论文摘要
目的:探讨经Ⅰ型胶原酶消化法提取的SD大鼠原代脂肪干细胞（ADSCs）,诱导分化为雪旺样细胞（d ADSCs）,比较ADSCs分化前后细胞形态、染色特性及细胞表面特征分子、嘌呤受体P2X7,髓鞘蛋白P0和神经营养因子及相应受体的表达变化,从而观察ADSCs是否具有向雪旺细胞（SCs）的分化潜能并具有修复神经损伤的必要的物质,为临床ADSCs用于修复神经损伤提供实验依据。方法:雄性SD大鼠,体重300±10g,无菌条件下解剖取大鼠腹股沟处脂肪组织,经Ⅰ型胶原酶消化后离心,200目细胞筛过滤,接种培养。通过差速贴壁法纯化细胞,传至第3代后开始用于实验。MTT法检测第3代、第5代、第7代、第9代和第13代细胞活性。选用第3代ADSCs细胞用于实验。流式细胞术检测ADSCs表面特征分子CD29,CD44,CD45和CD90,根据其阳性表达率鉴定ADSCs特性。u ADSCs以2×105/m L的密度铺六孔板,用1m Mβ-巯基乙醇处理24 h,35 ng/m L全反式维甲酸处理72 h,5 ng/m LPDGF、10ng/m Lb FGF、14u Mforskolin、200ng/m L heregulin诱导分化1周,油红O染色观察分化前后细胞的形态变化。使用u ADSCs和d ADSCs提取蛋白,BCA法蛋白定量,通过蛋白免疫印迹法检测嘌呤受体P2X7,神经营养因子NT-3、NRG-1,神经经营养因子受体Trk C,Erb B-4和髓鞘蛋白P0蛋白的含量表达变化。结果:原代培养ADSCs贴壁速度较快,24 h后细胞由圆形伸出伪足,48 h后细胞为短梭形,星形和多角形,形状不规则。传代后细胞多为梭形结构。MTT检测数据分析,复苏后的细胞生长活性没有明显区别,第3代的细胞活性比第5代的活性较好。流式细胞术检测ADSCs结果显示CD45为阴性表达,CD29,CD44和CD90表达为阳性。油红O染色发现u ADSCs红染而d ADSCs无红染,说明u ADSCs向d ADSC分化后,脂肪特性下降。蛋白免疫印迹法（Western Blot,WB）检测结果显示u ADSCs和d ADSCs都可表达P2X7蛋白,表达量无显著差异。神经营养因子NT-3、NRG-1、神经营养因子受体Trk C、Erb B-4、髓鞘蛋白P0在u ADSCs和d ADSCs中都有表达,其中d ADSCs的NT-3、NRG-1、Tr KC、Erb B-4的表达量显著高于u ADSCs组（P<0.05）,而P0的表达量在二组之间无显著性差异,说明ADSCs分化后合成神经营养因子功能增强,或许为ADSCs促进神经修复生长的主要机制。结论:大鼠原代培养ADSCs诱导分化为雪旺样细胞后,脂肪性下降,神经营养因子及对应受体表达量增加,嘌呤受体P2X7、髓鞘蛋白P0无明显变化,说明ADSCs分化后促进神经修复的主要机制与神经营养因子合成增加有关。
论文目录
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 刘亚楠
导师: 吴勇杰,路莉
关键词: 脂肪干细胞,雪旺细胞,神经营养因子,神经损伤
来源: 兰州大学
年度: 2019
分类: 基础科学,医药卫生科技
专业: 生物学,基础医学
单位: 兰州大学
分类号: R329.2
总页数: 64
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