TRPV4通道在膝骨关节炎软骨细胞中的功能表达

TRPV4通道在膝骨关节炎软骨细胞中的功能表达

论文摘要

目的基于瞬时感受器电位离子通道家族(TRP)香草素受体亚家族成员Ⅳ型(TRPV4)的特点,探讨其在人类软骨细胞中的功能性表达,以及对于膝骨关节炎(KOA)的意义。方法人类KOA软骨细胞原代培养。分别用浓度为0、1、10和100 ng/ml,以及浓度为1和10μg/ml的脂多糖(LPS)全培孵育24 h,或用浓度为1μg/ml的LPS全培分别孵育0、4、8、12、24和48 h,qRT-PCR检测软骨细胞TRPV4的基因表达。软骨细胞分为空白组、LPS组、LPS+TRPV4抑制剂组,行实时荧光钙成像观察各组钙离子内流情况,并提取培养上清液,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测基质金属蛋白酶MMP-1、MMP-3及MMP-13水平。结果浓度为1、10、100 ng/ml和1μg/ml的LPS均能增加人类软骨细胞TRPV4通道的基因表达(P <0.05);实时荧光钙成像分别观察20、40和60 s的荧光强度发现:LPS组荧光强度较空白组增加(P <0.05),LPS+TRPV4抑制剂组荧光强度较LPS组降低(P <0.05);此外,LPS组的MMP-1、MMP-3及MMP-13水平高于空白组(P <0.05),而LPS+TRPV4抑制剂组低于LPS组(P <0.05)。结论在KOA的炎症环境下,TRPV4不仅存在表达量升高,还存在功能表达增强。TRPV4通道可能通过影响MMP-1、MMP-3及MMP-13的表达水平参与KOA软骨降解的过程。

论文目录

  • 1 资料与方法
  •   1.1 主要试剂
  •   1.2 仪器与设备
  •   1.3 实验方法
  •     1.3.1 人类软骨细胞原代培养
  •     1.3.2 LPS干预软骨细胞模拟KOA炎症环境
  •     1.3.3 qRT-PCR检测
  •     1.3.4 酶联免疫吸附试验(enzyme linked immuno-sorbent assay,ELISA)
  •     1.3.5 实时荧光钙成像
  •   1.4 统计学方法
  • 2 结果
  •   2.1 LPS的刺激增加TRPV4通道在人类KOA软骨细胞中的表达
  •   2.2 TRPV4通道在人类KOA软骨细胞中功能性表达
  •   2.3 抑制TRPV4通道可以降低细胞培养上清中MMPs的表达
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张力,王培民,殷松江,李晓辰,赵凌睿,徐波,肖延成

    关键词: 骨关节炎,香草素受体亚家族成员型,软骨细胞,功能表达,基质金属蛋白酶

    来源: 中国现代医学杂志 2019年23期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 外科学

    单位: 南京中医药大学附属医院骨伤科

    基金: 国家自然科学基金(No:81573993,81774334),江苏省自然科学基金(No:BK20171513),江苏省领军人才培养资助项目(No:SLJ0207)

    分类号: R684.3

    页码: 17-22

    总页数: 6

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    TRPV4通道在膝骨关节炎软骨细胞中的功能表达
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