鳞癌组和健康体检组中血清MTDH和 SCC水平的比较 |
| 2.3.3 食管鳞癌患者血清MTDH和 SCC表达与临床病理特征的关系 |
| 2.3.4 食管鳞癌患者死亡组和存活组的血清MTDH、SCC水平的比较 |
| 2.3.5 食管鳞癌患者血清 MTDH、SCC 的诊断价值分析结果 |
| 第3章 讨论 |
| 第4章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录Ⅰ知情同意书 |
| 综述 RNA结合蛋白MTDH在消化系肿瘤的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（2）miR-451靶向MIF调控宫颈癌细胞生物学功能并通过外泌体释放影响其化疗敏感性（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 宫颈癌相关差异miRNA生物信息学研究 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 宫颈癌样本数据库的选择 |
| 1.2 差异表达分析 |
| 1.3 miRNA筛选 |
| 1.4 miRNA靶基因预测 |
| 1.5 ceRNA网络构建 |
| 1.6 GO功能注释 |
| 1.7 KEGG功能富集分析 |
| 1.8 PPI网络分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 基因差异表达分析 |
| 2.2 miRNA的筛选 |
| 2.3 hsa-miR-451miRNA靶基因预测 |
| 2.4 ceRNA网络构建 |
| 2.5 GO和KEGG功能富集结果分析 |
| 2.6 PPI网络分析 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 miR-451通过靶向MIF参与调控宫颈癌细胞生物学功能 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 miR-451在SiHa及CaSki细胞中的表达 |
| 2.2 CCK-8 法检测miR-451对细胞增殖的影响 |
| 2.3 流式细胞术检测miR-451对细胞凋亡的影响 |
| 2.4 流式细胞术检测miR-451对细胞周期的影响 |
| 2.5 细胞划痕实验检测miR-451对细胞迁移能力的影响 |
| 2.6 Transwell实验检测miR-451对细胞侵袭能力的影响 |
| 2.7 荧光素酶报告实验验证MIF是 miR-451的下游靶标 |
| 2.8 WesternBlot法检测miR-451靶向MIF对下游PI3K/AKT/mTOR信号通路的调节 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 miR-451通过外泌体释放的形式影响宫颈癌细胞对顺铂的敏感性 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 细胞株及细胞培养用品 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 HeLa及HeLa/DDP细胞形态学特征 |
| 2.2 CCK-8法检测细胞耐药指数 |
| 2.3 透射电镜下观察外泌体形态特征 |
| 2.4 外泌体粒径检测 |
| 2.5 流式细胞仪检测外泌体表面标记物 |
| 2.6 定量分析细胞及外泌体中miR-451表达 |
| 2.7 过表达或抑制miR-451后顺铂对细胞IC50 的变化 |
| 2.8 过表达或抑制miR-451后MDR1表达变化 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 创新性与不足 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（3）miR-15a-5p通过Wnt/β-catenin通路调控大肠癌多药耐药的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 Wnt/β-catenin 信号通路与大肠癌研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）姜黄素通过调节p38MAPK信号通路逆转食管癌Eca-109/VCR细胞耐药研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 食管癌耐药研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）MiR-145在食管癌细胞多药耐药中的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一节 miR-145 过表达对人食管癌细胞多药耐药的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 第二节 miR-145 过表达对耐药基因MDR1和MVP的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 第三节 miRNA-145 过表达对候选靶基因YES1的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 综述：MiRNAs和肿瘤耐药：一个新的分子调控位点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）薏苡仁油注射液抑制LncRNA-PVT1表达影响胃癌细胞耐药性的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 LNCRNA-PVT1对胃癌细胞耐药性的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 PVT1促进胃癌细胞耐药性的分子机制研究 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 薏苡仁油注射液对胃癌细胞耐药性的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四部分 薏苡仁油注射液抑制胃癌细胞耐药性的分子机制研究 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
（7）MDR1、MRP1和ABCG2在结直肠腺癌的表达及其临床意义（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 ABC转运蛋白功能及其与消化系统恶性肿瘤关系 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）Caveolin-1在食管鳞癌中的表达及其调控食管鳞癌细胞多药耐药性的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 Caveolin-1 及多药耐药相关蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及相关性分析 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 6 参考文献 |
| 第二部分 Caveolin-1 表达对食管鳞癌细胞多药耐药相关蛋白的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 6 参考文献 |
| 全文结论 |
| 综述 Caveolin-1 与肿瘤多药耐药 |
| 参考文献 |
| 在学期间发表的学术论文与研究成果 |
| 致谢 |
（9）食管癌多药耐药机制的研究进展（论文提纲范文）
| 1 多药耐药转运蛋白 |
| 1.1 P-gp |
| 1.2 MRP |
| 1.3 LRP |
| 2 酶改变 |
| 2.1 TopoⅡ |
| 2.2 GST |
| 2.3 DNA-polβ |
| 3 其他 |
| 3.1 突变型p53蛋白 |
| 3.2 微管蛋白 |
| 3.3 HSP |
| 4 结语 |
（10）食管鳞癌中MDR1基因的表达与多药耐药的关系（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 细胞株来源 |
| 1.3 主要实验仪器及试剂 |
| 1.4 RT-PCR方法检测细胞中MDR1 mRNA表达水平 |
| 1.5 流式细胞术检测细胞中MDR1蛋白的表达 |
| 1.6 荧光免疫细胞化学方法检测细胞中MDR1蛋白表达及定位 |
| 1.7 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同食管病变组织中MDR1 mRNA表达水平 |
| 2.2 食管癌组织中MDR1 mRNA表达与临床病理特征的关系 |
| 2.3 食管癌耐药细胞Eca109/ADM中MDR1 mRNA及蛋白表达 |
| 3 讨论 |
四、多药耐药基因mdr_1在食管癌组织中的表达及其意义（论文参考文献）
- [1]MTDH在食管鳞癌组织及血清中的表达及其临床预后相关性的实验研究[D]. 王兵. 甘肃中医药大学, 2021(01)
- [2]miR-451靶向MIF调控宫颈癌细胞生物学功能并通过外泌体释放影响其化疗敏感性[D]. 白桦. 山西医科大学, 2020(11)
- [3]miR-15a-5p通过Wnt/β-catenin通路调控大肠癌多药耐药的研究[D]. 黄艳洁. 承德医学院, 2020(02)
- [4]姜黄素通过调节p38MAPK信号通路逆转食管癌Eca-109/VCR细胞耐药研究[D]. 王维兵. 河北北方学院, 2019(01)
- [5]MiR-145在食管癌细胞多药耐药中的作用及其机制研究[D]. 王喜成. 新乡医学院, 2017(03)
- [6]薏苡仁油注射液抑制LncRNA-PVT1表达影响胃癌细胞耐药性的研究[D]. 张先稳. 扬州大学, 2017(06)
- [7]MDR1、MRP1和ABCG2在结直肠腺癌的表达及其临床意义[D]. 赵炳军. 河北北方学院, 2016(03)
- [8]Caveolin-1在食管鳞癌中的表达及其调控食管鳞癌细胞多药耐药性的机制研究[D]. 张松. 郑州大学, 2016(01)
- [9]食管癌多药耐药机制的研究进展[J]. 张宏鑫,张颖. 现代药物与临床, 2015(06)
- [10]食管鳞癌中MDR1基因的表达与多药耐药的关系[J]. 刘亮,左连富,郭建文. 中国老年学杂志, 2014(16)