陈琪[1]2003年在《双水相萃取天冬氨酸转氨酶及其酶学性质初步研究》文中认为天冬氨酸转氨酶是苯丙酮酸转氨酶法制备L-苯丙氨酸路线的关键酶，本实验室所开发的该工艺路线已经初步实现了规模化生产，但由于采用游离细胞转化，酶转化的产物与副产物的积累仍无法满足低成本生产的要求，有必要通过酶的纯化获得较纯的酶液进行系统研究，为促进该路线的工业化进程提供基础数据。本文以产天冬氨酸转氨酶的大肠杆菌为研究对象，考察并选择了细胞破碎的最优方法，对破碎离心所得到的粗酶液采用双水相萃取技术进行分离纯化确定最佳体系与最佳参数，详细考察了天冬氨酸转氨酶的酶学性质以及影响转化性能的各因素，为更好的利用该酶进行产业化生产打下了良好的基础。本实验分别考察了化学破碎法、高压匀浆法和超声波破碎法对E.coli的破碎效果，综合考虑破碎后菌悬液光密度、酶活以及批次处理量，选定超声波破碎法为最佳破碎方法。对影响超声波破碎的各因素进行考察，得到超声波破碎的最佳条件是：批次处理量为100mL，破碎时间为20min，破碎功率为700W。实验研究了不同的双水相体系对天冬氨酸转氨酶的萃取分离效果，对聚乙二醇/无机盐成相系统的进行了系统的研究，初步确定PEG1000/ Na2HPO4为研究体系，并考察体系pH值、无机盐对双水相体系分配系数和纯化系数的影响。当PEG1000的质量分数为18％、Na2HPO4的质量分数为20％时，双水相体系对天冬氨酸转氨酶的分离系数和纯化系数分别为2.36和2.94，单批次酶活收率为88.6％。通过对双水相萃取所得的酶液进行系统的酶学性质考察，得到该酶的最适反应温度为45℃，最佳反应pH范围在8.5～9.0之间，Mg2＋、Mn2＋为天冬氨酸转氨酶的激活剂，Cu2＋是抑制剂。通过实验证明，转化体系内含有的少量苯丙酮酸类似物对产物L-苯丙氨酸的生成无明显影响；粗酶液中所含杂酶对苯丙酮酸的有一定的降解作用；粗酶液中所含杂酶对体系中生成的L-苯丙氨酸、丙酮酸均有较大程度的降解作用，从而影响了产物及副产物的积累；无机盐对天冬氨酸转氨酶有抑制作用，应尽量降低反应液中的盐浓度。
陈琪, 周华, 孙广海, 韦萍[2]2004年在《双水相体系萃取天冬氨酸转氨酶》文中研究指明研究了不同的双水相体系对天冬氨酸转氨酶的萃取分离效果,对聚乙二醇/无机盐成相系统进行了系统的研究,初步确定PEG1000 Na2HPO4为研究体系,并考察体系pH值、无机盐对双水相体系分配系数和纯化系数的影响。当PEG1000的质量分数为18%、Na2HPO4的质量分数为20%时,双水相体系对天冬氨酸转氨酶的分离系数和纯化系数分别为2 36和2 94。
参考文献：
[1]. 双水相萃取天冬氨酸转氨酶及其酶学性质初步研究[D]. 陈琪. 南京工业大学. 2003
[2]. 双水相体系萃取天冬氨酸转氨酶[J]. 陈琪, 周华, 孙广海, 韦萍. 南京工业大学学报(自然科学版). 2004