小鼠生殖细胞特异性转录因子SOHLH1调控Sox30基因表达的机制

小鼠生殖细胞特异性转录因子SOHLH1调控Sox30基因表达的机制

论文摘要

目的 SOHLH1 (Spermatogenesis-and oogenesis-specific bHLH transcription factor-1)和SOX30(SRY box)是与精子发生相关的转录因子,Sohlh1与Sox30的基因敲除雄鼠均丧失生育能力。出生后7天Sohlh1基因敲除雄鼠DNA芯片显示Sox30表达显著下调,本文探究了早期发育相关转录因子SOHLH1对精子发生后期的关键基因Sox30基因的转录调控作用。方法构建Sox30启动子荧光素酶表达质粒,瞬时共同转染Sox30荧光素酶表达质粒和Sohlh1真核表达质粒并利用荧光素酶活性测定实验检测荧光值。通过染色质免疫共沉淀实验检测SOHLH1与Sox30启动子DNA序列特异序列的结合情况筛选主要激活位点。结果共转染Sohlh1真核表达质粒和Sox30启动子区域荧光素酶质粒的实验组荧光素酶活性高于对照组。SOHLH1与Sox30启动子上的特异性位点结合,在-489 bp位点的结合作用最强。结论精子发生早期重要转录因子SOHLH1可以直接激活顶体形成相关基因Sox30转录,-489 bp (CAGGTG)为主要特异性结合位点,丰富了精子发生中延时翻译表达调控的现象并进行了调控机制的初步探索。

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 实验动物
  •   1.2 主要试剂与仪器
  •   1.3 实验方法
  •     1.3.1 基因组DNA提取
  •     1.3.2 Sox30基因启动子区域SOHLH1结合位点分析及引物设计
  •     1.3.3 PCR扩增Sox30基因启动子片段
  •     1.3.4 构建Sox30启动子全长和截短序列的pGL3-Sox30荧光素酶报告质粒
  •     1.3.5 转染293T细胞并检测双荧光素酶报告基因系统荧光素酶活性
  •     1.3.6 染色质免疫共沉淀 (ChIP) 实验筛选SOHLH1结合位点
  •   1.4 统计学方法
  • 2 结果
  •   2.1 构建pGL3-Sox30启动子区域荧光素酶报告质粒
  •   2.2 双荧光素酶实验验证转录因子SOHLH1对Sox30基因启动子区的转录调节作用
  •   2.3 ChIP实验筛选转录因子SOHLH1与Sox30基因启动子区的主要结合位点
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 齐婉婧,孙奇,李媛,张雪,金美玉,何岩,郑志红

    关键词: 精子发生,小鼠

    来源: 中国比较医学杂志 2019年07期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 中国医科大学实验动物部

    基金: 国家自然科学基金(2015408002)

    分类号: R394.1

    页码: 36-41

    总页数: 6

    文件大小: 184K

    下载量: 159

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