脱乙酰基酶在枯草芽孢杆菌中的高效可溶性表达

脱乙酰基酶在枯草芽孢杆菌中的高效可溶性表达

论文摘要

为提高脱乙酰基酶的可溶性表达含量,对前期挖掘的脱乙酰基酶NAP-Das2. 3基因进行异源表达及发酵优化。将脱乙酰基酶NAP-Das2. 3基因克隆至枯草芽孢杆菌表达载体p P43NMK的npr B信号肽下游,转入B.subtilis WB800构建了重组工程菌B. subtilis WB800/p P43NMK/nap-das2. 3,并对重组菌培养及发酵产酶条件进行了优化。重组菌最适培养和产酶条件分别为甘油6 g/L、牛肉膏30 g/L、Na Cl 10 g/L; p H 7. 5、培养温度37℃、装液量100 m L (500 m L摇瓶)、培养30 h。在优化的条件下,发酵液中脱乙酰基酶酶活达到106. 42 U/L,较出发条件提高了424. 68倍,在5 L发酵罐培养30 h后,脱乙酰基酶酶活达到116. 13 U/L。研究实现了脱乙酰基酶的异源高效可溶性表达,为脱乙酰基酶的应用提供了基础。

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 实验材料
  •     1.1.1 菌株和质粒
  •     1.1.2 主要工具酶、试剂和试剂盒
  •     1.1.3 主要仪器和设备
  •   1.2 实验材料
  •     1.2.1 脱乙酰基酶编码基因的获得及其重组表达载体的构建和鉴定
  •     1.2.2 重组工程菌株的构建和验证
  •     1.2.3 B.subtilis WB800/p P43NMK/nap-das2.3的培养和NAP-Das2.3表达
  •     1.2.4 摇瓶培养条件的优化
  •     1.2.5 5 L发酵罐中菌体生长及产酶情况
  •   1.3 分析方法
  • 2 结果与分析
  •   2.1 脱乙酰基酶基因的获得及其重组表达载体的构建和鉴定
  •     2.1.1 线性化扩增载体及目的基因片段的克隆
  •     2.1.2 重组质粒pP43NMK/nap-das2.3构建和鉴定
  •   2.2 重组菌株的构建和菌落PCR鉴定
  •   2.3 重组菌株的SDS-PAGE分析
  •   2.4 重组菌的酶活力的测定
  •   2.5 重组菌摇瓶发酵条件的优化
  •     2.5.1 碳源对菌体生长及产酶的影响
  •     2.5.2 氮源对菌体生长及产酶的影响
  •     2.5.3 磷酸盐对菌体生长和产酶的影响
  •     2.5.4 金属离子对菌体生长和产酶的影响
  •     2.5.5 初始培养基p H对菌体生长和产酶的影响
  •     2.5.6 培养温度对菌体生长及产酶的影响
  •   2.6 5 L发酵罐中重组菌的生长及产酶情况
  • 3 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王远山,龚美华,曹成浩,薛亚平

    关键词: 脱乙酰基酶,可溶性表达,枯草芽孢杆菌,过量表达

    来源: 食品与发酵工业 2019年17期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 生物有机合成浙江省重点实验室(浙江工业大学),教育部生物转化与生物净化重点实验室(浙江工业大学),手性生物制造国家地方联合工程研究中心(浙江工业大学)

    分类号: Q78

    DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.021023

    页码: 7-13+19

    总页数: 8

    文件大小: 1870K

    下载量: 159

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