牛病毒性腹泻病毒Real-time PCR检测方法的建立

牛病毒性腹泻病毒Real-time PCR检测方法的建立

论文摘要

根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5’端非编码区(5’UTR)的核苷酸序列,设计特异性扩增引物,建立BVDV的实时荧光定量PCR检测方法。建立的方法只能检测到BVDV,与猪瘟病毒等没有交叉反应,具有高度特异性;在10~1~10~8copies/μL模板范围内具有良好的线性关系,所制作的标准曲线相关系数为0.993,最低可检测到3.0×10~4个拷贝数的病毒核酸,其敏感性为普通PCR的100倍,具有灵敏度高的特点;不同情况下3次重复实验,变异系数小于2.8%,具有重复性好的特点。本研究建立的BVDV荧光定量PCR检测方法可以用于牛病毒性腹泻病变的早期诊断和病毒鉴定。

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 毒株与细胞
  •     1.1.2 主要试剂
  •     1.1.3 主要仪器
  •     1.1.4 引物设计与合成
  •   1.2 实验方法
  •     1.2.1 病毒培养
  •     1.2.2 病毒RNA和c DNA的合成
  •     1.2.3 常规PCR
  •     1.2.4 标准阳性模板的构建
  •     1.2.5 实时荧光定量PCR溶解曲线的绘制。
  •     1.2.6 实时荧光定量PCR检测方法的评价
  •       1.2.6. 1 特异性
  •       1.2.6. 2 敏感性
  •       1.2.6. 3 重复性
  • 2 结果与分析
  •   2.1 BVDV特异性片段扩增结果
  •   2.2 标准曲线的绘制
  •   2.3 实时荧光定量PCR的特异性、敏感性及重复性实验
  •     2.3.1 特异性试验
  •     2.3.2 敏感性试验
  •     2.3.3 重复性试验
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 任晨玮,罗润波,索朗斯珠

    关键词: 牛病毒性腹泻病毒,实时荧光定量,检测

    来源: 高原农业 2019年02期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 西藏农牧学院动物科学学院,华中农业大学动物医学院

    基金: 西藏自治区自然科学基金重点项目,国家肉牛牦牛产业体系项目(CARS-37)

    分类号: S852.653

    DOI: 10.19707/j.cnki.jpa.2019.02.012

    页码: 187-192+230

    总页数: 7

    文件大小: 1212K

    下载量: 147

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