固氮菌(Ensifer meliloti 1021)降解苯甲腈及其代谢酶的基因克隆和表达

论文摘要

对固氮菌（Ensifer meliloti 1021）降解环境污染物苯甲腈途径及其相关酶进行了基因克隆和表达研究。高效液相色谱法（HPLC）分析显示En.meliloti 1021静息细胞可将苯甲腈降解为苯甲酰胺和苯甲酸。En.meliloti 1021全基因组中没有腈水解酶（nitrilase）基因,但有1个腈水合酶（nitrile hydratase）基因和12个酰胺酶（amidase）基因,因而其降解苯甲腈生成苯甲酸是经腈水合酶/酰胺酶途径。PCR扩增En.meliloti 1021的腈水合酶基因并在Esche-richia coli Rosetta （DE3）中成功表达。腈水合酶过表达的E.coli可在5 min内降解90%的浓度为97 mmol·L-1的苯甲腈,10 min基本检测不到苯甲腈,产生66.9 mmol·L-1苯甲酰胺。对12个酰胺酶进行了系统发育树分析,发现有4个酰胺酶与Genbank数据库中的苯甲酰胺水解酶（benzamide amidohydrolase）有较高的同源性。对这4个酰胺酶基因进行克隆表达以及酶活检测,发现只有登录号为CAC47672.1的酰胺酶有苯甲酰胺酶活性,可将苯甲酰胺水解为苯甲酸。该酰胺酶由434个氨基酸组成,分子量为47 k Da,等电点5.37。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 郭静静,郭磊磊,赵云岫,葛峰,戴亦军

关键词: 固氮菌,腈水合酶,酰胺酶,苯甲腈,微生物降解

来源: 生态与农村环境学报 2019年02期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,农业科技,基础科学

专业: 生物学,环境科学与资源利用

单位: 南京师范大学生命科学学院/江苏省微生物与功能基因组学重点实验室/江苏省微生物资源产业化工程技术研究中心,生态环境部南京环境科学研究所

基金: 国家自然科学基金(31570104)

分类号: X592;X172

DOI: 10.19741/j.issn.1673-4831.2018.0035

页码: 248-254

总页数: 7

文件大小: 1164K

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