导读:本文包含了汉滩病毒论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:病毒,出血热,综合征,蛋白,包膜,抗体,疫苗。
汉滩病毒论文文献综述
何芳,杨鹏飞,陈国清,唐丽,燕清丽[1]（2019）在《快速检测汉滩病毒新型实时荧光定量RT-PCR方法的建立与应用》一文中研究指出目的建立一种汉滩型汉坦病毒(Hantaan virus,HTNV)荧光定量(RT-PCR)的检测方法,以便快速准确地检测HTNV。方法利用Beacon Designer7.0设计引物和探针,以HTNV的S基因片段为模板,进行实时荧光定量RT-PCR,评价此方法的特异性及灵敏度。结果建立的RT-PCR方法对HTNV的最低检出限为4.08 copies/μL,模板Ct值与稀释浓度的对数之间具有良好的线性关系,标准曲线方程为Y=-3.4118X+41.997,扩增效率为96.4%,R2=0.994。结论所建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法灵敏度高、特异性好,可应用于HTNV的快速检测。(本文来源于《中国校医》期刊2019年06期）
杨森[2]（2019）在《细胞自噬与汉滩病毒感染的相互作用》一文中研究指出目的:探讨细胞自噬在肾综合征出血热(Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome,HFRS)致病中的作用,并进一步了解细胞自噬在汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)复制中的分子机制。从而为HTNV致病机制的研究和HFRS的防控提供依据。方法:1.人群研究:收集河北省2018年HFRS患者的基本信息和抗凝血标本。将符合标准的50名患者纳入HFRS组,在非HFRS患者(健康人群)中进行成组匹配,选择与患病组年龄、性别相匹配的50名健康人作为对照组。ELISA法检测两组人群血清中Beclin-1蛋白的表达水平,应用两样本Mann-Whitney U检验进行分析,比较两组人群Beclin-1表达差异。2.细胞学实验:(1)HTNV感染对细胞自噬的影响:利用HTNV分离株感染Vero E6细胞,用未染毒细胞相同条件下培养作为对照组,采用质粒转染、免疫荧光、Western blot等方法分别检测染毒组和对照组的自噬水平变化,并确定HTNV复制的场所。(2)改变细胞自噬水平对HTNV复制的影响:分别用自噬促进剂和抑制剂对细胞自噬水平进行调控后,感染HTNV,将细胞分为染毒组、促进组和抑制组,用实时荧光定量RT-PCR检测不同组别的HTNV复制水平。结果:1.HFRS组人群血清中的Beclin-1蛋白水平明显高于对照组(u=294.00,P<0.05)。2.染毒组细胞外源LC3蛋白的点状聚集水平明显高于对照组,细胞染毒后36 h和48 h的内源LC3-Ⅱ蛋白表达水平明显高于对照组(t=-2.12,P<0.05;t=-1.64,P<0.05)。3.HTNV特异性蛋白在自噬体内大量存在,自噬体是HTNV复制的重要场所。4.上调细胞自噬水平后可增强HTNV复制水平(t=-4.33,P<0.05),抑制组的HTNV复制量与对照组无差别(t=-1.33,P>0.05)。结论:1.与健康人群相比,HFRS患者体内细胞自噬水平增高。2.HTNV感染可以诱导细胞发生细胞自噬,且自噬体是HTNV复制的重要场所。3.细胞自噬促进HTNV的复制;HTNV抑制自噬降低。(本文来源于《河北医科大学》期刊2019-03-01）
刘赫,叶伟,张亮,程林峰,马宏炜[3]（2019）在《汉滩病毒核衣壳蛋白与宿主相互作用蛋白的分离与纯化》一文中研究指出目的构建带有亲和素标签的汉滩病毒(HTNV)核衣壳蛋白(NP)表达质粒,转染HEK293T细胞并表达后,鉴定与其相互作用的宿主蛋白。方法合成亲和素标签基因(SF)与HTNV NP基因,先后克隆入哺乳动物真核表达载体pCAGGS,构建带有亲和标签SF的HTNV NP表达质粒,酶切鉴定重组质粒,获得的重组质粒命名为pCAGGS-SF-NP。将重组表达质粒瞬时转染到HEK293T细胞中, Western blot法检测重组质粒的表达;瞬时转染并收获蛋白样品,与StrepTrap~(TM) HP琼脂珠混匀后, 4℃过夜孵育;转移到层析柱中,经缓冲液洗涤、脱硫生物素洗脱完成亲和层析,获得洗脱样本;洗脱样品进行SDS-PAGE,分离得到与NP相互作用的宿主蛋白。结果酶切鉴定结果表明成功构建pCAGGS-SF和pCAGGS-SF-NP,重组质粒成功表达串联SF与NP的融合蛋白;在亲和层析过程中,成功特异富集融合蛋白SF-NP;洗脱样品成功分离出与NP相互作用的宿主蛋白。结论构建的重组表达质粒可以在真核细胞中成功表达融合蛋白SF-NP并获得了与NP相互作用的宿主蛋白。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2019年02期）
李卓,陈丽华[4]（2018）在《汉滩病毒(HTNV)感染巨噬样人急性单核白血病细胞(dTHP-1)诱导内质网应激(ER stress)反应的初步探讨》一文中研究指出研究背景:我国是肾综合征出血热(HFRS)的高发地区,我国的HFRS主要由汉滩病毒(HTNV)引起,但其致病机理尚未十分明确。研究认为HFRS的致病与炎症反应、免疫病理损伤密切相关。鉴于内质网应激(ER stress)在病毒感染和免疫逃逸中发挥重要作用,目前很少有关于HTNV诱导内质网应激及其介导的凋亡发挥病理损伤作用的报道。目的 :由于单核巨噬细胞在清除和消灭各种入侵的病原微生物中起着极其重要的作用,本研究初步观测了巨噬样人急性单核白血病细胞(differentiated THP-1,dTHP-1)感染HTNV后的ER stress反应,期望为进一步揭示HTNV感染的致病机制提供理论依据。方法 :首先,用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞分化为dTHP-1细胞,然后用HTNV感染dTHP-1细胞并进行免疫荧光法检测。实时定量PCR检测HTNV感染dTHP-1细胞引起的内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白(GRP78)、X盒结合蛋白1(XBP1s)和C/EBP同源蛋白(CHOP)的mRNA表达水平;Western blot检测HTNV感染dTHP-1细胞引起的内质网应激标志性蛋白GRP78的反应;应用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒及通过流式细胞术检测了dTHP-1细胞在感染100TCID_(50) HTNV 12h后细胞的凋亡状态。结果 :结果显示HTNV感染dTHP-1细胞后,其内质网应激标志性分子GRP78的mRNA和蛋白水平、XBP-1的mRNA水平均明显升高,表明HTNV感染可以诱导dTHP-1细胞启动ERStress。而在病毒感染后2h,CHOP的mRNA水平在病毒感染组与未感染组无明显差异;凋亡检测结果显示,HTNV感染dTHP-112h后细胞未发生明显凋亡。结论 :HTNV感染可以诱导dTHP-1细胞启动ER Stress。HTNV诱导的ER Stress在病毒感染早期(12h内)并未直接导致dTHP-1凋亡。提示HTNV感染引起的免疫应答紊乱在病毒的发病机制中起作用。(本文来源于《第十叁届全国免疫学学术大会摘要汇编》期刊2018-11-07）
董兆昱,郭雷鸣,程林峰[5]（2018）在《汉滩病毒新型疫苗研究进展》一文中研究指出汉滩病毒(HTNV)在我国主要引起肾综合征出血热,是由鼠类传播的一种急性病毒性传染病。虽然我国已成功研制出HTNV灭活疫苗,但该类疫苗仍存在一些问题,凸显出以更安全、更有效和更经济的方式开发高质量新型HTNV疫苗的紧迫性和必要性。我们仅就近年来国内外HTNV新型基因工程疫苗的研究进展做简要综述。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2018年03期）
应旗康[6]（2018）在《汉滩病毒HTNV Gn-CT利用宿主ESCRT介导病毒出芽机制的研究》一文中研究指出【背景】汉滩病毒(hantaan virus,HTNV)属于布尼亚病毒目汉坦病毒科正汉坦病毒属,为基因组分节段的单负链RNA病毒,目前其感染和致病机制尚不完全清楚,尤其是子代病毒释放的过程。成熟且具有感染力的病毒颗粒在细胞内组装后,需要通过出芽的方式释放到细胞外,进一步感染其它细胞,从而扩大感染。多数负链RNA病毒依靠其基质蛋白(matrix protein)提供的活性出芽,并通过其中的一些特定的保守结构域牢固结合宿主内吞体分选转运复合体(Endosomal sorting complex required for transport,ESCRT)来完成出芽小泡的形成和剪切分离,由于这些结构域在病毒复制周期的晚期起作用,故称其为晚期结构域(late domain)。布尼亚病毒不具有基质蛋白,但糖蛋白单独表达可形成病毒样颗粒(virus like particle,VLP),表明糖蛋白具有类似基质蛋白的功能。在对不同汉坦病毒糖蛋白HTNV Gn-CT氨基酸序列进行比对后发现,其中均含有一段保守的氨基酸序列Y-R-T-L,与经典的晚期结构域Y-P-x-L较为相似,故我们欲研究该序列在HTNV出芽过程中的作用:通过构建Y-R-T-L序列的突变体,研究该序列对HTNV出芽的影响,同时明确宿主ESCRT是否参与HTNV出芽过程,并进一步筛选与HTNV出芽密切相关的ESCRT分子,研究其在HTNV出芽过程中的作用机制。【目的】本研究欲通过构建Y-R-T-L序列突变体,研究该序列在HTNV出芽过程中的作用,并明确宿主ESCRT是否参与出芽过程以及HTNV出芽的分子机制。【方法与结果】1.HTNV Gn-CT Y-R-T-L序列对VLP释放的影响首先经序列分析发现不同汉坦病毒包膜糖蛋白的胞质尾区含有一段保守的氨基酸序列Y-R-T-L,在此基础上将HTNV Gn-CT在该序列前后分别进行截短,构建叁个突变载体GnΔC14、GnΔC27和GnΔC42,以及完全缺失HTNV Gn-CT的ΔGnCT作为对照。同时利用点突变法将~(615)Y-R-T-L~(618)序列中四个氨基酸分别依次突变为丙氨酸,构建四个突变载体GnY615A(A-R-T-L)、GnR616A(Y-A-T-L)、GnT617A(Y-R-A-L)及GnL618A(Y-R-T-A)。构建的载体经行双酶切鉴定和测序验证正确。将上述构建的突变载体分别转染HEK293T细胞,Western-blot分别检测细胞上清及细胞裂解样品中的VLP,对比各组上清及细胞中VLP的量。结果显示615与617位的酪氨酸和苏氨酸突变为丙氨酸后,上清中VLP的量较野生型有明显降低,而618位的亮氨酸突变对上清中VLP的量影响不显着。透射电子显微镜观察转染HTNV Gn-CT突变质粒的细胞内VLP的形态及分布,发现615至617位叁个氨基酸突变后VLP在细胞浆内有较明显的聚集;间接免疫荧光染色观察转染HTNV Gn-CT突变质粒的细胞内包膜糖蛋白的分布,615至617位叁个氨基酸突变后Gn明显倾向于在细胞中单侧分布,而转染了wt-M的细胞中Gn呈现均匀分布的状态。2.明确参与HTNV出芽的相关宿主ESCRT分子利用生物信息学软件分别设计针对ESCRT关键连接分子ALIX、TSG101、Nedd4及Vps4A的siRNA各叁组,Western-bolt验证siRNA效果,挑选出有效siRNA序列包装慢病毒,Western-blot验证显示各慢病毒能有效降低对应分子的表达。使用慢病毒分别降低细胞中ALIX、TSG101、Nedd4及Vps4A表达后再转染HTNV M片段或感染HTNV,透射电子显微镜观察细胞内VLP形态及数量,in-cell Western检测细胞内病毒抗原量,同时间接免疫荧光染色观察细胞内病毒抗原的分布。透射电子显微镜观察发现,ALIX、TSG101、Nedd4或Vps4A表达降低均会导致VLP在胞浆中聚集;In-cell Western及间接免疫荧光染色观察结果显示,ALIX、TSG101、Nedd4及Vps4A任一表达降低均会阻碍HTNV出芽到培养上清中。HTNV分别感染ALIX、TSG101、Nedd4及Vps4A降低表达后的细胞,收集感染后的细胞培养上清再感染新细胞,ELISA检测细胞内病毒的抗原量;同时使用HTNV感染细胞后,再感染慢病毒降低ALIX、TSG101、Nedd4及Vps4A表达,收集感染后的细胞培养上清感染新细胞,ELISA检测细胞内病毒的抗原量。ELISA结果显示,上述任一分子表达降低均会影响HTNV的出芽。3.明确HTNV Gn-CT与宿主ESCRT相互作用介导病毒出芽的机制免疫共沉淀(Co-IP)筛选能与HTNV包膜糖蛋白相互作用的ESCRT关键分子,以Gn特异性抗体为捕捉抗体,再分别使用ALIX、TSG101、Nedd4及Vps4A抗体作为检测抗体进行Co-IP,筛选出了能直接与Gn相互作用的分子ALIX,同时间接免疫荧光染色观察发现Gn与ALIX在细胞中有明显的共定位。同样方法以Gn特异性抗体作为捕捉抗体Co-IP检测HTNV Gn-CT突变体与ALIX相互作用以确定二者相互作用的位置。结果显示HTNV Gn-CT中Y-R-T-L序列的缺失或突变会导致Gn与ALIX相互作用明显降低,表明Gn与ALIX结合的位置位于HTNV Gn-CT的Y-R-T-L序列。在过表达ALIX的情况下,Co-IP检测HTNV Gn-CT突变体与ALIX的相互作用的变化情况,发现在过表达ALIX时各HTNV Gn-CT突变体与ALIX相互作用的强弱仍然与Y-R-T-L序列密切相关。同时在ALIX过表达的细胞中感染HTNV,通过ELISA及Western-blot检测释放到上清中的病毒抗原量;Western-blot检测ALIX过表达时,各HTNV Gn-CT突变体释放到细胞培养上清中VLP量的变化。结果显示ALIX在过表达的情况下对HTNV及HTNV VLP的释放均有一定的增强作用,但对HTNV Gn-CT突变体的增强作用则较弱。【结论】本研究通过对HTNV包膜糖蛋白胞质尾区的突变,发现HTNV Gn-CT~(615)Y-R-T-L~(618)序列在HTNV VLP释放过程中有重要作用,其中617位苏氨酸的突变对释放到培养上清中的VLP量的影响最大。同时还发现ALIX、TSG101、Nedd4及Vps4的表达降低均能限制HTNV的出芽,证明了HTNV的出芽过程需要ESCRT的参与。进一步利用Co-IP筛选出了能与HTNV包膜糖蛋白Gn相互作用的ESCRT组成分子ALIX,且该分子对HTNV出芽的影响是通过Gn-CT中的Y-R-T-L序列来完成。本研究对HTNV出芽的机制进行了一定的阐明,为后续深入研究HTNV复制周期细节及研制抗病毒药物奠定基础。(本文来源于《中国人民解放军空军军医大学》期刊2018-05-01）
唐康[7]（2018）在《汉滩病毒糖蛋白HLA-A*02限制性CTL表位的鉴定及其免疫保护性作用的研究》一文中研究指出汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)感染人体可引起严重的肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS),死亡率可高达15%。细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)应答对于胞内病毒的清除至关重要,且与疾病的发生、发展及预后关系密切。目前,关于HTNV特异性CTL应答的研究大多集中在HTNV核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,NP)CTL表位的鉴定,而HTNV糖蛋白(glycoprotein,GP)CTL表位研究报道极少,这限制了人们对机体CTL应答抗HTNV感染机制的全面理解。前期研究中,我们筛选得到了7条HLA-A*0201高亲和力结合HTNV-GP 9肽,并成功合成HLA-A*0201/9肽-四聚体(tetramer),利用tetramer染色技术流式细胞分析检测到HLA-A*02~+HFRS患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中HTNV-GP表位特异性CTL。本研究在此基础上,进一步扩大样本量,发现轻型/中型HFRS患者急性期PBMC中,HTNV-GP表位特异性CTL频率显着高于重型/危重型HFRS患者,提示HTNV-GP表位可能在机体内诱导保护性CTL应答。进一步利用酶联免疫斑点实验(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)证实7条HTNV-GP 9肽可分别在体外诱导HFRS患者PBMC中表位特异性CTL分泌IFN-γ。在HTNV攻毒实验中,选择HLA-A*0201亲和力较高、且轻型/中型HFRS中特异性CTL频率较高的3条HTNV-GP 9肽,VV9(aa8-aa16,VMASLVWPV)、SL9(aa996-aa1004,SLTECPTFL)和LL9(aa358-aa366,LIWTGMIDL)免疫HLA-A2.1/K~b转基因小鼠,发现9肽表位免疫后可诱导有效的CTL应答,显着降低小鼠肝脏、脾脏和肾脏中的HTNV抗原水平和病毒载量。其中,LL9免疫保护作用最佳,且对在小鼠肾脏中抑制HTNV复制的作用最为突出,提示LL9表位特异性CTL应答在肾脏保护过程中发挥重要作用。本研究在鉴定HLA-A*02限制的HTNV-GP CTL表位基础上,首次明确HTNV-GP表位特异性CTL应答与HFRS疾病免疫保护有关,证实HTNV-GP CTL表位可在HLA-A2.1/K~b转基因小鼠体内诱导保护性免疫应答,降低感染小鼠主要脏器的HTNV抗原水平和病毒载量,为设计HTNV多肽疫苗提供重要的实验依据。(本文来源于《中国人民解放军空军军医大学》期刊2018-05-01）
张锦鹏,张冠文,宣国云,孟强,张哲[8]（2017）在《汉滩病毒包膜糖蛋白嵌合DNA疫苗的细胞免疫评价及其优势表位的筛选》一文中研究指出目的:筛选Gn和Gc抗原优势表位,为汉滩病毒疫苗研究提供方向.方法:通过构建汉坦病毒包膜糖蛋白Gn与Gc嵌合溶酶体相关膜蛋白的DNA疫苗pVAX-LAMP/Gn,pVAX-LAMP/Gc,利用酶联免疫斑点实验(ELISpot)长期评估了BALB/c小鼠体内的细胞免疫应答.结果:在刺激T淋巴细胞的短效与长效免疫中,pVAX-LAMP/Gc组的效应优于其他组,并筛选出优势抗原表位.结论:目前许多新型汉滩病毒疫苗研究缺少细胞免疫应答评价和记忆免疫应答评价.筛选出的Gn和Gc的抗原优势表位,可以为新型汉滩病毒疫苗的研制奠定良好的基础.(本文来源于《转化医学电子杂志》期刊2017年10期）
马樱,唐康,张宇丝,张春梅,张赟[9]（2017）在《汉滩病毒结构蛋白串联抗原表位的分子设计及免疫原性评价》一文中研究指出背景:肾综合征出血热(HFRS)是全球广泛分布且危害极大的一种急性传染病。在我国,由汉滩病毒(HTNV)感染引起的HFRS发病率高且死亡率高达15%。目前国内外成功上市的HFRS疫苗均为灭活全病毒疫苗,在预防疾病发生和流行方面起着积极作用,但仍存在刺激机体细胞免疫应答作用弱、诱导产生中和抗体滴度不理想等间题。目的:表位疫苗是基于抗原表位氨基酸序列而制备的一种新型分子疫苗,其安全性好、保护力强并且应答类型可以有效调控,研究HFRS新型表位疫苗具有重要的理论和实际意义。方法:设计基于HTNV HLA-A2限制CTL表位、B细胞表位和通用Th细胞表位的串联体候选疫苗分子。利用HLA-A2.1/K~b转基因小鼠体内HTNV复制模型进行攻毒实验,检测串联表位肽免疫后的小鼠各器官组织悬液中HTNV特异性抗原及RNA病毒载量。结果:在前期鉴定HLA-A2限制性HTNV-Gn/Gc 9肽CTL表位的基础上,通过选择HLA-A2限制的HTNV糖蛋白CTL表位VMASLVWP(VV9)、具有中和活性的HTNV B细胞表位GFLCPEFPGSFRKKC(GC15)及通用Th表位PADRE(AKXVAAWTLKAAA),设计出的串联表位"Th~+CTL"或"B~+Th~+CTL",尤其是"B~+Th~+CTL",与VV9单一CTL表位相比,串联表位肽在HLA-A2.1/K~b转基因小鼠体内可诱导表位特异性CTL产生更高水平IFN-γ,更高频率杀伤介质以及诱导更强烈的特异性CTL增殖的能力。结论:多肽分子内设计"B~+Th"表位肽段对CTL功能发挥的重要辅助作用,串联表位肽的序列及构建方案可作为HTNV多肽疫苗设计研究的候选疫苗分子,可为设计新型HTNV表位肽疫苗提供重要的理论和实验依据。(本文来源于《第十二届全国免疫学学术大会摘要汇编》期刊2017-10-26）
李卓,陈丽华[10]（2017）在《具有中和活性的抗汉滩病毒人源性Fab抗体的制备与鉴定》一文中研究指出研究背景:肾综合征出血热多由汉滩病毒(HTNV)引起,抗HTNV特异性抗体可直接与HTNV结合,参与机体对病毒的免疫清除。目前尚无人源抗体用于HFRS的紧急预防和治疗。目的:在已建立的具有中和活性的抗人汉坦病毒噬菌体抗体库的基础上,筛选制备出针对汉滩病毒的人源性抗体,为HFRS的紧急预防、治疗及疾病的诊断提供手段。方法:以HTNV全抗原为靶分子,用固相筛选法经过4轮的"吸附-洗脱-扩增"过程,从汉滩病毒人Fab噬菌体抗体库中筛选出特异性HTNV Fab噬菌体抗体,经Phage-ELISA鉴定后,特异性HTNV Fab噬菌体抗体转化Ecoli.HB2151,经IPTG诱导表达后,制备可溶性HTNVFab抗体,并用镍琼脂糖凝胶亲和层析法进行纯化,表达及纯化产物用SDS-PAGE还原电泳和Westernblot检测分析,间接ELISA检测HTNV Fab抗体与HTNV Ag的结合活性,微量病毒中和实验检测其对HTNV的中和活性。测序分析Fab抗体的正确率、多样性和所属家族。结果:经4轮筛选、洗脱后,噬菌体滴度测定显示回收率显着增加。筛选前随机克隆测序正确率68%,多样性为95%;第4轮筛选后随机克隆测序正确率81%,多样性为31%。经Phage-ELISA检测后,最终从第叁、四轮筛选的50个克隆中挑选出15个序列正确的特异性人源性汉滩病毒噬菌体Fab抗体,并进行了可溶性表达和纯化。SDS-PAGE还原电泳和Western blot检测发现在约25KD处出现明显目的条带,与Fab抗体的预期大小相符。ELISA结果表明这些可溶性人源性汉滩病毒Fab抗体均能与HTNV Ag特异性结合。微量病毒中和实验显示3株Fab抗体对汉滩病毒具有一定的中和活性。测序分析了15个Fab抗体轻链和重链可变区氨基酸序列,结果表明阳性克隆有抗体家族趋向性表现,大多数阳性克隆轻链和重链属于V3和V4家族,以IGKV3-20*01、IGHV4-59*01家族为主。结论:从已建立的具有潜在中和活性的人源性汉滩病毒噬菌体抗体库中筛选制备出针对汉滩病毒的人源性Fab抗体,初步鉴定3株Fab抗体对汉滩病毒具有一定的中和活性。(本文来源于《第十二届全国免疫学学术大会摘要汇编》期刊2017-10-26）
汉滩病毒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探讨细胞自噬在肾综合征出血热(Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome,HFRS)致病中的作用,并进一步了解细胞自噬在汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)复制中的分子机制。从而为HTNV致病机制的研究和HFRS的防控提供依据。方法:1.人群研究:收集河北省2018年HFRS患者的基本信息和抗凝血标本。将符合标准的50名患者纳入HFRS组,在非HFRS患者(健康人群)中进行成组匹配,选择与患病组年龄、性别相匹配的50名健康人作为对照组。ELISA法检测两组人群血清中Beclin-1蛋白的表达水平,应用两样本Mann-Whitney U检验进行分析,比较两组人群Beclin-1表达差异。2.细胞学实验:(1)HTNV感染对细胞自噬的影响:利用HTNV分离株感染Vero E6细胞,用未染毒细胞相同条件下培养作为对照组,采用质粒转染、免疫荧光、Western blot等方法分别检测染毒组和对照组的自噬水平变化,并确定HTNV复制的场所。(2)改变细胞自噬水平对HTNV复制的影响:分别用自噬促进剂和抑制剂对细胞自噬水平进行调控后,感染HTNV,将细胞分为染毒组、促进组和抑制组,用实时荧光定量RT-PCR检测不同组别的HTNV复制水平。结果:1.HFRS组人群血清中的Beclin-1蛋白水平明显高于对照组(u=294.00,P<0.05)。2.染毒组细胞外源LC3蛋白的点状聚集水平明显高于对照组,细胞染毒后36 h和48 h的内源LC3-Ⅱ蛋白表达水平明显高于对照组(t=-2.12,P<0.05;t=-1.64,P<0.05)。3.HTNV特异性蛋白在自噬体内大量存在,自噬体是HTNV复制的重要场所。4.上调细胞自噬水平后可增强HTNV复制水平(t=-4.33,P<0.05),抑制组的HTNV复制量与对照组无差别(t=-1.33,P>0.05)。结论:1.与健康人群相比,HFRS患者体内细胞自噬水平增高。2.HTNV感染可以诱导细胞发生细胞自噬,且自噬体是HTNV复制的重要场所。3.细胞自噬促进HTNV的复制;HTNV抑制自噬降低。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
汉滩病毒论文参考文献
[1].何芳,杨鹏飞,陈国清,唐丽,燕清丽.快速检测汉滩病毒新型实时荧光定量RT-PCR方法的建立与应用[J].中国校医.2019
[2].杨森.细胞自噬与汉滩病毒感染的相互作用[D].河北医科大学.2019
[3].刘赫,叶伟,张亮,程林峰,马宏炜.汉滩病毒核衣壳蛋白与宿主相互作用蛋白的分离与纯化[J].细胞与分子免疫学杂志.2019
[4].李卓,陈丽华.汉滩病毒(HTNV)感染巨噬样人急性单核白血病细胞(dTHP-1)诱导内质网应激(ERstress)反应的初步探讨[C].第十叁届全国免疫学学术大会摘要汇编.2018
[5].董兆昱,郭雷鸣,程林峰.汉滩病毒新型疫苗研究进展[J].生物技术通讯.2018
[6].应旗康.汉滩病毒HTNVGn-CT利用宿主ESCRT介导病毒出芽机制的研究[D].中国人民解放军空军军医大学.2018
[7].唐康.汉滩病毒糖蛋白HLA-A*02限制性CTL表位的鉴定及其免疫保护性作用的研究[D].中国人民解放军空军军医大学.2018
[8].张锦鹏,张冠文,宣国云,孟强,张哲.汉滩病毒包膜糖蛋白嵌合DNA疫苗的细胞免疫评价及其优势表位的筛选[J].转化医学电子杂志.2017
[9].马樱,唐康,张宇丝,张春梅,张赟.汉滩病毒结构蛋白串联抗原表位的分子设计及免疫原性评价[C].第十二届全国免疫学学术大会摘要汇编.2017
[10].李卓,陈丽华.具有中和活性的抗汉滩病毒人源性Fab抗体的制备与鉴定[C].第十二届全国免疫学学术大会摘要汇编.2017
论文知识图
