论文摘要
[目的]实现东方肉座菌纤维素内切酶EGⅠ在毕赤酵母中的表达,获得重组EGⅠ。[方法]通过RT-PCR获得EGⅠ开放阅读框。将EGⅠ成熟肽和PHO1信号肽的DNA片段插入p PIC3. 5K后,重组表达载体电转化毕赤酵母。通过甲醇诱导表达和镍柱纯化获得EGⅠ。以羟甲基纤维素钠检测活性,以肽N-糖苷酶F分析N-糖基化,以SDSPAGE分析表达情况和糖基化修饰。[结果]获得EGⅠ分泌表达菌株,诱导96 h后上清液活性为0. 513±0. 002 U/m L,纯化后的EGⅠ活性为0. 558±0. 012 U/mg。SDS-PAGE表明EGⅠ分子量在100～180 k Da,远高于预测值47. 3k Da,经肽N-糖苷酶F处理后,降至63～75 k Da。[结论]实现了EGⅠ的分泌表达,获得活性为0. 558±0. 012 U/mg的糖基化重组EGⅠ。
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文章来源
类型: 期刊论文
作者: 林俊涵,林谢榕,柯伙钊,魏瑜,柯轶,王娜,龙敏南
关键词: 东方肉座菌,纤维素内切酶,毕赤酵母,信号肽,糖基化
来源: 生物技术 2019年01期
年度: 2019
分类: 基础科学
专业: 生物学
单位: 福建生物工程职业技术学院食品与生物工程系,厦门大学能源学院
基金: 福建省中青年教师教育科研项目(JA15767)
分类号: Q78
DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.01.0001
页码: 1-6+38
总页数: 7
文件大小: 1491K
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