牛乳中沙门氏菌的荧光定量PCR检测方法的建立

牛乳中沙门氏菌的荧光定量PCR检测方法的建立

论文摘要

为建立一种牛乳中沙门氏菌的荧光定量PCR快速检测方法,根据沙门氏菌invA基因序列和荧光定量PCR要求设计了合适的特异性引物,然后提取菌体DNA,对目的基因进行克隆,以重组质粒为模板进行荧光定量PCR扩增,绘制标准曲线,以沙门氏菌DNA为模板进行荧光定量PCR扩增,确定其扩增条件。结果表明,建立的方法特异性强,与志贺氏菌等致病菌无交叉反应,且方法的灵敏度高(为0.1 ng/L)。以掺入沙门氏菌的牛乳为样品,可检测到牛乳中44.2 mL-1的沙门氏菌。该方法适用于快速、准确检测牛乳中的沙门氏菌,为实验室快速检测致病菌提供参考。

论文目录

  • 0 引言
  • 1 实验
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 菌株
  •     1.1.2 试剂
  •     1.1.3 主要仪器
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 菌株培养和DNA模板的制备
  •     1.2.2 引物的合成
  •     1.2.3 目的基因的扩增和克隆
  •     1.2.4 重组质粒标准曲线的绘制
  •     1.2.5 特异性检测
  •     1.2.6 灵敏性检测
  •     1.2.7 模拟标本的检测
  • 2 结果与分析
  •   2.1 沙门氏菌invA基因片段的PCR扩增结果与序列分析
  •   2.2 荧光定量PCR扩增结果
  •   2.3 荧光定量PCR的特异性检测
  •   2.4 荧光定量PCR的灵敏性检测
  •   2.5 掺菌乳样的检测
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 姚笛,徐磊,佐兆杭,侯婷婷,郭瑜

    关键词: 荧光定量,沙门氏菌,基因

    来源: 中国乳品工业 2019年07期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑

    专业: 化学,轻工业手工业

    单位: 黑龙江八一农垦大学食品学院

    基金: 大庆市指导性科技计划项目(zd-2016-147),黑龙江省自然科学基金项目(LH2019C049),农垦总局攻关项目(HNK12KF-13)

    分类号: TS252.7;O657.3

    页码: 42-45

    总页数: 4

    文件大小: 1342K

    下载量: 292

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