猪流行性腹泻病毒安徽分离株N基因的克隆与表达

猪流行性腹泻病毒安徽分离株N基因的克隆与表达

论文摘要

[目的]克隆和表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的N基因。[方法]采用RT-PCR方法对PEDV FD株的N基因进行扩增,将扩增产物连接pET-28B载体,阳性质粒转入大肠杆菌BL21感受态细胞,诱导表达目的蛋白。[结果]PEDV FD株N基因序列全长为1 326个核苷酸,编码441个氨基酸;重组N蛋白为可溶性表达,大小约58 ku;Western blot检测结果表明,重组N蛋白与PEDV抗体阳性血清发生特异性反应。[结论]该试验制备的PEDV重组N蛋白具有较好的免疫原性,可用于PEDV诊断方法的开发及相关研究。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 病毒
  •   1.2 主要试剂与菌株
  •   1.3 PEDV N基因的扩增
  •     1.3.1 引物合成。
  •     1.3.2 RNA提取及cDNA合成。
  •     1.3.3 PCR扩增和测序。
  •   1.4 PEDV N基因的原核表达
  •     1.4.1 重组质粒的诱导表达。
  •     1.4.2 蛋白表达形式分析及纯化。
  •     1.4.3 重组蛋白的 Western blot检测分析。
  • 2 结果与分析
  •   2.1 PEDV N基因的扩增和测序
  •   2.2 表达产物的SDS-PAGE鉴定
  •   2.3 重组蛋白的表达分析和纯化
  •   2.4 重组蛋白的Western blot检测结果
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 潘孝成,沈学怀,赵瑞宏,戴银,胡晓苗,侯宏艳,周学利,张丹俊

    关键词: 猪流行性腹泻病毒,蛋白,原核表达

    来源: 安徽农业科学 2019年17期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所

    基金: 安徽省科技重点研发项目(1704a07020066),安徽省农业科学院平台项目(2019YL065),安徽省农业科学院创新团队项目(13C0405),安徽省生猪产业技术体系项目(AHCYTX-05-09),安徽省科技重大专项(17030701008)

    分类号: S852.651

    页码: 91-93

    总页数: 3

    文件大小: 428K

    下载量: 108

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