一、抑癌基因p16的研究进展（论文文献综述）
来正伟,王华斌,陈建亮,温达静[1]（2021）在《老年宫颈癌HPV感染亚型及抑癌基因p53、p16、pRb表达》文中研究说明目的比较高危型、低危型人乳头瘤病毒（HPV）感染老年宫颈癌（CC）患者的抑癌基因p53、p16、pRb表达情况,分析抑癌基因p53、p16、pRb表达与老年CC患者高危型HPV感染的关系。方法回顾收集医院2005年12月至2018年9月经病理组织确诊并完成治疗、随访的140例老年HPV感染CC患者癌组织标本,检测标本组织内抑癌基因p53、p16、pRb表达情况;检测老年CC患者HPV感染亚型并分组;比较高危型、低危型HPV感染患者基线资料、实验室检查指标等,分析抑癌基因p53、p16、pRb表达与老年CC患者HPV感染亚型的关系。结果 140例老年CC患者中128例高危型HPV感染,占91.43%;高危型HPV感染组抑癌基因p53、p16、pRb表达均低于低危型组,差异有统计学意义（P<0.05）;组间其他基线资料比较差异无统计学意义（P>0.05）;经二元Logistic回归分析后建立多元回归模型,结果显示,抑癌基因p53、p16、pRb低表达是老年CC患者高危型HPV感染的影响因子（OR>1,P<0.05）。结论老年CC患者多为高危型HPV感染,且抑癌基因p53、p16、pRb多呈低表达,抑癌基因p53、p16、pRb低表达可能是老年CC患者高危型HPV感染的风险因素,临床应据此提出针对性干预方案,以指导老年宫颈病变患者抑癌基因p53、p16、pRb低表达早期干预,预防高危型HPV感染CC发生。
马惠苗[2]（2021）在《香烟烟雾诱导慢性阻塞性肺病的发生和向肺癌转化的作用及白头翁皂苷B4的干预机制研究》文中指出目的:研究白头翁皂苷B4对单纯香烟烟雾诱导的慢性阻塞性肺病的保护作用并探讨其可能的作用及机制,为治疗慢阻肺防止其向肺癌转变提供实验依据。第一部分白头翁皂苷B4对慢性阻塞性肺病小鼠的药效以及作用机制研究方法:80只C57BL/6小鼠,雌雄各半,通过连续香烟烟雾诱导法建立COPD小鼠模型。在造模第9周,按照体重将小鼠随机分为正常组、CS诱导组、白头翁皂苷B4高中低剂量组,剂量依次为6mg/kg、3mg/kg、1.5mg/kg,阳性对照组为地塞米松,剂量为1.5mg/kg。熏烟前1h给药,持续4周。在造模及给药期间连续观察小鼠体重变化情况。造模及给药结束后,采用肺功能仪测定模型及各给药组小鼠肺功能参数的变化;高通量蛋白芯片技术测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎性因子的含量;HE染色观察肺组织病理变化及上皮细胞增生情况;实时荧光定量PCR法测定小鼠肺组织中转化生长因子-β（TGF-β）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）基因表达水平以及基质金属蛋白酶2（MMP2）、基质金属蛋白酶9（MMP9）、基质金属蛋白酶12（MMP12）、基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP1）的表达;采用试剂盒测定小鼠血浆中髓过氧化物酶（MPO）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活力以及丙二醛（MDA）含量;免疫组织化学法测定肺组织中抑癌基因P53、增殖细胞核抗原ki67以及核内不均一核糖核蛋白hnRNP的表达;蛋白免疫印迹（Western blot）检测小鼠肺组织中DNA甲基转移酶（Dnmt1）、脆性组氨酸三联体（FHIT）、抑癌基因CDKN2A/P16蛋白表达水平的变化。结果:在造模期间,烟雾诱导组小鼠体重增长基本停滞,易聚堆,精神倦怠,偶有脱毛现象。白头翁皂苷B4不同剂量组体重变化不明显,地塞米松组小鼠体重有下降趋势;白头翁皂苷B4能够显着降低吸气时间（Ti）、肺阻力（LR）（P<0.05）,升高最大呼气流速（PEF）（P<0.05）,对肺功能具有一定程度的改善作用;同时,白头翁皂苷B4能够降低支气管肺泡灌洗液中炎性因子白介素2（IL-2）、白介素5（IL-5）、白介素8（IL-18）、白介素10（IL-10）的含量（P<0.01）;HE染色对COPD肺组织病理切片进行观察发现,香烟烟雾诱导组小鼠大量炎症细胞包围肺组织,且肺泡间隔变大,白头翁皂苷B4各个剂量组及地塞米松组可缓解炎性细胞浸润情况;与正常组比较,模型组肺组织上皮细胞基底膜出现细胞增生现象,而给与白头翁皂苷B4后增生现象不明显。RT-PCR结果表明,模型组小鼠肺组织中炎性因子TGF-β、TNF-α及IL-1β基因表达水平显着上调（P<0.01）,白头翁皂苷B4能够显着下调其基因表达水平;此外,白头翁皂苷B4能够显着降低MMP2、MMP12基因表达并升高MMP9、TIMP1基因表达水平（P<0.01）;对于氧化应激指标,模型组MDA含量及MPO显着升高,而GSH-PX活力显着降低（P<0.01）,白头翁皂苷B4给药组能够不同程度降低MDA含量及MPO活力,同时能够显着提升GSH-PX活力（P<0.05,P<0.01）;免疫组织化学实验结果表明模型组P53蛋白表达显着上调,白头翁皂苷B4中剂量和高剂量组均能够显着上调P53蛋白表达（P<0.01）,模型组Ki67及hnRNP蛋白表达与正常组相比无差异;最后,western blot结果表明模型组Dnmt1、Cdkn2a/P16蛋白表达显着降低（P<0.01）,白头翁皂苷B4不同剂量组对Dnmt1、Cdkn2a/P16蛋白表达无影响。模型组FHIT蛋白表达显着升高,白头翁皂苷B4不同剂量组及地塞米松组可显着下调该蛋白表达水平（P<0.01）。结论:1、白头翁皂苷B4对COPD小鼠肺功能具有一定程度改善作用,能够缓解肺功能相关参数变化,减轻肺组织炎性症状。2、白头翁皂苷B4能够通过平衡小鼠肺组织中蛋白酶与抗蛋白酶表达,降低氧化应激水平,改善肺组织氧化应激进而起到抗炎作用。3、白头翁皂苷B4对慢性阻塞性肺病小鼠具有一定的保护作用,可通过减轻支气管柱状上皮细胞增生,降低肺组织中FHIT,升高P53蛋白表达进而延缓COPD向肺癌转化。第二部分白头翁皂苷B4对香烟烟雾提取物CSE诱导的人支气管上皮细胞16HBE的影响方法:自制香烟烟雾CSE提取装置,作用于人支气管上皮细胞进而建立COPD体外实验模型,CCK8细胞毒性实验探究不同浓度香烟烟雾CSE,不同浓度白头翁皂苷B4及地塞米松对16HBE细胞的安全剂量范围和最适作用时间。此外,CCK8法继续探究造模24/36/48h后,白头翁皂苷B4对16HBE细胞活力的影响;PT-PCR测定CSE作用不同时间点时炎性细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8,TGF-β基因表达水平及白头翁皂苷B4干预CSE诱导48h后TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8,TGF-β,Slug,Snail1基因表达水平的影响;WB检测CSE诱导的16HBE细胞中MAPK信号通路相关蛋白及TTF-1、E-cadherin、Fox A2、ZO-1蛋白表达。结果:CCK8结果表明,随着CSE作用时间,作用浓度的不断延长,细胞活力显着下降,当香烟烟雾CSE浓度达到5%及以上时,细胞存活率显着降低（P<0.01）。当白头翁皂苷B4孵育24及36h时,B4不同浓度对细胞存活率无影响,当时间延长至48h时,细胞存活率显着下降（P<0.01）。与对照组相比,在24h及36h时,地塞米松给药浓度达到2000μM,细胞活力显着下降。此外,白头翁皂苷B4药效实验结果显示,与对照组比较,5%CSE诱导不同时间组细胞活力显着降低（P<0.01）,与模型组比较白头翁皂苷B4不同浓度组对细胞活力有一定升高趋势,但无明显差异。RT-PCR结果表明,随着CSE孵育时间的延长,炎性因子IL-6,IL-1β,TGF-β基因表达水平逐渐升高（P<0.05,P<0.01）,而TNF-α,IL-8在CSE诱导48h时有一定升高趋势,但无显着差异。白头翁皂苷B4干预后能够显着降低IL-1β,TGF-β、IL-8、TNF-α基因表达水平（P<0.05,P<0.01）。同时,可显着降低Snail1 mRNA表达（P<0.05,P<0.01）。WB结果表明,CSE诱导后MAPK信号通路中p-P38、AP-1（c-jun/c-Fos）蛋白表达显着升高（P<0.01）,白头翁皂苷B4中高剂量组及地塞米松组均能显着降低蛋白表达（P<0.01）。同时,白头翁皂苷B4可上调TTF-1、E-cadherin、ZO-1的表达,下调Fox A2蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。结论:香烟烟雾提取物（CSE）对人支气管上皮细胞（16HBE）具有不同程度的抑制作用,呈现浓度和时间依赖性,随着时间的延长,细胞存活率越来越低。且香烟烟雾提取物能够上调相关炎性因子的表达。白头翁皂苷B4能够通过降低炎性因子,调节MAPK信号通路相关蛋白及上皮细胞分化蛋白表达,从而发挥一定程度保护16HBE细胞免受CSE损害的作用。其机制可能与调节MAPK/TGFβ/TTF-1信号通路有关。
夏僮[3]（2021）在《双氢青蒿素对UHRF1沉默或过表达的前列腺癌PC-3细胞影响及机制研究》文中指出目的:探讨双氢青蒿素（Dihydroartemisinin,DHA）对泛素样含PHD和环指域1（Ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 1,UHRF1）沉默或过表达的前列腺癌PC-3细胞的影响及相关机制。方法:利用包含UHRF1或shRNA-UHRF1的慢病毒颗粒分别感染前列腺癌PC-3细胞,构建UHRF1过表达或干扰的细胞模型,并对各组细胞模型进行不同浓度DHA（0,25,50和100μmol/L）处理48 h。CCK-8法,划痕实验和FCM法对上述细胞模型及药物处理组的增殖、迁移和细胞周期凋亡进行检测。实时荧光定量PCR法、蛋白质印迹法和细胞免疫荧光实验检测各细胞模型及药物处理组UHRF1、DNMT1和p16INK4A的m RNA及蛋白表达。结果:1.CCK-8和划痕实验结果显示,DHA抑制PC-3细胞增殖迁移（P均<0.05）,过表达UHRF1一定程度抵抗DHA的抑制作用,沉默UHRF1联合DHA放大抑制效果（P均<0.05）。2.FCM结果显示,DHA诱导PC-3细胞凋亡和G1/S期阻滞（P均<0.05）,过表达UHRF1增加G2/M期细胞比例,一定程度抵抗DHA的促凋亡作用,沉默UHRF1联合DHA增加G1/S期阻滞细胞和凋亡细胞百分比（P均<0.05）。3.qRT-PCR和western blotting结果表明DHA抑制UHRF1及DNMT1的表达,上调p16INK4A的表达（P均<0.05）;过表达UHRF1一定程度抵抗DHA对p16INK4A的调控作用,但增强DHA对DNMT1蛋白水平的抑制效果;沉默UHRF1联合DHA进一步增加p16INK4A的表达（P均<0.05）。4.细胞免疫荧光结果显示,过表达UHRF1使PC-3细胞胞核p16INK4A蛋白表达明显下降,沉默UHRF1促进胞核p16INK4A的表达,DHA处理后进一步恢复p16INK4A的表达（P均<0.05）。结论:UHRF1可能通过抑制p16INK4A的表达,促进前列腺癌PC-3细胞的生长和转移。DHA能够有效抑制PC-3细胞的增殖和迁移,促进细胞凋亡,可能与下调UHRF1恢复p16INK4A的表达从而发挥其抑癌效应有关。这些发现表明UHRF1/DNMT1轴可能是DHA调控PC-3细胞增殖的重要通路。
秦宇[4]（2020）在《食管癌和癌前病变组织中CDKN2A/P16基因DNA甲基化和拷贝数缺失状态及其应用的探索研究》文中提出研究背景我国食管癌负担甚重,全球50%以上的食管癌病例来自我国。以内镜为主的现行筛查技术方案人群预防效果明显,主要适用于在高发区人群直接开展内镜筛查。该方案目前面临的主要问题是:由于缺乏高危人群浓缩和高危个体预测分子生物学指标,筛查效率和效益较低,难以迅速在一般人群中大范围推广应用。肿瘤抑制基因CDKN2A/P16基因（以下简称P16基因）的遗传/表观遗传失活是食管癌发生过程中的早期事件,在食管癌组织中该基因拷贝缺失频率高达60%以上。目前对于P16的遗传和表观遗传失活在食管癌发生过程中的变化规律,不同取样方法的一致性,及其与环境危险因素暴露之间的关系,是否可用于食管癌初筛及癌前病变预测预警均缺乏研究。研究目的本研究依托我国食管癌高发区人群筛查队列资源,分析食管癌组织中P16基因DNA甲基化和拷贝缺失的发生情况,并评价食管癌组织内的异质性对P16基因DNA甲基化检测结果的影响;分析P16基因DNA甲基化和拷贝缺失在食管癌发生过程中不同阶段的内镜活检组织、脱落细胞中的发生情况及其用于食管癌早期筛查的可行性;探索食管海绵球检查的人群接受性和脱落细胞采样效率,旨在为我国食管癌内镜早诊早治和筛查方案优化提供证据。材料与方法在食管癌高发区肿瘤专科医院招募住院病例,收集食管癌的癌及癌旁组织,检测P16基因DNA甲基化和拷贝数缺失情况;独立设计系统取样方法,收集食管癌患者手术组织的肿瘤模拟内镜活检组织及对应肿瘤部位切检组织和癌旁模拟内镜活检组织,对所有组织进行病理诊断和P16基因DNA甲基化,定量评价食管肿瘤异质性对病理诊断和P16基因DNA甲基化的影响。依托河南林州上消化道肿瘤筛查人群队列,收集不同级别的食管癌及癌前病变的常规内镜活检组织标本,内镜下刷取脱落细胞标本,分别对其进行P16基因DNA甲基化、拷贝数缺失检测,对比分析不同病变级别、不同方法取样标本的P16基因DNA甲基化阳性率,明确不同类型标本P16基因DNA甲基化的检测一致性;以组织病理诊断为金标准,结合环境暴露危险因素等信息,建立预测预警模型,评价P16基因DNA甲基化在食管癌及其癌前病变的初筛中的应用效果。依托人群筛查队列,首先应用食管海绵球收集食管脱落细胞标本,进行食管海绵球检查的接受性问卷调查,开展内镜检查,内镜下客观同步评价海绵球采样对食管粘膜的影响;提取海绵球采样的脱落细胞标本DNA,评价食管海绵球检查的人群接受度及食管脱落细胞标本采集的有效性。利用P16基因DNA甲基化诊断性测定方法和刚创建的该基因拷贝缺失定量检测方法,分别采用荧光PCR技术为基础的MethyLight和P16Light方法进行P16基因DNA甲基化和拷贝数缺失的检测。结果判定:以COLA2A为内参基因（Ct<29.3）,当3个平行检测管中至少2个甲基化P16基因扩增的Ct值<40,样品定义为P16基因DNA甲基化阳性;分别计算待测样品（癌、癌前病变组织）和参照样品（癌旁组织、白细胞）的P16相对拷贝数,若待测样品P16相对拷贝数比例低于参照样品的20%且p<0.05时,该样品定义为拷贝数缺失阳性。采用紫外分光光度仪和荧光定量PCR对食管海绵球获取的标本进行DNA浓度和β-ACT基因表达水平检测。采用SPSS 26.0软件对研究数据进行整理和统计学分析,显着性α为0.05。同一研究对象的癌、癌旁组织的P16基因DNA甲基化的Ct值差异比较采用配对样本的t检验;不同组间研究对象的P16基因DNA甲基化和拷贝数缺失阳性率的差异比较和趋势判断采用卡方检验。选取多因素Logistic回归分析中:1)p<0.05;2)p<0.25,OR>1.7或OR<0.5的因素进入回归模型。采用灵敏度、特异度、AUC等来描述各指标对食管病变的诊断准确性。研究结果1.常规取样食管癌组织中P16基因DNA甲基化、拷贝数缺失阳性率分别为63.0%（51/81）、66.7%（54/81）,单因素分析提示:P16基因DNA甲基化、拷贝数缺失与年龄、肿瘤体积和肿瘤分期等因素有关。P16基因DNA甲基化与拷贝数缺失存在显着相关性（p<0.01）,一致率为54.3%。早期食管癌组织中两个指标的联合检出率达88.8%,提示两者之间可能存在互补性。2.系统采样法收集组织中,配对的切检取样和模拟内镜活检取样组织的病理诊断一致率为65.0%;P16基因DNA甲基化阳性率分别为85.0%、68.9%,一致率为55%。癌旁组织的病理诊断异常率和P16基因DNA甲基化阳性率为15.7%、54.9%,并随其距肿瘤边缘距离的增加而下降。3.在内镜活检食管癌和癌前病变组织标本中P16基因DNA甲基化和拷贝数缺失的阳性率分别为20.9%和37.2%。P16基因DNA甲基化与研究对象的年龄、病变级别呈正相关,而拷贝数缺失阳性率仅与病变级别有显着关系。拷贝数缺失对不同级别病变诊断的准确性均高于甲基化,并联两个指标后的准确性均高于单独诊断,并在低级别上皮内瘤变及以上病变中达到最大值,灵敏度为58.8%,特异度为 95.2%,AUC 为 0.72（0.61-0.83）。4.食管脱落细胞标本P16基因DNA甲基化的总体阳性率为18.1%（19/105）。正常/炎症、低级别、高级别癌前病变、癌的阳性率分别为4.8%（3/62）、25.0%（3/12）、37.5%（3/8）、43.5%（10/23）,随着病变级别的增加逐步升高。单独采用食管脱落细胞P16基因DNA甲基化检测时,对高级别上皮内瘤变及以上病变的准确性最高,灵敏度、特异度分别为41.9%、91.9%,AUC为0.67（95%CI:0.55-0.79）。结合P16基因DNA甲基化后的环境暴露多因素Logistic回归模型对食管病变的预测准确性显着高于单纯的人群危险因素模型,对低级别及以上病变的准确性最高,灵敏度和特异度分别为86.1%、87.1%,AUC为0.93（95%CI:0.88-0.98）。5.内镜刷取的脱落细胞标本P16基因DNA甲基化在低级别及以上病变中的阳性率为37.2%（16/43）,显着高于活检组织标本的20.9%（9/43）。以组织病理诊断为金标准,P16基因DNA甲基化在食管癌（手术/活检组织）、高级别、低级别病变和正常/炎症中的阳性率分别为62.6%（72/115）、44.8%（13/29）、34.3%（12/35）和15.0%（25/167）,与病变级别呈现正向相关趋势（p<0.01）。6.80.0%受试者食管海绵球检查过程中没有出现难以忍受的痛苦和焦虑,50.0%的受试者出现了窒息感或呕吐感。海绵球检查对粘膜的影响较轻,主要是“无出血的浅表粘膜磨损”。食管海绵球可有效获取食管脱落细胞,DNA平均浓度为146.4ug/uL,经25、50倍稀释后,其β-ACT基因的平均Ct值分别为26.67和27.81。研究结论1.P16基因DNA甲基化和拷贝数缺失在食管癌组织中均广泛存在,二者在食管癌的早期诊断和筛查方面有潜在的应用前景。2.食管肿瘤异质性会显着影响肿瘤组织标本中P16基因DNA甲基化的检测结果。食管肿瘤中心部位组织在病理诊断、P16基因DNA甲基化检测方面更具有代表性,癌旁组织的P16基因DNA甲基化状态与其距肿瘤的距离密切相关。3.P16基因DNA甲基化和拷贝数缺失阳性率与食管病变级别密切相关。食管脱落细胞P16基因DNA甲基化检测可有效发现食管癌及癌前病变,结合P16基因DNA甲基化的预测模型在食管癌初筛方面具有潜在的应用价值。4.食管海绵球检查可有效获取食管脱落细胞,且人群接受性良好,有望用于食管癌人群初筛。
庞晨[5]（2020）在《铁皮石斛对肺腺癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用和对自噬相关因子、肿瘤相关因子表达影响的研究》文中提出目的:通过裸鼠体内移植瘤实验研究,初步探讨鲜铁皮石斛对人肺腺癌细胞移植瘤的抑制作用及其机制。方法:1、培养实验所需细胞并通过HE染色和免疫组织化学染色对其种属和来源进行相关的鉴定。2、建立A549肺腺癌细胞裸鼠移植瘤模型并进行实验研究:将裸鼠随机分为6组,包括空白对照组、阴性对照组（模型组）、阳性对照组（环磷酰胺组,CTX）、铁皮石斛低浓度组、铁皮石斛中浓度组、铁皮石斛高浓度组。裸鼠空白对照组和阴性对照组生理盐水灌胃（每天30m L/kg）、环磷酰胺组腹腔注射给药（每隔一天给药,0.025 g/kg）,低浓度铁皮石斛、中浓度铁皮石斛、高浓度铁皮石斛每天分别以6.25g/kg、12.5g/kg、25 g/kg灌胃给药,在给药期间,每隔一天测量一次瘤体积。停药次日,处死裸鼠,剥离瘤体称重测量后待用。3、HE染色法观察各组移植瘤组织的病理形态学变化;免疫组织化学法观察铁皮石斛对裸鼠移植瘤瘤组织中自噬相关因子Beclin1以及增值指数Ki67的蛋白表达的影响。4、RT-PCR技术检测铁皮石斛对裸鼠移植瘤组织中的抑癌基因p53、p16以及EGFR基因表达的影响。结果:1、鉴定实验表明目标细胞为人的肺腺癌细胞株且成功建立A549肺腺癌细胞裸鼠移植瘤模型。2、与阴性对照组（模型组）相比,阳性对照组以及铁皮石斛低、中、高浓度组药物均可减缓裸鼠移植瘤生长,缩小肿瘤体积,且差异有统计学意义（P<0.05）;环磷酰胺组和低中高3个浓度剂量的抑瘤率分别达到62%、51%、52%、56%,并呈剂量依赖关系。3、免疫组化结果显示:同阴性对照组相比,中浓度铁皮石斛组、高浓度铁皮石斛组、阳性对照组的Beclin1阳性表达率逐渐升高;高浓度铁皮石斛组、阳性对照组的Ki67阳性率逐渐降低。4、RT-PCR结果显示:与阴性对照组相比,中浓度和高浓度铁皮石斛给药组裸鼠移植瘤组织中的EGFR m R N A水平均显示下调且高浓度铁皮石斛给药组差异性有统计学意义（P<0.05）;各浓度铁皮石斛给药组裸鼠移植瘤组织中的p53和p16 m RNA水平均显示上调;其中与阴性对照组相比,中浓度和高浓度铁皮石斛给药组裸鼠移植瘤组织中的p 1 6 m R N A差异性有统计学意义（P<0.0 5）;各浓度铁皮石斛给药组裸鼠移植瘤组织中的p53 m RNA差异性均有统计学意义（P<0.0 5）。结论:铁皮石斛具有抑制肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤组织生长的作用,其作用机制可能与上调自噬相关因子B e c l i n 1和抑癌基因p 1 6和p 5 3的表达、下调E G F R的表达相关;可能通过启动细胞自噬从而诱导细胞凋亡。
王璐杨[6]（2020）在《p16/Ki-67双染检测在宫颈癌筛查分流中的应用价值》文中研究表明背景与目的宫颈癌是目前唯一病因明确可防可控的癌症,经过我国几十年防控工作的开展,依然严重威胁着女性健康。2018年我国新发病例106,000例,发病率约15.5/10万,是2018年宫颈癌发病人数最多的国家。当下我国宫颈癌初筛措施仍主要依赖HPV检测、液基细胞学检测（TCT）或是两者联合筛查。2012年最新版的世界卫生组织（WHO）将子宫颈癌前病变阶段的三级分类法改为二级分类法并建议,在新命名转化过渡期间使用鳞状上皮内病变（SIL,Squamous intraepithelial lesion）同时附加上皮内瘤变（IN,intraepithelial neoplasia）命名,即低级别鳞状上皮内病变（LSIL,CINⅠ）和高级别鳞状上皮内病变（HSIL,CINⅡ）、（HSIL,CINⅢ）。其中HSIL（CINⅡ+）被定义为具有进展为子宫颈癌高风险的病变,需要及时被筛查发现、及时干预。然而细胞学检测的敏感度及HPV检测的低特异度,造成二者在宫颈癌筛查中的不足。在我国,不同水平的细胞病理学医师得出的报告重复性及符合率较低,对于意义不明的不典型鳞状细胞（ASCUS）及不除外高级别上皮内病变的非典型鳞状细胞（ASC-H）的诊断更甚。在细胞病理医师质量参差不齐的背景下,大量HPV16/18阳性及细胞学异常人群需要转诊阴道镜,给患者带来额外的精神及经济负担。宫颈癌筛查管理中有效分流措施的重要性日益凸显。作为宫颈癌的特异性生物分子标记物的p16及Ki-67蛋白,大量研究证实同一细胞内的p16、Ki-67蛋白在调控细胞生长周期的作用中是互相拮抗的。二者在同一细胞内同时表达往往提示该细胞增殖异常及癌变的倾向,有学者提出可将这两种标志物的检出作为提前检测宫颈癌前病变的一种方法。本研究对p16/Ki-67联合双染检测进行研究,即以免疫细胞化学染色为原理对宫颈脱落细胞涂片进行检测,评估其在宫颈癌筛查分流管理中的应用价值。资料与方法选取2018年9月-2019年10月在郑州大学第二附属医院妇科门诊行宫颈癌筛查时细胞学结果异常（结果≥ASCUS者）,且具有HC2HPV检测结果及病理结果的381例女性的剩余有效宫颈脱落细胞保存液,进行p16/Ki-67双染检测。以病理结果为金标准,分析p16/Ki-67免疫细胞化学双染与HPV检测这两种不同方式分别在ASC人群、LSIL人群及细胞学结果≥ASCUS的人群中CINⅡ+的检出效果,比较两者的灵敏度（SE）、特异度（SP）、阳性预测值（PPT）、阴性预测值（NPT）、阳性似然比（+LR）、阴性似然比（-LR）,组间效果进行X2检验,并使用符合率、Kappa指数分析其与金标准的一致性,比较两种方式在宫颈癌筛查中的效果。结果1.细胞学≥ASCUS人群病理学分布特征及两种不同检测方法的表达水平381例细胞学≥ASCUS的患者标本中,有159例ASC（ASCUS&ASC-H）,其中 ASCUS117 例,ASC-H42 例,有 162 例 LSIL,52 例 HSIL,8 例 SCC。159例细胞学结果为ASC的患者标本中,其病理学诊断结果为炎症/正常者有57例,CINI有44例,CINⅡ有30例,CINIⅡ有19例,SCC9例。162例细胞学结果为LSIL的患者标本中,其病理学诊断结果为炎症/正常者有59例,CINI有60例,CINⅡ有39例,CINⅢ有3例,SCC1例。60例细胞学结果≥HSIL的患者标本中,其病理学诊断结果为CINⅡ有25例,CINIⅡ有23例,SCC12例。人群病理学结果显示共有116例正常或慢性炎症,90例CINI,108例CINⅡ,45例CINⅢ,22例宫颈癌。p16/Ki-67免疫细胞化学双染检测在慢性炎症、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌中表达阳性率分别为:12.07%、21.15%、85.10%、77.78%、86.36%,HPV检测在上述不同宫颈病变等级中表达阳性率分别为:74.14%、76.92%、94.68%、100%及 100%。2.p16/Ki-67双染检测与HPV检测在细胞学ASC中CINⅡ+的检出结果p16/Ki-67双染检测对于CINⅡ+检出的灵敏度为82.75%（95%CI,70.12%-90.99%）、特异度为 89.10%（95%CI,80.96%-94.17%）、阳性预测值 81.35%（95%CI,68.67%-89.89%）、阴性预测值 90.00%（95%CI,81.96%-94.84%）、阳性似然比7.591（95%CI,4.297-13.438）、阴性释然比 0.194（95%CI,0.110-0.341）。HR-HPV DNA检测对于CINⅡ+检出的灵敏度为96.55%（95%CI,87.05%-99.40%）、特异度为 36.63%（95%CI,27.44%-46.86%）、阳性预测值 46.67%（95%CI,37.58%-55.97%）、阴性预测值 94.87%（95%CI,81.37%-99.11%）、阳性似然比1.523（95%CI,1.303-1.781）、阴性似然比 0.094（95%CI,0.023-0.380）。3.细胞学LSIL中p16/Ki-67双染、HPV检测及联合筛查对于CINⅡ+的检出结果p16/Ki-67双染检测对于CINⅡ+检出的灵敏度为67.77%（95%CI,53.70%-82.33%）、特异度为 83.19%（95%CI,74.99%-89.19%）、阳性预测值 60.00%（95%CI,45.20%-73.27%）、阴性预测值 88.39%（95%CI,80.60%-93.43%）、阳性似然比 4.151（95%CI,2.659-6.481）、阴性释然比 0.363（95%CI,0.230-0.574）。HR-HPV DNA 检测对于 CINⅡ+检出的灵敏度为 100%（95%CI,89.79%-100%）、特异度为 31.93%（95%CI,23.86%-41.20%）、阳性预测值 34.68%（95%CI,26.51%-43.81%）、阴性预测值 100%（95%CI,88.57%-100%）、阳性似然比 1.469（95%CI,1.299-1.662）。p16/Ki-67 双染联合 HR-HPV DNA 检测在 LSIL 人群中关于CINII+的诊断效能如下,灵敏度为90.70%（95%CI,76.95%-96.98%）、特异度为 92.44%（95%CI,85.73%-96.26%）、阳性预测值 81.25%（95%CI,66.90%-90.56%）、阴性预测值 96.49%（95%CI,90.73%-98.87%）、阳性似然比11.992（95%CI,6.353-22.638）、阴性似然比 0.100（95%CI,0.039-0.256）。4.p16/Ki-67双染与HPV检测在细胞学≥ASCUS人群中CINⅡ+的检出结果p16/Ki-67双染检测对于CINII+检出的灵敏度为83.83%（95%CI,77.17%-88.90%）、特异度为 85.98%（95%CI,80.43%-90.92%）、阳性预测值 82.35%（95%CI,75.60%-87.60%）、阴性预测值 87.20%（95%CI,81.76%-91.25%）、阳性似然比 5.980（95%CI,4.263-8.388%）、阴性释然比 0.188（95%CI,0.133-0.266）。HR-HPV DNA检测对于CINII+检出的灵敏度为95.81%（95%CI,91.22%-98.15%）、特异度为 32.71%（95%CI,26.56%-39.49%）、阳性预测值 52.63%（95%CI,46.86%-58.34%）、阴性预测值 90.90%（95%CI,81.61%-95.96%）、阳性似然比 1.424（95%CI,1.290-1.571）、阴性似然比 0.128（95%CI,0.061-0.270）。5.p16/Ki-67双染与HR-HPV检测与病理结果金标准的一致性分析结果p16/Ki-67双染检测在细胞学ASC中对于CINⅡ+检出的符合率为0.696,Kappa值为0.716;HR-HPV DNA检测在细胞学ASC中对于CINⅡ+检出的符合率为0.427,Kappa值为0.270;p16/Ki-67双染检测在细胞学LSIL中CINⅡ+检出的符合率为0.431,Kappa值为0.503;HR-HPV DNA检测在细胞学LSIL中CINⅡ+检出的符合率为0.323,Kappa值为0.199;p16/Ki-67双染检测在细胞学≥ASCUS 中 CINⅡ+检出的符合率为 0.696,Kappa 值为 0.696;HR-HPV DNA 检测在细胞学≥ASCUS中CINⅡ+检出的符合率为0.471,Kappa值为0.465。结论1.与HR-HPVDNA检测相比,p16/Ki-67免疫细胞化学双染检测能够在高敏感度的基础上具有更高的特异度,与病理金标准一致性较高。2.在细胞学LSIL人群中,即使p16/Ki-67免疫细胞化学双染检测的敏感度低于HR-HPV DNA检测,作为独立筛查方法的p1 6/Ki-67双染检测效果并不理想,然而与HR-HPV DNA检测联用却能大大提高筛查准确性。
黄裕平[7]（2020）在《PAX1、p16及miR-124-2基因连续甲基化与宫颈病变的一致性研究》文中研究指明目的:本项目旨在检测正常宫颈组织细胞及不同宫颈病变组织细胞中PAX1、p16及miR-124-2基因区段连续甲基化情况,研究其与临床病理程度的关系,探究其在宫颈病变的发生及发展过程中的意义,初步评估其在宫颈病变筛查与早期诊断的临床意义。方法:1.于2018年12月至2019年11月深圳市人民医院就诊且HPV检测阳性的患者中,收集活检病理检查符合条件的患者液基细胞学标本各25例,包括:（1）未见上皮内病变或恶性细胞症（NILM）;（2）低度鳞状上皮内病变（LSIL）;（3）高度鳞状上皮内病变（HSIL）;（4）宫颈鳞状细胞癌（SCC）。2.利用基于重亚硫酸盐转化的新一代甲基化测序技术,检测PAX1、p16及miR-124-2基因区段连续甲基化情况。3.机器学习并评估PAX1、p16及miR-124-2基因甲基化与宫颈病变的关系。结果:1.样本平均年龄为41.22±11.59岁,组间差异有统计学意义,其中宫颈癌组平均年龄较其他三组明显增高。2.HPV16/18型感染率随着病变进展而升高,除去6例未分型的样本,合并16和（或）18型HPV感染者在HSIL及SCC中比例为76.6%,而LSIL及NILM组仅为25.5%。3.PAX1基因中检测到39个有意义的甲基化位点,组成（1,3）（第1至第3位甲基化位点,下同）,（4,32）及（34,36）连续甲基化位点组合,三者的ROC曲线表现类似。以（1,3）为例,其平均甲基化水平诊断HSIL+时AUC 0.79（95%CI,70-87%）,取最佳截断值为0.04,此时约登指数为0.52,对应的敏感度和特异度分别为70%和82%;诊断SCC时AUC 0.91（95%CI,84-96%）,取最佳截断值为0.11,此时约登指数为0.75,对应的敏感度和特异度分别为84%和90.67%。4.p16基因中检测到11个有意义的甲基化位点,组成（0,1）和（3,9）连续甲基化位点组合:（0,1）的平均甲基化水平诊断HSIL+时AUC 0.88（95%CI,80-94%）,取最佳截断值为0.15,此时约登指数为0.68,对应的敏感度和特异度分别为68%和100%;诊断SCC时AUC 0.98（95%CI,93-100%）,取最佳截断值为0.20,此时约登指数为0.84,对应的敏感度和特异度均为92%;（3,9）的平均甲基化水平诊断HSIL+时AUC 0.89（95%CI,81-94%）,取最佳截断值为0.09,此时约登指数为0.68,对应的敏感度和特异度分别为72%和96%;诊断SCC时AUC 0.97（95%CI,92-100%）,取最佳截断值为0.20,此时约登指数为0.84,对应的敏感度和特异度均为92%。5.miR-124-2基因中检测到10个有意义的甲基化位点,组成（2,3）和（5,9）连续甲基化位点组合:（2,3）的平均甲基化水平诊断HSIL+时AUC 0.84（95%CI,75-91%）,取最佳截断值为0.13,此时约登指数为0.58,对应的敏感度和特异度分别为72%和86%;诊断SCC时AUC 0.96（95%CI,90-99%）,取最佳截断值为0.13,此时约登指数为0.80,对应的敏感度和特异度分别为100%和80%%;（5,9）的平均甲基化水平诊断HSIL+时AUC 0.85（95%CI,76-91%）,取最佳截断值为0.08,此时约登指数为0.62,对应的敏感度和特异度分别为72%和90%;诊断SCC时AUC 0.97（95%CI,91-99%）,取最佳截断值为0.13,此时约登指数为0.84,对应的敏感度和特异度均为92%。结论:本研究证明了PAX1、p16及miR-124-2连续甲基化程度可以作为宫颈病变的筛查及早期诊断的参考指标,并对传统的HPV检测及细胞学检查进行补充。
秦宇,魏文强[8]（2020）在《DNA甲基化与食管癌发生发展相关性及临床应用前景》文中研究说明目的 DNA异常甲基化与食管癌的关系逐渐成为近年来食管癌防治领域的研究热点。总结近年来DNA甲基化与食管癌关系及其应用的研究进展,为该领域的研究提供参考。方法以"食管癌、抑癌基因过甲基化、诊断准确性"为主要关键词,检索2000-01-2018-12发表并收录于PubMed数据库的文献。主要纳入标准:（1）阐述DNA甲基化或抑癌基因过甲基化与食管癌关系及其在食管癌的早期诊断、指导临床治疗和预后判断方面应用的相关文献;（2）样本量较大（n≥30）且有对照组;（3）优先选取对DNA甲基化与食管癌关系的应用有具体评价指标的,如灵敏度、特异度等。排除标准:（1）重复文献;（2）样本为非人（动物标本或培养的细胞）的文献。根据纳入标准,符合分析的文献共28篇。结果食管癌患者普遍存在抑癌基因的高甲基化,且其比例明显高于正常对照（自身对照或异体对照）。p16、MGMT在食管鳞癌中的甲基化频率分别可达到88%和80.4%,结肠腺瘤息肉易感基因在食管鳞癌中的甲基化频率（50%）低于其在腺癌中的频率（92%）;抑癌基因高甲基化用于食管癌的早期诊断时具有很好的准确性,且检测多个抑癌基因可以大幅提高其效能（灵敏度64.3%,特异度100.0%,曲线下面积0.821）。以食管脱落细胞为基础的甲基化检测方法,可以有效发现食管癌前病变,这为食管癌筛查提供了新的研究方向。在指导食管癌患者治疗和病情监测方面,CHFR、PAX5和ZNF695等基因分别可以判断晚期食管癌患者对紫杉醇、顺铂和放疗的敏感性;抑癌基因高甲基化的食管癌患者生存期明显长于未甲基化的患者,并且在预测肿瘤复发时,其灵敏度可达75%以上。结论 DNA异常甲基化与食管癌的发生发展密切相关,抑癌基因的高甲基化在食管癌的人群筛查、早期诊断方面有很好的应用前景,但在未来需要更大样本量、多中心的研究进行验证。在指导临床治疗和预后预测方面为晚期食管癌患者提供了更多的选择。
朱振国[9]（2019）在《姜黄素联合5-Aza-CdR对骨肉瘤抑癌基因P16，PTEN的去甲基化作用研究》文中进行了进一步梳理目的:研究姜黄素联合5-Aza-CdR是否能增强对骨肉瘤抑癌基因P16,PTEN的去甲基化作用。方法:（1）单独或联合使用不同质量浓度的姜黄素与5-Aza-CdR作用于骨肉瘤细胞;（2）观察细胞的生长情况和形态变化（采用倒置相差显微镜）;（3）CCK-8法检测细胞生长抑制率;（4）甲基化特异性聚合酶链反应（methyl-ation specific PCR,MSP）法检测干预前后骨肉瘤Saos-2细胞PTEN基因和P16基因的甲基化状态;（5）RT-PCR检测相关基因P16,PTEN的表达情况;（6）western blot检测P16,PTEN蛋白水平的表达情况。结果:（1）姜黄素和5-Aza-CdR均呈现出以时间和浓度梯度依赖性的关系抑制骨肉瘤细胞的生长。（2）MSP法检测结果提示姜黄素与5-Aza-CdR单独及联合使用均有一定的去甲基化作用,二者联合使用时去甲基化作用比单独作用时效果明显增强。（3）与空白对照组相比,RT-PCR和western blot结果提示姜黄素与5-Aza-CdR联合使用时,P16,PTEN的基因、蛋白表达水平均增高（P<0.05）。结论:（1）姜黄素、5-Aza-CdR均能抑制人骨肉瘤Saos-2细胞的增殖及诱导其发生凋亡;（2）姜黄素、5-Aza-CdR均可增强人骨肉瘤Saos-2细胞抑癌基因P16,PTEN的去甲基化水平;（3）姜黄素联合5-Aza-CdR作用于人骨肉瘤Saos-2细胞可增强人骨肉瘤抑癌基因P16,PTEN的去甲基化水平,较单独作用时的效果明显。
唐坚[10]（2019）在《大黄素增强5AzA-cdR对胰腺癌细胞抑癌基因P16、RASSF1A、ppENK的去甲基化作用研究》文中研究指明目的:本研究主要为了验证大黄素是否可以对胰腺癌细胞抑癌基因P16、RASSF1A、ppENK发挥一定程度的去甲基化作用,并与5AzA-cdR联合用药是否能够增加5AzA-cdR对胰腺癌细胞Panc1抑癌基因的去甲基化作用。方法:采用CCK8检测不同浓度大黄素对胰腺癌细胞Panc1的生长抑制情况,甲基化特异性 PCR（methylation-specific PCR,MSP）和重亚硫酸盐测序 PCR（bisulfite genomic sequencing PCR,BSP）联合TA克隆测序分别检测大黄素、5AzA-cdR、以及大黄素联合5AzA-cdR对胰腺癌细胞Panc1抑癌基因P16、RASSF1A、ppENK去甲基化状态的影响。Dot-blot实验验证大黄素、5AzA-cdR、以及大黄素联合5AzA-cdR对胰腺癌细胞Panc1细胞基因组5mc的表达的影响,并用FQ-PCR和Western Blot分别检测各组P16、RASSF1A、ppENK三个抑癌基因以及甲基转移酶DNMT1、DNMT3a、DNMT3b在mRNA和蛋白的表达情况。结果:CCK-8证实大黄素可以以浓度和时间梯度的方式来抑制胰腺癌细胞Panc1的生长,Dot-blot结果证实大黄素联合5AzA-cdR用药可以明显抑制Panc1细胞基因组5mc的表达。MSP和BSP结果证实大黄素具有微弱的去甲基化作用,5AzA-cdR具有一定程度的去甲基化作用,但是当大黄素联合5AzA-cdR作用时,其对胰腺癌细胞Panc1抑癌基因P16、RASSF1A、ppENK去甲基化作用更加显着。同时FQ-PCR和WB结果证实大黄素联合5AzA-cdR作用时,P16、RASSF1A、ppENK的表达较两药分别单独作用时表达明显增加,相反地,甲基转移酶DNMT1,DNMT3a较对照组明显减少。结论:研究阐明了大黄素联合5AzA-cdR用药通过减少甲基转移酶DNMT1和DNMT3a的表达来增强5AzA-cdR对胰腺癌细胞抑癌基因P16、RASSF1A、ppENK的去甲基化作用。
二、抑癌基因p16的研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、抑癌基因p16的研究进展（论文提纲范文）
（1）老年宫颈癌HPV感染亚型及抑癌基因p53、p16、pRb表达（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 HPV感染亚型检测及分组 |
| 1.2.2 抑癌基因p53、p16、pRb检测 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结 果 |
| 2.1 老年CC患者HPV感染亚型情况 |
| 2.2 不同HPV感染亚型老年CC患者相关基线资料比较 |
| 2.3 抑癌基因p53、p16、pRb对老年CC患者HPV感染亚型的影响分析 |
| 3 讨 论 |
（2）香烟烟雾诱导慢性阻塞性肺病的发生和向肺癌转化的作用及白头翁皂苷B4的干预机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 文献综述 慢性阻塞性肺病的发病机制及其向肺癌转化的研究进展 |
| 第一部分 白头翁皂苷B4对慢性阻塞性肺病小鼠的药效及作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药物 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 慢性阻塞性肺病小鼠模型的建立及分组给药 |
| 2.2 形态学观察 |
| 2.3 肺功能测定 |
| 2.4 COPD小鼠支气管肺泡灌洗液BALF中炎性因子的测定 |
| 2.5 HE染色观察小鼠肺组织病理形态学变化及支气管上皮化生的影响 |
| 2.6 RT-PCR测定COPD小鼠肺组织中相关炎性因子mRNA的表达 |
| 2.7 肺组织中氧化应激指标MPO、MDA、GSH-PX酶活性检测 |
| 2.8 免疫组织化学法测定肺组织中相关癌变蛋白表达 |
| 2.9 Western Blot检测小鼠肺组织中癌变相关蛋白Dnmt1、CDKN2A/P16、FHIT蛋白的表达 |
| 2.10 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 白头翁皂苷B4对COPD小鼠形态学及体重的影响 |
| 3.2 白头翁皂苷B4对COPD小鼠肺功能的影响 |
| 3.3 白头翁皂苷B4对COPD小鼠支气管肺泡灌洗液BALF中炎性因子表达水平的影响 |
| 3.4 白头翁皂苷B4对COPD小鼠肺组织病理形态学的影响 |
| 3.5 白头翁皂苷B4对COPD小鼠肺支气管上皮增生的影响 |
| 3.6 白头翁皂苷B4对COPD小鼠肺组织中相关基因表达水平的影响 |
| 3.7 白头翁皂苷B4对COPD小鼠肺组织中氧化应激指标MPO、MDA、GSH-PX酶活力的影响 |
| 3.8 白头翁皂苷B4对COPD小鼠肺组织中癌变相关蛋白P53、Ki67、hnRNPA2/B1 表达水平的影响 |
| 3.9 白头翁皂苷B4对COPD小鼠肺组织中甲基化相关蛋白Dnmt1、P16、FHIT表达水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二部分 白头翁皂苷B4对香烟烟雾提取物CSE诱导的人支气管上皮细胞16HBE的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 药物及配制 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 人支气管上皮细胞16HBE的培养 |
| 2.2 香烟烟雾提取物CSE的制备 |
| 2.3 CSE对16HBE细胞活力的影响 |
| 2.4 白头翁皂苷B4对16HBE细胞活力的影响 |
| 2.5 地塞米松(DEX)对16HBE细胞活力的影响 |
| 2.6 白头翁皂苷B4对CSE诱导的16HBE细胞活力的影响 |
| 2.7 RT-PCR检测16HBE细胞炎性因子表达水平 |
| 2.8 荧光探针DCFH-DA法检测CSE诱导的16HBE细胞内活性氧(ROS)水平 |
| 2.9 Western Blot法测定CSE诱导的16HBE细胞中相关蛋白表达 |
| 2.10 统计学分析 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 香烟烟雾提取物CSE对16HBE细胞活力的影响 |
| 3.2 白头翁皂苷B4对16HBE细胞活力的影响 |
| 3.3 地塞米松(DEX)对16HBE细胞活力的影响 |
| 3.4 白头翁皂苷B4对CSE诱导的16HBE细胞活力的影响 |
| 3.5 不同时间点香烟烟雾提取物CSE对16HBE细胞炎性因子mRNA表达水平的影响 |
| 3.6 白头翁皂苷B4对CSE诱导的16HBE细胞活性氧ROS表达水平的影响 |
| 3.7 白头翁皂苷B4对CSE诱导的16HBE细胞炎性因子mRNA表达水平的影响 |
| 3.8 白头翁皂苷B4对CSE诱导的16HBE细胞Snail1、Slug mRNA表达水平的影响 |
| 3.9 白头翁皂苷B4对CSE诱导的16HBE细胞MAPK信号通路相关蛋白表达水平的影响 |
| 3.10 白头翁皂苷B4对CSE诱导的16HBE细胞上皮化生相关蛋白表达水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简介 |
（3）双氢青蒿素对UHRF1沉默或过表达的前列腺癌PC-3细胞影响及机制研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一部分 构建UHRF1沉默或过表达的PC-3 细胞 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 第二部分 双氢青蒿素对UHRF1沉默或过表达的前列腺癌PC-3 细胞影响及机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 抗前列腺癌甲基化相关靶点的选择 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（4）食管癌和癌前病变组织中CDKN2A/P16基因DNA甲基化和拷贝数缺失状态及其应用的探索研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 研究目标 |
| 总目标 |
| 阶段目标 |
| 1. 研究背景 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 研究方案设计 |
| 2.2 研究样本量 |
| 2.3 研究对象及信息采集 |
| 2.4 标本收集 |
| 2.5 内镜检查及碘染色 |
| 2.6 标本处理 |
| 2.7 实验试剂、仪器、耗材 |
| 2.8 DNA提取及甲基化修饰 |
| 2.9 P16基因DNA甲基化、拷贝数缺失的检测 |
| 2.10 数据采集及实验结果的质量控制 |
| 2.11 统计学分析 |
| 3. 研究结果 |
| 3.1 第一阶段 |
| 3.1.1 常规取样研究对象的一般情况 |
| 3.1.2 常规取样研究对象肿瘤部位及分期情况 |
| 3.1.3 常规取样研究对象的P16基因DNA甲基化、拷贝数缺失的分布 |
| 3.1.4 常规取样的P16基因DNA甲基化、拷贝数缺失一致性 |
| 3.1.5 常规取样的P16基因DNA甲基化、拷贝数缺失诊断早期食管癌的准确性 |
| 3.1.6 常规取样的癌、癌旁组织P16基因DNA甲基化结果对比 |
| 3.1.7 系统取样研究对象的一般情况 |
| 3.1.8 系统取样组织的病理诊断结果 |
| 3.1.9 不同取样深度、位置肿瘤组织的P16基因DNA甲基化情况 |
| 3.1.10 癌旁活检组织的病理诊断和P16基因DNA甲基化 |
| 3.2 第二阶段 |
| 3.2.1 一般情况 |
| 3.2.2 病变在食管位置的分布 |
| 3.2.3 食物摄入及饮食习惯相关危险因素 |
| 3.2.4 食管病变危险因素的多因素Logistic回归分析 |
| 3.2.5 内镜活检组织的P16基因DNA甲基化、拷贝数缺失阳性率及其分布 |
| 3.2.6 内镜活检组织P16基因DNA甲基化、拷贝数缺失检测结果一致性 |
| 3.2.7 内镜活检组织P16基因DNA甲基化、拷贝数缺失对病变的诊断准确性 |
| 3.2.8 食管脱落细胞P16基因DNA甲基化的分布及与内镜活检组织的比较 |
| 3.2.9 食管脱落细胞P16基因DNA甲基化对食管病变的诊断准确性 |
| 3.2.10 基于脱落细胞P16基因DNA甲基化的多因素Logistic回归分析 |
| 3.3 第三阶段 |
| 3.3.1 食管海绵球检查人群一般信息 |
| 3.3.2 食管海绵球检查的人群耐受性 |
| 3.3.3 食管海绵球检查对粘膜的影响 |
| 3.3.4 DNA质量及β-ACT基因测定 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 常规取样组织的P16基因DNA甲基化、拷贝数缺失阳性率分析 |
| 4.2 常规取样P16基因DNA甲基化和拷贝数缺失的准确性和一致性 |
| 4.3 常规取样的癌、癌旁组织的P16基因DNA甲基化情况分析 |
| 4.4 食管肿瘤异质性对P16基因DNA甲基化的影响 |
| 4.5 食管病变的危险因素分析 |
| 4.6 活检组织P16基因DNA甲基化、拷贝数缺失分布及其影响因素分析 |
| 4.7 活检组织P16基因DNA甲基化、拷贝数缺失诊断食管病变的准确性 |
| 4.8 食管脱落细胞P16基因DNA甲基化检测发现食管病变的能力 |
| 4.9 食管海绵球检查的食管癌初筛可行性分析 |
| 5. 总结 |
| 创新性与局限性 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 资金资助 |
| 发表与学位论文相关的英文论文 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（5）铁皮石斛对肺腺癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用和对自噬相关因子、肿瘤相关因子表达影响的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 :肺腺癌细胞株在种植裸鼠移植瘤前的鉴定 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 :铁皮石斛对肺腺癌裸鼠移植瘤大小及对自噬相关基因、抑癌基因表达影响的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略词表或索引 |
| 综述 铁皮石斛抑制上皮源性恶性肿瘤的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介及攻读学位期间获得的科研成果 |
（6）p16/Ki-67双染检测在宫颈癌筛查分流中的应用价值（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 1 前言 |
| 2 资料与方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 宫颈病变筛查技术的现状及进展研究 |
| 参考文献 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 |
| 致谢 |
（7）PAX1、p16及miR-124-2基因连续甲基化与宫颈病变的一致性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 第二章 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 数据解析与分析 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 测序文库质量检测 |
| 3.2 NGS测序结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 致谢 |
（8）DNA甲基化与食管癌发生发展相关性及临床应用前景（论文提纲范文）
| 1 DNA甲基化与肿瘤 |
| 2 DNA甲基化与食管癌 |
| 2.1 总体基因低甲基化 |
| 2.2 抑癌基因高甲基化 |
| 2.2.1 p16 |
| 2.2.2 APC |
| 2.2.3 MGMT |
| 3 抑癌基因高甲基化在食管癌防治中的应用 |
| 3.1 食管癌早期诊断和筛查 |
| 3.2 DNA甲基化与食管癌的治疗 |
| 3.3 DNA甲基化与食管癌的预后判断 |
| 结语与展望 |
（9）姜黄素联合5-Aza-CdR对骨肉瘤抑癌基因P16，PTEN的去甲基化作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞株来源 |
| 2.1.2 主要试剂及耗材 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 主要试剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 器材的准备 |
| 2.2.2 人骨肉瘤Saos-2 细胞的复苏、培养和传代 |
| 2.2.3 用倒置相差显微镜观察细胞形态 |
| 2.2.4 CCK-8 法测定Saos-2 细胞增殖 |
| 2.2.5 细胞的DNA提取 |
| 2.2.6 亚硫酸氢盐修饰基因组DNA |
| 2.2.7 Western-blot检测相关蛋白表达水平 |
| 2.2.8 RT-PCR检测相关基因表达水平 |
| 2.3 统计学处理 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 细胞形态观察 |
| 3.2 细胞增值测定 |
| 3.3 药物作用于人骨肉瘤Saos-2 细胞前后的p16和PTEN基因甲基化的变化 |
| 3.4 RT-PCR检测各组PTEN、P16 mRNA表达水平的结果 |
| 3.4.1 总RNA完整性检测 |
| 3.4.2 RT-PCR结果及灰度分析结果显示 |
| 3.5 Western blot检测各组PTEN、P16蛋白的表达水平 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论与不足之处 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 不足之处 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| References |
（10）大黄素增强5AzA-cdR对胰腺癌细胞抑癌基因P16、RASSF1A、ppENK的去甲基化作用研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略词表 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 大黄素对胰腺癌细胞的生长抑制作用 |
| 3.2 大黄素联合5AzA-cdR作用可明显降低基因组5mc的水平 |
| 3.3 MSP:大黄素以及联合5AzA-cdR对P16、RASSF1A、ppENK三个抑癌基因甲基化的影响 |
| 3.4 BSP:大黄素以及联合5AzA-cdR对P16、RASSF1A、ppENK三个抑癌基因甲基化的影响 |
| 3.5 大黄素以及联合5AzA-cdR对P16、RASSF1A、ppENK以及DNA甲基转移酶(DNMTs)的转录水平的影响 |
| 3.6 大黄素以及联合5AzA-cdR对P16、RASSF1A、ppENK以及DNA甲基转移酶(DNMTs)的蛋白水平的影响 |
| 4 分析与讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 |
四、抑癌基因p16的研究进展（论文参考文献）
- [1]老年宫颈癌HPV感染亚型及抑癌基因p53、p16、pRb表达[J]. 来正伟,王华斌,陈建亮,温达静. 中国老年学杂志, 2021(15)
- [2]香烟烟雾诱导慢性阻塞性肺病的发生和向肺癌转化的作用及白头翁皂苷B4的干预机制研究[D]. 马惠苗. 江西中医药大学, 2021
- [3]双氢青蒿素对UHRF1沉默或过表达的前列腺癌PC-3细胞影响及机制研究[D]. 夏僮. 重庆医科大学, 2021(01)
- [4]食管癌和癌前病变组织中CDKN2A/P16基因DNA甲基化和拷贝数缺失状态及其应用的探索研究[D]. 秦宇. 北京协和医学院, 2020
- [5]铁皮石斛对肺腺癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用和对自噬相关因子、肿瘤相关因子表达影响的研究[D]. 庞晨. 广西中医药大学, 2020(02)
- [6]p16/Ki-67双染检测在宫颈癌筛查分流中的应用价值[D]. 王璐杨. 郑州大学, 2020(02)
- [7]PAX1、p16及miR-124-2基因连续甲基化与宫颈病变的一致性研究[D]. 黄裕平. 暨南大学, 2020(07)
- [8]DNA甲基化与食管癌发生发展相关性及临床应用前景[J]. 秦宇,魏文强. 中华肿瘤防治杂志, 2020(03)
- [9]姜黄素联合5-Aza-CdR对骨肉瘤抑癌基因P16，PTEN的去甲基化作用研究[D]. 朱振国. 南昌大学, 2019(01)
- [10]大黄素增强5AzA-cdR对胰腺癌细胞抑癌基因P16、RASSF1A、ppENK的去甲基化作用研究[D]. 唐坚. 浙江大学, 2019(03)