王锂韫[1]2003年在《酸马奶酒中乳酸菌抑菌活性物质的粗提及生化特性研究》文中指出本项研究对象为分离自内蒙古锡林郭勒盟地区牧民家庭采集的10份酸马奶酒样中的47株乳酸菌，其中乳杆菌属26株，乳酸球菌21株，主要进行了抑菌特性的研究。结果表明，47株乳酸菌的发酵上清液和菌悬液均不能抑制Staphylococcus aureus和Escherichia coli；26株乳杆菌中，有10株乳杆菌仅有菌悬液有抑制指示菌活性，其中6株乳杆菌菌悬液有抑制Listeria monocytogenes和Bacillus subtills的活性，4株乳杆菌菌悬液仅有抑制Listeria monocytogenes的作用。21株乳酸球菌中，9株菌对指示菌有抑菌活性，其中2株菌仅有菌悬液对指示菌有抑制作用，而7株菌不仅菌悬液，发酵上清液也具有抑制指示菌活性，而且Enterococcus faecalis占多数为6株。从其中筛选出两株抑菌活性最强的菌株3-3-2和4-3-2，进行影响抑菌活性物产生等因素以及细菌素粗提，粗提物理化特性及抑菌谱的研究。研究结果发现，菌株3-3-2和4-3-2均在指数生长期开始后，抑菌活性迅速增加，且耐受pH范围较宽。粗提后的抑菌活性物是一类抑菌谱较窄，但具有广谱抑菌活性的分子量大于50KDa的蛋白类物质，对热敏感，耐受pH范围宽，耐受一些表面活性剂，菌株3-3-2发酵液的粗提物还耐受一些蛋白酶和α-淀粉酶。
贺银凤[2]2008年在《酸马奶酒中微生物的分离鉴定及抗菌因子的研究》文中认为本研究对内蒙古锡盟地区酸马奶酒中的微生物进行分离鉴定,对部分菌株进行了DNA序列同源性分析,同时对酸马奶酒中来自于乳酸菌、酵母菌及其它成分的抗菌因子进行了研究,为探讨酸马奶酒的医疗价值及其作用机理提供依据。从15份酸马奶酒中共分离到47株乳酸菌、19株酵母菌,采用传统的形态学和生理生化方法鉴定,结果表明乳酸菌中26株为杆菌,属于Lactobacillus的九个种,一株未归种;21株为球菌,属于Enterococcus、Lactococcus、Leuconostoc叁个属中的六个种。19株酵母菌中有18株分别归属为Endomyce,Lodderomyces,Pichia,Torulaspora,Kloeckera,Saccharomycodes,Saccharomyces,Brettanomyces,Pachytichospora九个属,有1株未能归属。选取两株乳酸球菌进行了分子生物学鉴定,根据16S rDNA序列同源性分析,菌株BY-3-2鉴定为E.faecium ,菌株SQ-3-2鉴定为E.durans。选取一株酵母菌HJ-5进行分子生物学鉴定,通过26S rDNA D1/D2序列分析,被鉴定为Saccharomyces cerevisiae。分子生物学鉴定与形态和生理生化鉴定结果相一致。对已分离鉴定的47株乳酸菌进行了产抑菌物质菌株的筛选,筛选出两株抑菌活性较强的BY-3-2和SQ-3-2球菌进行了生物学特性、抑菌动力学及其抑菌稳定性研究,并对抗菌因子进行分离提纯及其特性研究。结果表明,菌株BY-3-2最适生长温度为37℃,最低pH值为4.41,在发酵8h后产生抑菌物质,12 h达到高峰;其发酵液经50%硫酸铵溶液可沉淀抑菌活性物质,经CM-52离子交换层析和凝胶G-100层析分离,得到有活性的物质。电泳后呈现叁条电泳带,为混合蛋白质,分子量在33,800Da～42,800Da之间。该物质在pH值4.0和6.0时抑菌活性高,有一定的耐热性,对淀粉酶、蛋白酶比较敏感。菌株SQ-3-2最适生长温度为30℃,最低pH值为3.78,抑菌活性物质出现的高峰在发酵的第13 h。其发酵液经70%硫酸铵溶液沉淀,采用同样的方法两次过柱纯化仍然得到有活性的物质是一混合蛋白,电泳后呈两条电泳带,分子量为22,700Da和23,200Da。该物质在低pH范围内抑菌活性高,耐热性差,60℃以上加热失活,对淀粉酶、蛋白酶相对不敏感。通过高温、化学物质、温度结合化学物质损伤处理后,两株乳酸菌的抑菌活性都没有发生明显变化(P>0.05),说明两株菌的抑菌特性稳定。控制发酵液的pH值为6.5,可以提高两株菌抑菌物质的产率和活性。通过培养基的优化也可以提高抑菌物质的产率。同样对已分离鉴定的19株酵母菌进行了产抑菌物质菌株的筛选,选出一株抑菌活性较强的HJ-5菌株进行了抗菌特性研究和抗菌因子的分离提纯及初步鉴别。HJ-5菌株最适生长温度为26～28℃,发酵6 h以后开始产抑菌物质,42 h后达到高峰。其发酵上清液超滤后,分子量范围在Mr<30kDa的超滤液抑菌活性最强;在pH2和8条件下用多种有机溶剂进行提取,乙醚提取效果最好,粗提液的抑菌活性提高1.38倍。经捷克八溶剂法鉴别和离子特性鉴别,HJ-5抑菌物质不属于已知的六大类抗生素,是一种中性物质。该抑菌物质在pH 7以下活性较强,随着pH值升高活性明显降低;pH值越低,耐热性越强,在pH为2,121℃的高温条件下,20 min仍具有一定的抑菌活性。通过对酸马奶酒中的抗结核菌因子研究表明,酸马奶酒中的粗脂肪,特别是脂肪的中性萃取物有较强的抑制结核菌作用;此外酸马奶酒中酵母菌对结核菌也有抑制作用。
李丽杰[3]2004年在《酸马奶酒中酵母菌抑菌物质的粗提及生化特性研究》文中研究说明本文研究了分离自牧民家庭的15个酸马奶酒样品中的19株酵母菌，归为8个属，主要进行了抑菌特性的研究。结果表明，产抑菌活性物质的酵母菌5株，表现抑菌活性部分均为发酵液，菌泥部分未表现抑菌活性。这5株菌对大肠埃希氏菌都有抑菌作用，其中有3株菌还同时对金黄色葡萄球菌有抑菌作用，但抑制作用不如对大肠埃希氏菌强烈。其中2株为酒香酵母属，1株为厚壁孢酵母属。从中选择了抑菌活性较稳定、抑菌范围较广而且抑菌活性较大的5号酒香酵母菌，对其抑菌活性物质产生条件、抑菌物质粗提、以及粗提物理化特性进行了研究。结果表明选用葡萄糖—酵母膏—蛋白胨培养基、培养温度26～28℃、pH值范围为5.0～6.0, 可使抑菌物质的抑菌活性最高。该抑菌物质生成的最高值是该菌株生长的稳定期的后期，即54h后。用乙醚作萃取剂，并且在pH值2和8下萃取效果最好，抑菌活性最大。此抑菌物质不属于标准六大类抗生素，是中性物质，并且是一种混合物，含有四种成分，推测其中叁种是蛋白质，其分子量分别在16,300、22,100和25,900左右。另一种是小分子物质，小分子物质的抑菌活性与叁种蛋白质相比略强，而叁个蛋白质的抑菌活性差别不大。不同温度、pH值均对抑菌物质的活性有很显着的影响。同一温度下pH值越高，抑菌活性越低，而同一pH值下，温度越高，抑菌活性越低。这种物质在酸性条件下具有很强的热稳定性，对胃蛋白酶和胰蛋白酶不敏感，耐受性强。
塔娜[4]2013年在《对产细菌素的粪肠球菌群体感应现象的研究》文中认为粪肠球菌（Enterococcus Faecalis）4-3-2是从酸马奶酒中分离出来的一株乳酸菌。经研究发现，此菌离心后的上清液对指示菌枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）有抑菌作用，但是在后续试验中却发现时常有抑菌活性消失的现象，初步认为这是受群体感应现象的影响。因此设计了本试验，进一步论证二者之间的关系。本试验是研究粪肠球菌4-3-2在不同菌体密度下细菌素H抑菌活性的变化规律。试验说明在不同的培养条件下菌体密度确实对细菌素H的抑菌活性有影响，并得到低密度（即阈值）培养条件；且采用在低密度和正常密度两种培养条件下，各自加入低浓度和高浓度的信号分子溶液后再发酵的这种方法，证实发酵液中确实有信号分子，且其为影响细菌素H抑菌活性的关键因素；通过加入不同浓度(菌体密度为105，106，107，108CFU/mL）的被酶处理和未被酶处理的信号分子溶液后再发酵试验确定：细菌素H就是信号分子，其本身浓度是影响细菌素活性的关键因素。且试验表明细菌素H抑菌活性只在一定的菌体密度范围内(108CFU/mL)与菌体密度成正比，如果菌体密度大于这个范围(>108CFU/mL)，其抑菌活性将不随菌体密度的增大而增大，甚至还会受到抑制。综上，试验说明粪肠球菌4-3-2的群体感应系统调控着细菌素H的生成，且细菌素H的自诱导作用在调控机理中占主导地位。以上结果表明，粪肠球菌4-3-2生成的细菌素H受到了群体感应机理的调控，并且与菌株的菌体密度有关。这些将会为研究粪肠球菌的抑菌活性提供依据，提高细菌素的产量和稳定性，并且对进一步研究粪肠球菌的耐药性和致病性提供帮助。
参考文献：
[1]. 酸马奶酒中乳酸菌抑菌活性物质的粗提及生化特性研究[D]. 王锂韫. 内蒙古农业大学. 2003
[2]. 酸马奶酒中微生物的分离鉴定及抗菌因子的研究[D]. 贺银凤. 内蒙古农业大学. 2008
[3]. 酸马奶酒中酵母菌抑菌物质的粗提及生化特性研究[D]. 李丽杰. 内蒙古农业大学. 2004
[4]. 对产细菌素的粪肠球菌群体感应现象的研究[D]. 塔娜. 内蒙古农业大学. 2013