DKK1对胃癌AGS细胞增殖、周期和凋亡的影响

DKK1对胃癌AGS细胞增殖、周期和凋亡的影响

论文摘要

目的:探讨沉默厚体1(DKK1)基因对胃癌AGS细胞增殖、周期和凋亡的影响及其作用机制。方法:构建DickkopfsiRNA(DKK1-siRNA)稳定转染细胞株,提取稳定转染细胞的RNA及总蛋白,qPCR和WB实验分别检测DKK1 mRNA及蛋白的表达水平。实验分为空白对照(Control)组、阴性对照(shNC)组及沉默DKK1(DKK1-shRNA)组,CCK-8实验检测各组培养0、24、48、72、96、120、144 h后AGS细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡水平。检索HPA数据库,分析DKK1与胃癌临床病理的关系。结果:成功建立了稳定沉默DKK1基因的胃癌细胞株AGS,证实DKK1-shRNA组细胞中DKK1 mRNA及蛋白表达水平分别比Control组和shNC组降低到72%和47%(均P<0.05)。细胞增殖曲线显示,与Control和shNC组比较,DKK1-shRNA组细胞培养72h后其增殖显著降低(P<0.05)。与shNC组比较,DKK1-shRNA组S期细胞从32.06%降低到25.87%,G2/M期细胞由8.49%上升到21.26%,细胞凋亡率从10.34%上升到20.65%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。HPA数据库的分析显示,胃癌组织中DKK1 mRNA水平显著高于胃正常组织,DKK1 mRNA的高表达与胃癌患者生存率呈负相关(均P<0.05)。结论:沉默DKK1基因可抑制胃癌AGS细胞的增殖,阻滞细胞于G2/M期并促进细胞凋亡;DKK1在胃癌中发挥促癌作用。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 细胞株、主要试剂和仪器
  •   1.2 DKK1-sh RNA载体构建
  •   1.3 AGS细胞转染及稳定转染细胞株筛选
  •   1.4 q PCR检测AGS细胞中DKK1 m RNA表达
  •   1.5 WB实验检测DKK1蛋白的表达水平
  •   1.6 CCK-8法检测AGS细胞的增殖能力
  •   1.7 流式细胞术检测细胞周期
  •   1.8 流式细胞术检测AGS细胞凋亡水平
  •   1.9 统计学处理
  • 2 结果
  •   2.1 成功构建DKK1-sh RNA载体
  •   2.2 AGS细胞转染效率大于90%
  •   2.3 DKK1-sh RNA转染AGS细胞中DKK m RNA和蛋白的表达水平显著下降
  •   2.4 沉默DKK1抑制了胃癌AGS细胞的增殖
  •   2.5 沉默DKK1阻滞AGS细胞于G2/M期
  •   2.6 沉默DKK1基因促进AGS细胞凋亡
  •   2.7 DKK1与胃癌的生物信息学分析
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 骆梅,周建奖,王琴容,杨丽萍,陈学书,龙妮娅,谢渊,赵艳

    关键词: 厚体基因,胃癌,细胞,增殖,细胞周期,凋亡

    来源: 中国肿瘤生物治疗杂志 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 肿瘤学

    单位: 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室,贵州医科大学分子生物学重点实验室,贵州医科大学附属医院临检科

    基金: 国家自然科学基金资助(No.31560326,No.31760328,No.31660031),贵州省科技计划资助项目(No.[2017]5652),贵阳市科技计划资助项目(No.[2017]5-16,[2017]30-4)~~

    分类号: R735.2

    页码: 1324-1330

    总页数: 7

    文件大小: 2237K

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