利用CRISPR-dCas9系统促进脂肪干细胞的成骨诱导分化

利用CRISPR-dCas9系统促进脂肪干细胞的成骨诱导分化

论文摘要

为了建立一种快速促进脂肪间充质干细胞成骨诱导分化的方法,本研究利用CRISPR-dCas9系统快速激活成骨前体基因的表达,通过对细胞内前体基因转录的检测和诱导分化后茜素红染色来确定成骨诱导分化的效率。结果可见,通过CRISPR-dCas9系统可以快速地启动RUNX2和OSX基因的转录;经成骨诱导分化后茜素红染色显示,基因编辑过的细胞成骨诱导更快。本研究结果表明,通过CRISPR-On系统可以有效地促进成骨前体细胞相关基因RUNX2和OSX的表达,从而使得骨前体细胞相关基因可以被快速地内源性激活,使得脂肪间充质干细胞快速进入成骨诱导分化状态,促进成骨分化的潜能。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 实验动物与试剂
  •   1.2 小鼠脂肪干细胞的分离培养
  •   1.3 脂肪间充质干细胞生长曲线的测定
  •   1.4 脂肪干细胞的鉴定
  •   1.5 脂肪干细胞的三系分化潜能鉴定
  •   1.6 sgRNA设计
  •   1.7 CRISPR-dCas9系统介导的过表达系统
  •   1.8 RT-qPCR
  • 2 结果
  •   2.1 ASCs的分离和培养
  •   2.2 ASCs表面标志物的鉴定
  •   2.3 ASCs多向分化潜能的鉴定
  •   2.4 CRISPR/dCas9系统介导的内源性过表达
  •   2.5 CRISPR/dCas9系统激活内源性成骨前体细胞对成骨诱导能力的影响
  • 3 小结
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 杨馥如,王学智,余四九

    关键词: 脂肪干细胞,成骨诱导分化

    来源: 中国兽医科学 2019年03期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 甘肃农业大学动物医学院,中国农业科学院上海兽医研究所,中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所

    基金: 国家科技基础性工作专项(2013FY110600-6)

    分类号: Q78

    DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0076

    页码: 372-377

    总页数: 6

    文件大小: 3601K

    下载量: 221

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