朱元祺, 姜岩, 王斌, 钱冬萌[1]2003年在《HIV-1 SF2株env基因C1与C3区的嵌合表达》文中认为①目的 构建HIV 1SF2株env基因C1与C3区嵌合片段的克隆并在大肠杆菌中表达。②方法用DNAstar软件辅助设计引物 ,以含有HIV 1SF2株前病毒基因组的 9B1R6质粒为模板 ,PCR法分别扩增出env基因C1和C3段 ;两个片段经KpnⅠ酶切、T4连接酶连接和扩增后 ,再将经EcoRⅠ、SalⅠ双酶切的嵌合片段插入表达载体 pGEX 4T 2中 ,构建重组表达质粒 pGEX 4T 2 /C1C3;重组质粒经酶切、测序鉴定后 ,以TSS法转入大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达融合蛋白和SDS PAGE电泳分析表达蛋白图谱。③结果 经酶切和测序分析 ,插入片段大小、方向和读码框架正确 ,无碱基错配 ,表明成功构建 pGEX 4T 2 /C1C3克隆 ;重组克隆在大肠杆菌DH5α中经IPTG诱导 ,高效表达出相对分子质量为 4 .3万的融合蛋白。④结论 重组质粒 pGEX 4T 2 /C1C3的构建和表达成功 ,为进一步研究该表达蛋白的活性和HIV疫苗的研制奠定了基础。
朱元祺[2]2003年在《HIV-1SF2株env基因C1与C3区的嵌合表达》文中研究说明目的：构建HIV-1SF2株env基因C1区与C3区嵌合片段的克隆并在大肠杆中表达，以便对其表达蛋白的结构和功能进行进一步研究。 方法：用DNAstar软件辅助设计引物，以含有HIV-1SF2株前病毒基因组的9B_1R_6质粒为模板，PCR法分别扩增出env基因C1和C3段；两个片段经Kpn Ⅰ酶切、T_4连接酶连接和扩增后，再将经EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ酶切的嵌合片段插入表达载pGEX-4T-2中，使插入片段位于谷胱甘肽S-转移酶(GST)读码框架下游的多克隆酶切位点(MCS)，构建重组表达质粒pGEX-4T-2/C1C3；重组质粒经酶切、测序鉴定后，以TSS法转入大肠杆菌DH_(5α)，IPTG诱导表达融合蛋白，最后经SDS-PAG电泳分析表达蛋白图谱。 结果：经酶切和测序分析，插入片段读码框架正确，无碱基错配，表明成功构建pGEX-4T-2/C1C3克隆；重组克隆在大肠杆菌DH_(5α)中经IPTG诱导，高效地表达出相对分子质量(M_r)为43×10~3的融合蛋白。 结论：重组质粒pGEX-4T-2/C1C3的构建和表达成功，为进一步研究该表达蛋白的活性和HIV疫苗的研制奠定了基础。
参考文献：
[1]. HIV-1 SF2株env基因C1与C3区的嵌合表达[J]. 朱元祺, 姜岩, 王斌, 钱冬萌. 青岛大学医学院学报. 2003
[2]. HIV-1SF2株env基因C1与C3区的嵌合表达[D]. 朱元祺. 青岛大学. 2003