反转录-环介导等温扩增技术快速检测志贺氏菌

反转录-环介导等温扩增技术快速检测志贺氏菌

论文摘要

建立了反转录-环介导等温扩增技术的志贺氏菌快速检测方法。针对志贺氏菌特异保守基因ipa H设计多套引物,建立优化了的反应体系,并评价其准确性、特异性、灵敏度。以人工污染脱脂乳样品比较RT-LAMP与RT-PCR的灵敏度。结果表明,在65℃等温条件下,RT-LAMP反应可在30 min内完成。在活菌/损伤菌模型中,该方法表现出比国标法更好的准确性。在23株细菌标准菌株中仅对4株志贺氏菌有特异性检出。志贺氏菌RNA模板的检测灵敏度为7 fg/μL。人工污染脱脂乳样品检测灵敏度达到40 CFU/g,比RT-PCR方法高出2个数量级。表明所建立的志贺氏菌RT-LAMP扩增方法可以准确的检测志贺氏菌,同时具有快速、特异、灵敏的优势,可用于志贺氏菌的快速筛查和现场监控。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料与试剂
  •   1.2 仪器与设备
  •   1.3 方法
  •     1.3.1 引物设计及筛选
  •     1.3.2 志贺氏菌RNA提取
  •     1.3.3 反应体系及条件
  •     1.3.4 RT-LAMP反应的准确性
  •     1.3.5 RT-LAMP反应的特异性和灵敏度
  •     1.3.6 RT-LAMP和RT-PCR在人工污染脱脂乳中的灵敏度对比
  • 2 结果与分析
  •   2.1 引物筛选
  •   2.2 熔解曲线分析引物扩增特异性
  •   2.3 RNA提取质量评价
  •   2.4 RT-LAMP扩增的准确性
  •   2.5 RT-LAMP的特异性和灵敏度测定
  •   2.6 RT-LAMP和RT-PCR在人工污染脱脂乳中的检测灵敏度对比
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 丁梦璇,刘秀,刘伯扬,梁玉林,周振森,尹建军,宋全厚

    关键词: 反转录环介导等温扩增,志贺氏菌,基因,快速检测

    来源: 食品与发酵工业 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑

    专业: 轻工业手工业

    单位: 中国食品发酵工业研究院有限公司,内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司质量安全管理系统中心实验室

    分类号: TS207.4

    DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.018815

    页码: 193-199

    总页数: 7

    文件大小: 2045K

    下载量: 311

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