马铃薯海藻糖酶基因人工miRNA载体的构建

马铃薯海藻糖酶基因人工miRNA载体的构建

论文摘要

Microcosmic (miRNAs)是一类具有调控功能的内源性单链非编码小分子RNA,通过在转录后水平与靶基因互补结合来调控靶基因的表达。海藻糖是一种广泛存在于植物体内的渗透调节性物质,其在植物响应干旱胁迫中发挥着非常重要的作用。本研究利用人工miRNA技术(artificial microRNA, amiRNA)设计特异性沉默马铃薯海藻糖基因(StTRE)的人工miRNA (amiR-StTRE),并利用巢式PCR技术克隆得到包含amiRTRE前体序列的701 bp目的片段。然后将获得的DNA片段(701 bp)与表达载体pCPB121通过双酶切和质粒重组法构建StTRE基因amiRNA表达载体(pCPB121-amiR-StTRE),并经过双酶切图谱分析和测序检测,成功构建了表达载体pCPB121-amiR-StTRE。以期有目的地利用amiRNA进行马铃薯的抗旱性遗传改良提供分子理论依据。

论文目录

  • 1 结果与分析
  •   1.1 马铃薯StTRE基因的获得及序列分析
  •   1.2 马铃薯StTRE基因amiRNA (amiR-StTRE) 前体片段的扩增
  •   1.3 马铃薯StTRE基因amiRNA克隆载体的构建
  • 2 讨论
  • 3 材料与方法
  •   3.1 质粒和菌株
  •   3.2 工具酶与试剂
  •   3.3 数据库与分析软件
  •   3.4 马铃薯StTRE基因amiRNA的设计及扩增引物的获得
  •   3.5 StTRE基因amiRNA前体序列的扩增及克隆载体的构建
  •   3.6 表达载体的构建与农杆菌遗传转化
  • 作者贡献
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王周霞,罗红玉,张欢欢,朱熙,刘雪,李世贵,王树林,杨江伟,张宁,司怀军

    关键词: 马铃薯,海藻糖酶基因,人工技术,干旱胁迫

    来源: 分子植物育种 2019年15期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,农作物

    单位: 甘肃农业大学生命科学技术学院,甘肃农业大学甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室甘肃省干旱生境作物学省部共建国家重点实验室培育基地

    基金: 甘肃农业大学大学生科研训练计划(SRTP)项目(20170922),甘肃省青年自然基金(1606R JYA236),国家自然科学基金(31660416,31460370)共同资助

    分类号: S532;Q943.2

    DOI: 10.13271/j.mpb.017.005010

    页码: 5010-5015

    总页数: 6

    文件大小: 1613K

    下载量: 220

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