恒温实时荧光法快速检测不同样品中的单增李斯特菌

恒温实时荧光法快速检测不同样品中的单增李斯特菌

论文摘要

为实现乳制品中、临床病人腹泻物中单增李斯特菌的快速检测,选用外引物F3和B3、内引物FIP和BIP作为环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的特异性引物,采用便携式荧光恒温扩增仪作为检测平台,选取单增李斯特菌标准菌株进行基因组DNA灵敏度和最低检测限测定;选用人工污染的15份乳制品样品和20份腹泻样品进行适用性实验;以上样品同时利用国标法GB4789.30-2010进行菌落计数。结果表明:恒温实时荧光法对纯培养的单增李斯特菌基因组DNA、乳制品和腹泻样品中的单增李斯特菌基因组DNA灵敏度均达到102CFU/mL、检测限均达到103CFU/mL;阴性样本出现假阳性的概率分别为0、0.03%和0;单增李斯特菌污染浓度在检出限以上的阳性样本检出率分别为100%、99%和92%。研究表明恒温实时荧光法的检测结果与传统国标培养结果基本一致,恒温实时荧光法适用于乳制品中和临床腹泻样本中单增李斯特菌的快速检测。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料与主要试剂
  •   1.2 仪器与设备
  •   1.3 菌株鉴定
  •   1.4 反应体系的建立
  •     1.4.1 引物设计
  •     1.4.2 DNA模板制备
  •     1.4.3 LAMP反应体系的的配置
  •   1.5 灵敏度及最低检测限实验
  •   1.6 样品检测
  •     1.6.1 乳制品样本检测
  •     1.6.2 腹泻物样本检测
  •   1.7 扩增反应
  • 2 结果与分析
  •   2.1 菌株鉴定结果
  •   2.2 灵敏度及最低检测限
  •   2.3 乳制品检测结果
  •   2.4 腹泻样品检测结果
  • 3 结语
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张文敏,石育娇,戚成,田明胜,朱智,殷荣永,钟少水,王大鹏,何更生,冯元琦,董庆利

    关键词: 恒温实时荧光法,快速检测,单增李斯特菌

    来源: 食品与生物技术学报 2019年05期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑

    专业: 轻工业手工业

    单位: 上海理工大学医疗器械与食品学院,上海食品药品监督管理局,上海交通大学农业与生物学院,复旦大学公共卫生学院

    基金: 国家重点研发计划(2018YFC1602902),国家“十二五”科技支撑计划项目(2015BAK36B04),国家自然科学基金项目(31271896)

    分类号: TS207.4

    页码: 44-50

    总页数: 7

    文件大小: 850K

    下载量: 141

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