导读:本文包含了辅助病毒论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:病毒,载体,腺病毒,蛋白,血凝素,链式反应,逆转录。
辅助病毒论文文献综述
刘珊珊,于成明,曹欣然,耿国伟,李向东[1]（2018）在《两种类型黄瓜花叶病毒卫星RNA的序列、结构以及对辅助病毒的致病性调控分析》一文中研究指出黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)卫星RNA(satellite RNA,satRNA)通常影响CMV的致病性。本研究设计了检测satCMV的简并引物,通过RT-PCR从山东省泰安市3种自然发病寄主中检测到satCMV,发现了两类长度有明显差异的satCMV:白菜与萝卜中克隆的satCMV为339个核苷酸,二者的核苷酸一致率为99.41%;烟草中克隆的satCMV为383个核苷酸,与白菜和萝卜中satCMV的核苷酸序列一致率均为71.06%。系统进化分析表明这两类长度有明显差异的satCMV亲缘关系较远。两种类型的satCMV与CMV-Fny混合接种对CMV致病症状的调控存在明显差异。利用m Fold软件分析了两类不同长度的CMV卫星RNA基因组及其互补链的RNA结构特征,表明两类sat CMV与CMV互作的活跃度以及核心结构域存在差异。两类satCMV全基因组的克隆以及结构分析为研究不同类型satCMV与CMV的互作及其对CMV致病性的影响奠定了基础。(本文来源于《植物病理学报》期刊2018年03期）
卓珠琳,温壮飞[2]（2017）在《安宫牛黄丸辅助病毒唑对小儿急性重症病毒性肺炎血清降钙素原及免疫功能的影响》一文中研究指出目的:探讨安宫牛黄丸辅助病毒唑对小儿急性重症病毒性肺炎血清降钙素原及免疫功能的影响。方法:选取2015年2月—2016年8月海南省海口市妇幼保健院收治的符合纳入标准的急性重症病毒性肺炎患儿88例,按随机数字表法分组,分别44例,对照组予以病毒唑常规治疗治疗,研究组予以安宫牛黄丸辅助病毒唑治疗,共治疗7 d,采血测定免疫功能、炎症因子及基质金属蛋白酶等指标,同时对比临床疗效及安全性。结果:与治疗前数据对比,两组治疗后Ig M、Ig G、Ig A含量升高,治疗后CD3、CD4、CD8、CD4/CD8含量升高,治疗后血清hs-CRP、PCT、TNF-α含量降低,IL-2含量升高,治疗后血清MMP9、TIMP1含量降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与对照组数据对比,研究组治疗后Ig M、Ig G、Ig A含量较高,治疗后CD3、CD4、CD8、CD4/CD8含量较高,治疗后血清hs-CRP、PCT、TNF-α含量较低,IL-2含量较高,治疗后血清MMP9、TIMP1含量较低,差异具有统计学意义(P<0.05);对照组有效率72.73%低于研究组有效率90.91%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:安宫牛黄丸辅助病毒唑对小儿急性重症病毒性肺炎疗效确切,能显着降低降钙素原,提高免疫功能,安全性高。(本文来源于《辽宁中医杂志》期刊2017年11期）
张梅,江彦泽,陈念华,付远辉,乔伟[3]（2014）在《可表达新型甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建》一文中研究指出根据甲型H1N1流感病毒美国加利福尼亚毒株基因序列(A/California/07/2009(H1N1)),全基因合成甲型流感病毒血凝素(HA)编码基因,利用辅助病毒依赖型腺病毒载体(HDAd)骨架质粒pSC15B,构建可表达HA基因的HDAd/HA DNA分子载体,以磷酸钙法转染293Cre4细胞,与辅助病毒H14连续共感染,获得HDAd/HA载体,并大量制备和纯化,进行形态观察和体外感染的初步鉴定。透射电镜下观察HDAd/HA载体具有典型腺病毒形态;与辅助病毒H14共感染293细胞,RT-PCR检测HA基因有转录,显示成功构建HDAd/HA重组腺病毒载体,为甲型流感病毒体内免疫效果和免疫保护作用的研究奠定实验基础。(本文来源于《生物医学工程学杂志》期刊2014年01期）
申晚霞[4]（2013）在《植物病毒卫星RNA干扰其辅助病毒致病性的分子机理》一文中研究指出植物RNA病毒常常伴随有小的卫星RNA。卫星RNA是一类小的非编码RNA,基因组大小为200-1500nt,通常不编码蛋白,完全依赖于辅助病毒来完成复制、包被、移动和传播,且和其辅助病毒的基因组不存在序列同源性。部分卫星RNA可以影响辅助病毒在寄主植物上诱发的症状,多数为减轻,少数会加重寄主症状。传统理论认为卫星RNA是通过与辅助病毒竞争复制酶,减少了辅助病毒的复制,从而减轻了寄主症状。然而,传统理论不能解释卫星RNA在减轻辅助病毒诱导症状的同时,部分辅助病毒复制量不受影响的现象。由此推测,卫星RNA可能存在其它途径来减轻辅助病毒诱导的症状。RNA沉默(或称为RNAi)是一种广泛存在于真核生物中,由小RNA介导的、以序列特异性的方式抑制或破坏靶标基因表达,在DNA或转录水平上的调控机制。RNA沉默可以调控基因的表达、修饰DNA和特异染色体区域组蛋白的表观遗传、防御转座子和病毒等核酸的入侵。病毒为了成功侵染寄主,也进化了相应的反防卫机制。大部分是通过编码基因沉默抑制子(viral suppressor of RNA silencing, VSR)蛋白结合病毒的siRNA,阻止RNA沉默复合体(RNA-induced silencing complex, RISC)的形成,抑制病毒基因组的降解。基于RNA沉默具有调控植物正常生长发育和防御病毒的功能、VSR具有干扰RNA沉默反防卫机制、多数卫星RNA在复制过程中伴随着巨量的卫星RNA siRNA产生的叁个依据,本文提出了以下假说来解释卫星RNA减轻病毒对寄主植物所诱导的症状。1)病毒通过其产生的VSR干扰寄主植物的miRNA代谢途径,从而致病；2)卫星RNA通过其产生的巨量siRNA捕获并饱和大部分的VSR,减少VSR干扰寄主植物的miRNA代谢途径,减轻病毒对寄主植物诱导的症状。本文通过对烟草、辅助病毒CMV和Y-卫星RNA(Y-Satellite RNA, Y-Sat)组成的模式系统进行研究,验证了以上假说。模式系统选用CMV亚组Ⅱ的病毒株Q-CMV作为负对照。Y-Sat被选用于本研究,是因为卫星RNA的研究中以对CMV卫星RNA研究最多,而Y-Sat在CMV卫星RNA中具有代表性,可以导致本氏烟和普通烟等的斑驳黄花,方便了对病毒侵染过程的检测。验证实验分为两个方面,1)应用GUS报告基因监测在有无卫星RNA伴随侵染时P19和2b两种VSR的活性；2)应用miRl68表达量易受VSR诱导的特性,监测在有无卫星RNA伴随侵染时VSR对miR168的影响。验证实验获得了以下几个方面的结果：1. hpGUS可以有效的沉默GUS,而TBSV的P19和SD-CMV编码的2b两个VSR构件都可以干扰hpGUS介导的GUS沉默。实验采用农杆菌浸润法将GUS+hpGUS、GUS+hpGUS+P19或2b等构件转入本氏烟中进行瞬时表达,比较有无VSR共浸润时GUS蛋白量的变化。并通过GUS染色和GUS的相对酶活性测定分析了P19和2b的活性。实验成功模拟了植物内源的小RNA代谢途径,检验了P19和2b对hpGUS介导的GUS沉默的影响；实验结果与以前报道的VSR可以干扰hpRNA介导RNA沉默的实验结果相吻合。2. Y-Sat影响了VSR干扰RNA沉默的功能。在野生型本氏烟上进行Q-CMV和Q-CMV+Y-Sat感染实验,然后瞬时表达GUS、hpGUS和P19或2b等构件。在只有Q-CMV感染时,P19和2b都可以干扰hpGUS介导的GUS沉默；在Q-CMV+Y-Sat感染的样品中,P19和2b对GUS的沉默却被削弱了；在只有GUS构件时,存在GUS基因的共抑制现象(另一种RNA沉默形式)；在GUS+P19或GUS+2b共浸润的样品中,共抑制现象明显减少,而在有Y-Sat感染时,即使有P19或2b构件的存在,共抑制水平仍然很高。通过对GUS mRNA的Northern印迹分析,GUS mRNA的量与GUS蛋白的量正相关,证实了沉默发生在RNA水平。上述结果证明了Y-Sat能影响VSR干扰RNA沉默的功能,说明VSR对植物内源小RNA介导的沉默途径的影响能被卫星RNA削弱。3. Y-Sat导致的斑驳黄化对实验体系无明显影响。CMV+Y-Sat共同侵染的本氏烟植株出现了斑驳黄化症状,影响了植物的正常光合作用,也可能对整个实验体系产生干扰。为了排除Y-Sat导致的斑驳黄化对实验体系的影响,实验用CHLI突变体mCHLI转化本氏烟,获得不再出现斑驳黄化植株。应用mCHLI转基因本氏烟F2代,进行了Q-CMV或Q-CMV+Y-Sat的侵染,然后瞬时表达GUS、.hpGUS和P19或2b、GFP等构件。实验结果表明,VSR影响了hpGUS介导的GUS沉默,在有Q-CMV+Y-Sat共侵染的样品中,Y-Sat干扰了VSR的功能。实验结果与在野生型本氏烟中所得结果一致,说明了Y-Sat导致的斑驳黄化对实验体系无明显影响。4.在Y-Sat感染且有GUS+hpGUS+VSR共浸润的样品中,GUS仍被高度沉默的现象不是由于hpGUS产生更多siRNA所致。在用GUS、hpGUS和P19或2b进行共浸润时,Q-CMV+Y-Sat共同感染比Q-CMV单独感染的样品产生了更高水平的GUS沉默。这种现象的出现有可能是由于Y-Sat干扰了VSR的功能,也有可能是由于hpGUS产生了更多的siRNA,从而介导了更多的GUS沉默。为了排除后一种可能性,实验设计了hpGUS siRNA的Northern印迹检测分析。结果显示,在感染Q-CMV+Y-Sat样品中,hpGUS siRNA的量并没有增加,排除了hpGUS产生更多siRNA介导更多的GUS沉默的可能性。5.Y-卫星RNA siRNA捕获了VSR,削弱VSR对hpGUS介导的GUS沉默途径的影响。实验应用P19抗体进行RNA-免疫捕获分析,先对植株感染Q-CMV或Q-CMV+Y-Sat处理,再进行GUS、hpGUS、P19共浸润,后采用P19抗体沉淀P19蛋白复合体,并从沉淀复合体中分离RNA,通过Northern印迹分析与P19结合的hpGUS siRNA、Y-Sat siRNA量。结果显示,在Q-CMV感染的样品中,有部分hpGUS siRNA与P19结合；而在Q-CMV+Y-Sat感染的样品中,与P19结合的hpGUS siRNA较少,大部分的P19和Y-Sat siRNA结合在一起。结果说明P19是通过结合hpGUS siRNA来干扰hpGUS介导的GUS沉默；Y-Sat siRNA通过饱和VSR,增加游离的hpGUS siRNA,介导了较高水平的GUS沉默。实验结果进一步表明卫星RNA是通过产生的大量siRNA捕获VSR,从而削弱VSR对寄主小RNA介导的对内源基因调控的干扰。6. Y-Sat可以削弱CMV编码的2b对miR168的诱导。miRNA在植物生长发育过程中起着至关重要的作用。有报道证实了VSR可以诱导miR168的表达量,miR168负调控AGO1mRNA,影响了植物miRNA代谢途径中关键蛋白AGO1的量。为了证实VSR对植物内源miRNA的影响是病毒致病的主导因素,且卫星RNA可以减少VSR对miRNA代谢的影响,本实验以miR168的表达量为指示,检测了感染CMV亚组Ⅱ(Q-CMV)和CMV亚组Ⅰ(Fny-CMV)及与Y-Sat的本氏烟样品中miR168的表达量。结果显示,Q-CMV和Fny-CMV都可以诱导miRl68的表达量；当有Y-Sat共同感染时,miR168的表达量明显减少,感染植株症状减轻；Fny-CMV可以引起相对于Q-CMV而言更高的miR168累积,感染植株也产生了更严重的症状。结果说明Y-Sat可以削弱CMV编码的2b对miR168的诱导,且miR168的表达量高低与植物发病程度紧密相关。实验用半定量RT-PCR检测CMVRNA4a,发现Y-Sat在削弱2b对miR168诱导的同时,编码2b蛋白CMV RNA4a的量有轻微的减少,导致miR168表达量减少的原因部分可能是由于Y-Sat共同感染时2b量的减少。7. Y-Sat显着的抑制了P1/HcPro对miR168的诱导。本文应用了由烟草蚀纹病毒(Tobacco etch virus, TEV)编码的VSR P1/HcPro转基因普通烟(N. tabacum)体系对miR168的表达量进行了检测分析。实验结果显示,在P1/HcPro转基因普通烟中,miR168被明显的诱导,同时出现茎基部弯曲生长的表现型；在Q-CMV+Y-Sat共同感染转基因普通烟中,miR168的表达水平显着降低,茎基部弯曲生长的表现型基本消失。实验结果说明,植物病毒VSR通过影响植物内源的miRNA代谢途径而致病,而卫星RNA通过干扰VSR,削弱病毒的致病性,减轻病毒诱导的症状。以上7个结论,从小RNA的水平验证了植物病毒卫星RNA弱化辅助病毒致病机理的假说,证明了1)病毒通过其产生的VSR干扰寄主植物的miRNA代谢途径,从而致病；2)卫星RNA通过其产生的巨量siRNA捕获并饱和大部分的VSR,减少VSR干扰寄主植物的miRNA代谢途径,减轻病毒对寄主植物诱导的症状。卫星RNA主要存在于植物病毒,DI RNA主要存在于动物病毒。假说在植物和病毒卫星RNA上面得到了部分验证,作者推断假说还适用于动物和病毒DI RNA。部分动物病毒编码的VSR,也具有结合小RNA的特征,动物病毒的DI RNA,在复制过程可能也会产生大量的siRNA,饱和VSR,干扰VSR的致病性。(本文来源于《西南大学》期刊2013-04-10）
江彦泽[5]（2012）在《可表达新型甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建及初步鉴定》一文中研究指出目的：新型甲型H1N1流感病毒是威胁人类健康的重要新发传染病,虽然已有可用于该病毒预防和治疗的疫苗及药物,但现有的神经氨酸酶抑制剂类抗病毒药物和以传统方法制备的流感病毒裂解疫苗均存在一定的局限性。近期研究表明,以重组腺病毒制备流感疫苗具有明显的优越性。本研究以全基因合成的方法获得甲型H1N1流感病毒血凝素(Hemagglutinin, HA)基因,并以辅助病毒依赖型腺病毒(Helper-dependent adenoviral vector, HDAd)载体系统为基础,构建可表达HA的重组HDAd,为进一步的体内免疫效果和免疫保护作用研究奠定基础。方法：根据GenBank上登录的甲流H1N1流感病毒美国加利福尼亚毒株(A/California/07/2009(H1N1))基因序列,采用全基因合成的方法合成由1701个碱基组成的HA编码基因。经核酸序列分析证实后,将HA基因克隆至HDAd穿梭载体pSC11-CMV,经限制性内切酶分析后,进一步将含有HA基因的表达盒克隆至HDAd骨架质粒pSC15B,构建pSC15B/HA重组质粒,并以多组限制性内切酶进行分析鉴定。Pme I消化pSC15B/HA去除原核复制元件及抗性基因,获得HDAd/HA DNA分子,经磷酸钙共沉淀法转染293Cre4细胞,16h后感染辅助病毒,收获HDAd/HA载体粗提液,随后以HDAd/HA粗提液及辅助病毒连续共感染293Cre4细胞直至HDAd/HA达到复制极限。随后,以HDAd/HA和辅助病毒感染293Cre4细胞大量制备HDAd/HA, CsCl密度梯度及等密度梯度两次超速离心纯化,利用透射电子显微镜观察病毒形态,分子生物学技术体外鉴定HDAd/HA表达情况。结果：成功构建了可表达甲流H1N1流感病毒HA蛋白的HDAd/HA载体,通过与辅助病毒共感染293Cre4细胞及CsCl梯度法超速离心制备了大量纯化的HDAd/HA载体,透射电子显微镜观察到腺病毒,体外感染293细胞,RT-PCR检测到HA基因有转录结论：应用HDAd系统,成功构建了HDAd/HA重组腺病毒,并完成了该病毒的大量制备和纯化,为体内免疫学效力试验奠定了初步基础。(本文来源于《北京交通大学》期刊2012-06-01）
郑娴娴,何金生,付远辉,徐少华,谢灿[6]（2010）在《辅助病毒依赖型腺病毒载体转基因的体外表达效率》一文中研究指出构建可表达增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的辅助病毒依赖型腺病毒载体(Helper-dependent adenoviral vector,HDAd),并完成大量制备、纯化和体外表达鉴定。荧光显微镜证实HDAd/EGFP可表达,电镜下观察到经CsCl纯化后的腺病毒的典型形态。分光光度计法测定病毒的浓度为4.0×1012颗粒数(Virus particle,vp)/mL。与可表达EGFP的第一代腺病毒载体(First generation adenoviral vector,FGAd)FGAd/EGFP进行了体外感染和转基因表达效率的比较研究,分别用约2000vp/细胞的HDAd/EGFP和FGAd/EGFP感染A549细胞,流式细胞仪检测EGFP的表达情况。通过相同时间点流式细胞仪分析EGFP的表达情况,可见HDAd/EGFP感染早期的A549细胞较FGAd/EGFP有更高的荧光表达率及更高的表达强度,显示HDAd载体具有转基因瞬时高表达的特性,是一种更有价值的疫苗载体。(本文来源于《生物工程学报》期刊2010年08期）
郑娴娴[7]（2010）在《辅助病毒依赖型腺病毒载体转基因的体外表达效率》一文中研究指出目的辅助病毒依赖型腺病毒载体(Helper-dependent adenoviral vector, HDAd)主要用于基因治疗的研究,目前仅有两篇关于HDAd作为系统疫苗载体的研究报道,与第一代腺病毒载体或复制缺陷型腺病毒载体(First generation adenoviral vector, FGAd)相比,发现HDAd可引起机体产生针对转基因的更强的细胞免疫和体液免疫反应。一般认为这种增强的免疫应答主要与HDAd能在体内高表达转基因及减弱的载体反应有关,关于这两种载体体外转基因表达情况的研究较少。绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)因其可在异源组织中稳定发出荧光、所产生的荧光不需要任何物质的辅助、不影响宿主等特性得到了广泛应用,增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)是经过密码子优化及氨基酸突变等一些列基因改造后获得的GFP突变体,发出的荧光比GFP更强、更易观察,成为比GFP应用更广泛的报告基因。为比较这两种载体的体外表达效率,我们构建了可表达EGFP的HDAd(HDAd/EGFP)并完成大量制备、纯化和体外表达鉴定;同时与可表达EGFP的FGAd(FGAd/EGFP)进行了体外感染和转基因表达效率的比较研究,为进一步的体内免疫效果和免疫保护作用研究奠定基础。方法通过PCR获得带有CMV启动子、EGFP开放读码框(Open reading frame, ORF)和SV40多聚腺甘酸序列的EGFP表达盒,先后克隆至HDAd穿梭质粒pSC11及HDAd骨架质粒pSC15B,构建pSC15B/EGFP重组质粒。PmeⅠ消化pSC15B/EGFP获得线性化片段,经磷酸钙共沉淀法转染293Cre4细胞,16 h后感染辅助病毒H14,收获HDAd/EGFP粗提液,随后以HDAd/EGFP粗提液及辅助病毒连续共感染293Cre4细胞直至HDAd/EGFP达到复制极限。大量制备HDAd/EGFP , CsCl超速离心纯化,荧光显微镜和电镜下观察纯化后的HDAd/EGFP。使用分光光度计法测定纯化的病毒颗粒数(virus particle, vp),分别用约2000 vp/细胞的HDAd/EGFP和FGAd/EGFP感染A549细胞,通过相同时间点流式细胞仪分析EGFP的表达情况。结果成功构建可表达EGFP的HDAd/EGFP载体,通过与辅助病毒共感染293Cre4细胞及CsCl梯度法超速离心制备了大量纯化的HDAd/EGFP。纯化后体外感染293Cre4细胞,荧光显微镜下观察到EGFP的表达;电镜观察可见典型的腺病毒颗粒。以相同量的FGAd/EGFP和HDAd/EGFP分别体外感染A549细胞,流式细胞仪检测EGFP的表达情况,结果显示HDAd/EGFP感染早期的A549细胞较FGAd/EGFP有更高的荧光表达率及更高的表达强度。结论成功构建、纯化了可表达EGFP的HDAd/EGFP载体,体外实验显示HDAd载体具有转基因瞬时高表达的特性,与FGAd相比,我们认为HDAd是一种更有价值的疫苗载体。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2010-04-01）
付远辉,何金生,石长信,洪涛[8]（2009）在《辅助病毒依赖型腺病毒载体研究进展》一文中研究指出辅助病毒依赖型腺病毒载体(helper-dependent adenoviral vector,HDAd)缺乏所有腺病毒的编码序列,与非复制型的第一代腺病毒载体(first-generation adenoviral vector,FGAd)相比,具有载体免疫原性低、安全、转移容量大和持续表达等特点,现广泛用于遗传性疾病、神经退行性疾病和肿瘤等的基因治疗和特异性靶向治疗研究。本文综述了HDAd构建和应用等方面的研究进展及未来的发展方向。(本文来源于《微生物学报》期刊2009年02期）
杨兵,何金生,石长信,张梅,虞结梅[9]（2007）在《可表达人呼吸道合胞病毒融合蛋白辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建与制备》一文中研究指出构建可表达A亚型人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytialvirus,RSV)融合蛋白(fusion protein,F)的辅助病毒依赖型腺病毒载体(helper-dependent adenoviral vector,HDAd),并完成大量制备、纯化和F蛋白的体外表达鉴定。将带有CMV启动子序列的F基因亚克隆至克隆载体pSC11,鉴定正确后,克隆至HDAd质粒pSC15B,构建pSC15B/F HDAd重组质粒,PmeⅠ消化pSC15B/F去除原核复制元件及抗性基因,获得HDAd/F DNA分子,经磷酸钙共沉淀法转染293Cre4细胞,16h后感染辅助病毒,收获HDAd/F载体粗提液,随后以HDAd/F粗提液及辅助病毒连续共感染293Cre4细胞直至HDAd/F达到复制极限,同时以可表达β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,LacZ)报告基因的HDAdLacZ载体作为平行对照监测载体复制过程。与辅助病毒共感染293Cre4细胞进一步扩增HDAd/F、CsCl梯度法超速离心制备大量纯化的HDAd/F载体,体外感染293细胞,RT-PCR检测到F基因有转录,Western blot分析表明F蛋白有特异性表达。总之,成功构建HDAd/F载体并在真核细胞中实现表达,为体内免疫学效力试验奠定基础,为研制RSV疫苗提供了一种新方法。(本文来源于《微生物学报》期刊2007年04期）
杨兵[10]（2007）在《可表达人呼吸道合胞病毒融合蛋白的辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建与制备》一文中研究指出目的人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus，RSV)广泛流行于世界各地，是婴幼儿下呼吸道感染的最重要病原。目前尚无安全、有效的疫苗用于预防RSV感染。RSV两个重要的糖蛋白膜表面表达的融合蛋白F(fusion protein，F)和粘附蛋白G，是激发机体产生中和抗体的主要蛋白，也是疫苗研究发展的重要内容。与G蛋白相比，F蛋白有更多的抗原识别位点，不同亚型间F蛋白高度保守、同源性高达86％，能刺激机体产生体液免疫及细胞免疫应答，针对F的中和抗体具有交叉保护作用，是RSV疫苗研究的最重要的靶抗原。辅助病毒依赖型腺病毒载体(helper-dependent adenoviral vector，HDAd)主要用于基因治疗研究，作为疫苗载体的研究起步较晚，尚没有作为黏膜基因释放系统用于疫苗研究的报道。HDAd与腺病毒具有相同的细胞嗜性，对呼吸道上皮细胞具有高效感染的能力，且能长期、持续表达转基因，具有重要的研究与使用价值。本研究拟构建可表达A亚型RSV F蛋白的辅助病毒依赖型腺病毒载体(HDAd／F)，并完成大量制备、纯化和F蛋白的体外表达鉴定，为进一步的体内免疫效果和免疫保护作用研究奠定基础。方法将带有CMV启动子序列的F基因亚克隆至克隆载体pSC11，鉴定正确后，克隆至HDAd质粒pSC15B，构建pSC15B／F HDAd重组质粒，PmeⅠ消化pSC15B／F去除原核复制元件及抗性基因，获得HDAd／F DNA分子，经磷酸钙共沉淀法转染293Cre4细胞，16 h后感染辅助病毒，收获HDAd／F载体粗提液，随后以HDAd／F粗提液及辅助病毒连续共感染293Cre4细胞直至HDAd／F达到复制极限，同时以可表达β-半乳糖苷酶(β-galactosidase，LacZ)报告基因的HDAdLacZ载体作为平行对照监测载体复制过程。大量制备HDAd／F，CsCl密度梯度及等密度梯度两次超速离心纯化，利用分子生物学技术体外鉴定HDAd／F表达情况。结果成功构建了可表达RSV F蛋白的HDAd／F载体，通过与辅助病毒共感染293Cre4细胞及CsCl梯度法超速离心制备了大量纯化的HDAd／F载体，透射电镜观察显示HDAd的直径约为70 nm，具有典型的腺病毒形态，运用分光光度测定法分析表明纯化后HDAd载体颗粒浓度为：7.4×10~(12)(vp／ml)，体外感染293细胞，RT-PCR检测到F基因有转录，Western blot分析表明F蛋白有特异性表达。结论成功构建HDAd／F载体并在真核细胞中实现表达，为体内免疫学效力试验奠定基础，为研制RSV疫苗提供了一种新方法。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2007-05-01）
辅助病毒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探讨安宫牛黄丸辅助病毒唑对小儿急性重症病毒性肺炎血清降钙素原及免疫功能的影响。方法:选取2015年2月—2016年8月海南省海口市妇幼保健院收治的符合纳入标准的急性重症病毒性肺炎患儿88例,按随机数字表法分组,分别44例,对照组予以病毒唑常规治疗治疗,研究组予以安宫牛黄丸辅助病毒唑治疗,共治疗7 d,采血测定免疫功能、炎症因子及基质金属蛋白酶等指标,同时对比临床疗效及安全性。结果:与治疗前数据对比,两组治疗后Ig M、Ig G、Ig A含量升高,治疗后CD3、CD4、CD8、CD4/CD8含量升高,治疗后血清hs-CRP、PCT、TNF-α含量降低,IL-2含量升高,治疗后血清MMP9、TIMP1含量降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与对照组数据对比,研究组治疗后Ig M、Ig G、Ig A含量较高,治疗后CD3、CD4、CD8、CD4/CD8含量较高,治疗后血清hs-CRP、PCT、TNF-α含量较低,IL-2含量较高,治疗后血清MMP9、TIMP1含量较低,差异具有统计学意义(P<0.05);对照组有效率72.73%低于研究组有效率90.91%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:安宫牛黄丸辅助病毒唑对小儿急性重症病毒性肺炎疗效确切,能显着降低降钙素原,提高免疫功能,安全性高。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
辅助病毒论文参考文献
[1].刘珊珊,于成明,曹欣然,耿国伟,李向东.两种类型黄瓜花叶病毒卫星RNA的序列、结构以及对辅助病毒的致病性调控分析[J].植物病理学报.2018
[2].卓珠琳,温壮飞.安宫牛黄丸辅助病毒唑对小儿急性重症病毒性肺炎血清降钙素原及免疫功能的影响[J].辽宁中医杂志.2017
[3].张梅,江彦泽,陈念华,付远辉,乔伟.可表达新型甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建[J].生物医学工程学杂志.2014
[4].申晚霞.植物病毒卫星RNA干扰其辅助病毒致病性的分子机理[D].西南大学.2013
[5].江彦泽.可表达新型甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建及初步鉴定[D].北京交通大学.2012
[6].郑娴娴,何金生,付远辉,徐少华,谢灿.辅助病毒依赖型腺病毒载体转基因的体外表达效率[J].生物工程学报.2010
[7].郑娴娴.辅助病毒依赖型腺病毒载体转基因的体外表达效率[D].安徽医科大学.2010
[8].付远辉,何金生,石长信,洪涛.辅助病毒依赖型腺病毒载体研究进展[J].微生物学报.2009
[9].杨兵,何金生,石长信,张梅,虞结梅.可表达人呼吸道合胞病毒融合蛋白辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建与制备[J].微生物学报.2007
[10].杨兵.可表达人呼吸道合胞病毒融合蛋白的辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建与制备[D].安徽医科大学.2007
论文知识图
