论文摘要
油菜花叶病毒（Oil-Seed Mosaic Virus,ORMV）是一种典型的烟草花叶病毒属病毒,能侵染油菜、拟南芥等十字花科植物。该RNA病毒编码4种蛋白质,分别为126kDa复制酶蛋白、183kDa复制酶蛋白、运动蛋白和外壳蛋白,其中126kDa复制酶蛋白可以在体外特异性地结合21nt的小RNA,进而影响靶mRNA的表达及功能。本研究在拟南芥和本氏烟中过量表达ORMV-126kDa复制酶蛋白,为进一步研究该蛋白对植物体内小RNA的富集作用及该蛋白对小RNA功能和代谢的影响打下基础。本实验以野生型本氏烟草（Nicotiana benthamiana）的叶片为外植体,研究了不同激素配比和激素浓度对烟草离体再生分化的影响、不同AgNO3浓度及不同结冷胶浓度对生芽的影响和不同NAA浓度对生根的影响,对本氏烟草离体再生体系进行优化;同时研究了不同卡那霉素（Kanamycin,Kan）和草甘膦（Basta）的筛选浓度、头孢霉素的抑菌浓度、侵染时间、预培养及共培养时间和乙酰丁香酮（Acetosyringone,AS）浓度对烟草遗传转化的影响。建立了高效的本氏烟遗传转化体系;在此基础上,初步建立了1 2 6 k D a复制酶蛋白在本氏烟中的可诱导表达体系。同时,对之前实验室获得的可诱导表达ORMV-126kDa的拟南芥株系进行了维护、繁殖、纯系筛选和表型的初步观察,发现了与发育相关的两个不同表型。主要研究结果如下:1.对前期获得T1代转基因拟南芥继续筛选繁殖,获得SUC2-126kDa双抗纯系拟南芥植株5个,35S-126kDa双抗纯系拟南芥植株4个。并获得有表型的两个纯系植株。2.以野生型本氏烟草为实验材料,建立了高效的再生体系。选取40 d苗龄无菌烟草叶片为外植体,诱导烟草叶片形成愈伤的激素最佳组合为6-BA 4 mg/L、NAA 0.2mg/L,3 mg/L的AgNO3和9 g/L的结冷胶更有利于促进生芽,0.001 mg/L NAA促进生根。3.在建立烟草再生体系的基础上优化遗传转化体系。与大部分文献不同,本研究发现,25℃预培养2 d后,在18℃共培养3 d的瞬时转化效率最高。4.目前,已获得10个PCR阳性的烟草卡那霉素抗性株（含激活元件）;获得4个PCR阳性的烟草Basta抗性株（含响应元件）。
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文章来源
类型: 硕士论文
作者: 张金迪
导师: 胡全安
关键词: 烟草,可诱导表达,再生,复制酶
来源: 聊城大学
年度: 2019
分类: 基础科学
专业: 生物学,生物学
单位: 聊城大学
分类号: Q943.1
DOI: 10.27214/d.cnki.glcsu.2019.000154
总页数: 54
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