徐大伦[1]2004年在《浒苔主要化学组分的分析及多糖活性的研究》文中研究指明浒苔(Entermorpha)为绿藻门石莼目石莼科植物，本文从以下几个方面对浒苔进行了研究： 一、对浒苔的主要营养成分进行了分析，其粗蛋白质含量为13.21％，粗脂肪为1.04％，灰分为21.87％；组成蛋白质的十七种氨基酸中，其中Glu和Asp含量最高，占总量的26.19％，其次是甜味氨基酸(Ala，Gly，Ser)，占总量的22.14％；组成脂肪的13种脂肪酸有11种不饱和脂肪酸，占脂肪酸总量的58.18％，其中必需脂肪酸亚麻酸含量最高，为15.98％；其次为单不饱和脂肪酸油酸，含量为13.07％；结果表明：浒苔作为一种高蛋白、低脂肪、矿物质含量丰富的绿藻，富含人体8种必需氨基酸和多种不饱和脂肪酸，具有很好的开发利用前景。 二、采用水法和纤维素酶法对浒苔硫酸多糖的提取工艺进行了研究，通过正交试验确定了纤维素酶法提取多糖最佳条件为：固液比1：60，pH5.0，纤维素酶用量为8％，于50℃下浸提2.5h。为适宜工业化生产需要，确定水法提取多糖的最佳条件为：温度为90℃，浸提固液比为1：75，时间为4h。 叁、对水法提取得到的浒苔硫酸多糖(EP)进行了初步的化学组成分析，其总糖含量为74.68％，硫酸基含量为22.70％，糖醛酸含量为17.49％，氨基糖含量为1.42％。 四、利用乙醇沉淀、凝胶层析、离子交换层析等方法对浒苔硫酸多糖(EP)进行了分离纯化，得到EP1，EP2二个组分；并对EP和高得率的分离组分EP2进行了叁个剂量的体外对免疫细胞功能影响的研究，结果表明：EP和EP2均有明显的免疫增强活性，其中EP2在中高剂量有非常明显的促进T、B细胞的增殖反应作用；虽然二者对T细胞直接活化所致的IFN-γ和IL-2的产生未见明显的影响作用，但对抗原提呈细胞活化所介导的IFN-γ产生有显著的增强作用，表现在样品呈浓度依赖性；并且都有一定的抑制IL-12(p40)和TNF-α产生作用；同时在高浓度时有一定的促进IL-10的分泌。
史美佳[2]2017年在《浒苔多糖酶解产物的生物活性及其抑制鱼油氧化的能力的研究》文中指出浒苔作为常见的绿藻植物,分布在我国东南沿海地带,因其丰富的营养价值,被人们作为食物食用。除了食用价值,浒苔还有一定的药用价值,如抗肿瘤,抗氧化,提高免疫力等。并且浒苔繁殖快,有着原料成本低,利用价值高的优点。因此,将浒苔加工为功能性食品具有良好的开发前景。浒苔中多糖的含量较高,但由于浒苔粗多糖活性相对较低,为了提高其生物活性,本文以浒苔粗多糖为原料,用果胶酶和糖化酶进行复合酶解,制得酶解浒苔多糖,并研究了其生物活性,及其在鱼油乳液中抑制脂质氧化的能力。主要研究结果如下:1.用热水浸提法从浒苔中提取粗多糖(EP),并用果胶酶和糖化酶复合对其进行酶解得到酶解多糖,对酶解条件进行响应面优化,得到最佳工艺条件为:反应温度为45.2℃,酶浓度为48.50U/mL,果胶酶:糖化酶活力比为3.40:1。用此优化参数进行多糖酶解3 h,实际测得多糖酶解率为12.10%,得到酶解多糖(EEP)。2.对EP和EEP进行化学组分分析,结果表明酶解后多糖的总糖含量上升,硫酸基含量下降,糖醛酸和蛋白质含量基本不变,且紫外-可见光谱和红外扫描光谱分析可知酶解后主体结构和基团未发生明显改变。HPGPC测得其降解前后的分子量分别为1257、309 kDa,GC-MS分析结果表明EP和EEP的单糖组成均主要为鼠李糖、葡萄糖和木糖,以及少量的甘露糖和半乳糖。通过EP、EEP的还原力、金属螯合能力和自由基(DPPH、.OH、O2-.)清除活性的研究,对其体外抗氧化活性进行评价。结果表明与EP相比,EEP的抗氧化活性得到了明显的提高。EP和EEP对蘑菇酪氨酸单酚酶、二酚酶发挥抑制功效,对单酚酶和对二酚酶的抑制效果都为EEP>EP;EEP对酪氨酸酶的抑制作用是可逆的,抑制类型为混合型抑制;在酪氨酸酶的荧光测定中,EEP浓度增加,酪氨酸酶出现荧光猝灭的现象,并且疏水性发生改变,这说明多糖对酪氨酸酶的叁级结构造成影响。3.为了探索降解浒苔多糖用于鱼油抗氧化的可能性,考察了乳化剂和多糖浓度对鱼油乳液体系稳定性影响。结果表明:以吐温80作为乳化剂,糖浓度为1%的鱼油乳液粒径小并且液滴大小均一,具有良好的贮藏稳定性。考察了极端环境条件下,以吐温80为乳化剂的添加1%浒苔酶解多糖鱼油乳液体系稳定性的强弱。结果表明:浒苔酶解多糖的加入,提高了鱼油乳液的稳定性。以浒苔酶解多糖(EEP)作为抗氧化剂,以VE和TBHQ作为阳性对照,以只添加吐温80(T80)的鱼油乳液作为空白对照,制成鱼油乳液,测定其乳液性质和抑制鱼油脂质氧化的能力。对乳液颗粒性质测定和形态结构表征的结果表明,乳液稳定性顺序为:EEP>>VE>TBHQ。添加VE和TBHQ的鱼油乳液在室温下贮存,均出现分层现象,添加EEP的乳液则稳定性较高。通过测定POV值、TBARS值、pH值和乳液中脂肪酸含量,来评价EEP抑制乳液中脂质氧化的能力,结果表明抗氧化能力:VE>EEP>TBHQ。上述结果证明,EEP的加入,能有效地抑制乳液中鱼油的氧化,并显着提高乳液的稳定性。
林叶[3]2009年在《浒苔多糖提取纯化及生物活性研究》文中认为浒苔(Enteromorpha Prolifera)是我国资源丰富的野生绿藻,营养丰富,具有食用、药用价值。目前国内对浒苔,包括浒苔多糖的研究还较少。本文以浒苔为原料,研究浒苔多糖提取纯化工艺,对其基础理化性质进行分析,以活性氧去除率为指标对浒苔多糖体外抗氧化活性进行研究,并通过动物试验研究浒苔多糖体内抗氧化及降血脂活性。(1)热水浸提浒苔多糖,通过单因素试验和正交试验得到浒苔多糖最佳提取工艺组合为:提取温度90℃,提取时间3 h,料液比1:40。影响提取率的叁个因素中,温度和时间对多糖提取率的影响显着,料液比则影响不显着。(2)测得浒苔粗多糖EP1中主要化学成分含量:多糖33.06%、蛋白质3.23%、硫酸根15.85%。经过叁氯乙酸脱蛋白的多糖半纯品EP2蛋白质含量为1.56%,总糖含量为44.21%,脱蛋白率达到51.69%,总糖含量增加33.72%。(3)热水提取浒苔粗多糖,叁氯乙酸法脱蛋白后,经过Sephadex G-100凝胶色谱分离,得到分子量较为均一的组分,其中检测出含蛋白质成分,推断检测到的蛋白可能是多糖与蛋白的复合物,有待进一步鉴定。(4)通过研究浒苔粗多糖EP1对活性氧自由基的抑制率,考察体外抗氧化活性。结果显示,EP1对O2?·具有抑制作用,浓度25 mg/mL时达到最大抑制率55.11%,效果弱于VC ;对OH·具有较强的抑制作用,浓度0.30 mg/mL时对OH·的抑制率可达到75.52%,效果与VC相近,且随浓度增加效果继续提升。表明EP1对活性氧自由基有较好的抑制作用,达到抗氧化的目的。(5)以正常喂养小鼠为对照,建立高脂模型,以不同剂量EP1对高脂喂养小鼠灌胃4 w,考察其对小鼠高血脂症预防效果。结果显示,EP1能有效降低高血脂症小鼠血清中TCHO、TG含量,提高HDL-C含量,对LDL-C无显着作用,表明EP1对小鼠高血脂症防治有一定功效;高脂喂养各组小鼠肝脏指数均大于正常喂养小鼠,表明EP1无抑制高脂引起的肝脏肿大的效果。(6)取降血脂试验中正常组、高脂模型组和多糖中剂量组测定抗氧化指标(血清和肝脏的MDA、T-SOD、T-AOC、T-AOC/MDA),结果显示,EP1能显着抑制血清MDA的生成,提高肝脏T-AOC、T-SOD,血清T-AOC/MDA,对其他指标没有显着影响。表明EP1对减轻脂质过氧化损伤、提高总抗氧化能力、优化体内抗氧化/氧化平衡有一定作用,但效果不全面。本文对浒苔多糖的提取、分离纯化、基础理化性质进行研究,并考察其体外抗氧化、体内抗氧化、降血脂活性,为进一步开展浒苔多糖的研究及在食品、保健食品、医药行业的应用提供基础数据和参考资料。
宋厚芳[4]2010年在《两种羽藻目绿藻化学组分及其多糖活性研究》文中提出羽藻(Bryopsis plumosa)和刺松藻(Codium fragile)是青岛沿海常见的绿藻,均属于羽藻目绿藻。本文研究了青岛沿海产羽藻和刺松藻的化学组成,并对其多糖的化学组成、结构及生物学活性进行了初步研究,为进一步开发利用羽藻和刺松藻提供理论依据。用化学和仪器分析方法对羽藻和刺松藻的主要化学组成进行了分析,羽藻和刺松藻均含有丰富的碳水化合物、矿物质和蛋白,特别是羽藻中蛋白的含量高达30%以上。羽藻和刺松藻的蛋白质的氨基酸组成丰富,各种呈味氨基酸含量丰富,其中含量最高的是天门冬氨酸和谷氨酸;必需氨基酸含量高,羽藻和刺松藻中必需氨基酸的含量分别占总氨基酸含量的45.3%和46.0%,是良好的氨基酸来源。另外,羽藻和刺松藻中脂肪含量较低,但不饱和脂肪酸含量高,不饱和脂肪酸含量分别占总脂肪酸含量的67.0%和43.65%。结果表明羽藻和刺松藻均是矿物质和蛋白含量高,脂肪含量低,必需氨基酸和必需脂肪酸含量高的优质食物资源。采用热水提取、酸提取和碱提取叁种不同的提取方法,分别制备得羽藻多糖B1、B2和B3,用热水提取法制备得刺松藻多糖C,并利用琼脂糖凝胶离子交换色谱对所得羽藻多糖B1分级纯化得其分级组分BF,对所得刺松藻多糖C进行分级纯化得其分级组分CF1、CF2和CF3。高效液相色谱测定单糖组成,羽藻的单糖主要有半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖等,不同提取方法所得多糖的含量最高的单糖种类有所不同;刺松藻的单糖主要有半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖等,不同样品的结构单元比例不尽相同。利用红外光谱和核磁共振分析羽藻多糖和刺松藻多糖的结构,IR谱图上出现了硫酸基的特征吸收峰、糖醛酸残基中羧基的吸收峰以及糖苷键的特征吸收峰等。NMR谱图均出现了半乳糖残基和糖醛酸的特征吸收峰。从IR谱图和NMR谱图可知,羽藻多糖中糖的构型以β-构型为主,刺松藻多糖中既有α-构型也有β-构型。研究了不同提取方法所得羽藻多糖,刺松藻多糖及其分级组分对超氧阴离子、羟自由基、1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)的清除作用和还原能力,结果表明各组分均具有一定的清除自由基能力,碱提羽藻多糖(B3)与水提羽藻多糖(B1)和酸提羽藻多糖(B2)比较,具有更明显的抗氧化活性;刺松藻多糖分级组分CF3的抗氧化活性要强于刺松藻粗多糖C及其分级组分CF1和CF2;而羽藻多糖B3的抗氧化活性又强于刺松藻多糖CF3,可以进一步研究开发为新的抗氧化剂。保湿和吸湿活性实验以透明质酸和甘油作为对照,研究了羽藻多糖B1、B2与B3及刺松藻多糖C、CF1、CF2与CF3的保湿和吸湿活性,总体上看刺松藻多糖的保湿和吸湿活性均要强于羽藻多糖,特别是CF3与透明质酸有着相似的保湿能力,并且CF3由于其原材料丰富及制备简单,具有开发为保湿剂的潜质。抗凝血活性实验比较了羽藻多糖B1,B2,B3的抗凝血活性,结果表明羽藻多糖对不同酶的活性均强于阴性对照,说明B1,B2,B3都具有不同程度的抗凝血活性。
齐晓辉[5]2012年在《浒苔多糖的结构及寡糖研究》文中提出浒苔是浒苔属绿藻的总称，在分类学上属于绿藻石莼目、石莼科，是我国沿海常见海藻，其作为食用和药用藻类有着悠久的历史。本文以青岛沿海春季和秋季的缘管浒苔、青岛沿海绿潮浒苔以及厦门沿海的条浒苔为原料，采用冷水提取和热水提取方法，分别对四种不同浒苔中的多糖进行了提取，并采用各种色谱分离技术对多糖进行分离纯化，运用化学和现代波谱方法对多糖的结构进行研究；采用酸降解法对多糖进行降解得到不同聚合度的寡糖，并对寡糖的结构进行了研究。主要研究结果如下：1.青岛沿海两种缘管浒苔(Enteromorpha linza)藻体粉末分别经冷水和热水提取得到四种多糖MC、MH、SC和SH，其得率分别为12.4%、15.0%、14.0和12.3%。采用离子交换色谱法和凝聚渗透色谱法对多糖进一步分离纯化，主要得到五个多糖组分MCS、MHS、SCS、SH1S和SH2S。通过化学方法对理化性质进行测定，结果表明MCS、MHS、SCS、SH1S和SH2S的总糖含量分别为51.7%、52.8%、45.7%、50.4%和47.6%；糖醛酸含量为20.7%、17.2%、16.8%、19.4%和15.3%；硫酸基含量为16.9%、17.5%、14.3%、10.5%和13.0%；蛋白含量均低于4%。高效凝胶渗透色谱法分析表明，MCS、MHS、SCS、SH1S和SH2S的分子量分别为412.7kDa、535.0kDa、136.2kDa、502.1kDa和213.5kDa。气相色谱法和PMP柱前衍生高效液相色谱法分析表明，MCS和MHS主要由鼠李糖组成，含有少量木糖和葡萄糖醛酸；SCS、SH1S和SH2S主要由鼠李糖组成，含有少量木糖、葡萄糖醛酸和半乳糖。红外光谱法、甲基化及核磁共振波谱法分析表明，MCS和MHS主要由[→4)-α-L-Rhap-(1→]、[→2,4)-α-L-Rhap-(1→]、[→4)-β-D-Xylp-(1→]和[→4)-β-D-GlcUAp-(1→]组成，含有少量[→3)-α-L-Rhap-(1→]、[→2)-α-L-Rhap-(1→]，硫酸基主要位于[→4)-α-L-Rhap-(1→]的C-3位；SCS主要由[→3)-α-L-Rhap-(1→]、[→2)-α-L-Rhap-(1→]、[→4)-β-D-Xylp-(1→]、[→4)-α-L-Rhap-(1→]和[→2,4)-α-L-Rhap-(1→]组成，硫酸基位于[→3)-α-L-Rhap-(1→]的C-2位或C-4位、[→2)-α-L-Rhap-(1→]的C-3位或者C-4位以及[→4)-α-L-Rhap-(1→]的C-2位；SH1S主要由[→4)-α-L-Rhap-(1→]、[→3)-α-L-Rhap-(1→]、[→2,4)-α-L-Rhap-(1→]、[→4)-β-D-Xylp-(1→]和[→4)-β-D-GlcUAp-(1→]组成，硫酸基位于[→4)-α-L-Rhap-(1→]的C-3位；SH2S主要由[→4)-α-L-Rhap-(1→]和[→4)-β-D-Xylp-(1→]组成，含有少量[→2)-α-L-Rhap-(1→]、[→3)-α-L-Rhap-(1→]、[→3,4)-α-L-Rhap-(1→]、[→2,3)-α-L-Rhap-(1→]和[→2,4)-α-L-Rhap-(1→]，硫酸基主要位于[→4)-α-L-Rhap-(1→]的C-3位。2.青岛绿潮浒苔(Enteromorpha prolifera)藻体粉末经冷水和热水提取法得到两种多糖QC和QH，得率分别为10.6%和22.6%。采用离子交换色谱法和凝聚渗透色谱法对粗多糖进一步分离纯化，主要得到四个多糖组分QC1S、QCQ2、QCQ3和QHS。分析表明QC1S、QCQ2、QCQ3和QHS的总糖含量分别为52.2%、42.4%、51.0%和55.6%；糖醛酸含量为10.9%、4.3%、15.3%和17.3%；硫酸基含量为17.5%、13.2%、20.4%和17.4%；蛋白含量为2.1%、13.6%、2.4%和1.0%。高效凝胶渗透色谱法分析表明，QC1S、QCQ2、QCQ3和QHS的分子量分别为116.3kDa、546.7kDa、541.0kDa和538.4kDa。气相色谱法和PMP柱前衍生高效液相色谱法分析表明，QC1S、QCQ2、QCQ3和QHS主要由鼠李糖组成，其次为木糖；QC1S、QCQ3和QHS中还含有少量葡萄糖醛酸，而QCQ2含有少量甘露糖和氨基葡萄糖。红外光谱法、甲基化和核磁共振波谱法分析表明，QC1S主要由[→4)-α-L-Rhap-(1→]和[→4)-β-D-Xylp-(1→]组成，含有少量[→2)-α-L-Rhap4S-(1→]、[→3)-α-L-Rha4S-(1→]、[→4)-α-L-Rhap2S-(1→]和[→3,4)-α-L-Rhap-(1→]；QHS主要由[→4)-α-L-Rhap-(1→]、[→4)-β-D-Xylp-(1→]和[→4)-β-D-GlcUAp-(1→]组成，含有少量[→3)-α-L-Rhap-(1→]和[→2,4)-α-L-Rhap-(1→]，硫酸基位于[→4)-α-L-Rhap-(1→]的C-3位，其主要含有两种二糖结构单元：[→4)-β-D-ClcUAp-(1→4)-α-L-Rhap3S-(1→]和[→4)-β-D-Xylp-(1→4)-α-L-Rhap3S-(1→]。3.厦门沿海条浒苔(Enteromorpha clathrata)藻体粉末经冷水和热水提取得到两种多糖XC和XH，得率分别为7.3%和10.3%。利用离子交换色谱和凝胶渗透色谱对粗多糖分离纯化，主要得到叁个多糖组分XCS、XH1S和XH2S。分析表明XCS、XH1S和XH2S的总糖含量分别为75.6%、74.1%和64.7%；糖醛酸含量为8.6%、9.2%和7.9%；硫酸基含量为14.4%、18.0%和31.0%；蛋白含量为10.4%、2.6%和2.5%。高效凝胶渗透色谱法分析表明， XCS、XH1S和XH2S的分子量分别为6.0kDa、23.8kDa和511.4kDa，XCS和XH1S的分子量明显小于XH2S。气相色谱法和PMP柱前衍生高效液相色谱法分析表明，XCS主要由阿拉伯糖和半乳糖组成，含有少量鼠李糖和微量岩藻糖、木糖、甘露糖和葡萄糖；XH1S和XH2S主要由阿拉伯糖组成，XH1S还含有少量半乳糖和微量鼠李糖，XH2S含有少量鼠李糖和微量半乳糖。红外光谱法、甲基化和核磁波谱法分析表明，XCS主要由[→2)-β-D-Galp-(1→]、[→3)-β-D-Galp-(1→]、[→4)-β-D-Galp-(1→]和[→6)-β-D-Galp-(1→]组成，含有少量[→4)-β-L-Arap-(1→]、[→2)-α-L-Rhap-(1→]、[→3)-α-L-Rhap-(1→]和[→2)-α-L-Rhap-(1→]，硫酸基主要位于[→4)-β-D-Galp-(1→]的C-6位或者C-2位、[→6)-β-D-Galp-(1→]的C-4位或者C-2位。XH1S主要由[→4)-β-L-Arap-(1→]组成，含有少量[→3)-β-D-Galp-(1→]、[→4)-β-D-Galp-(1→]和[→6)-β-D-Galp-(1→]，硫酸基主要位于[→4)-β-L-Arap-(1→]的C-3位；XH2S主要由[→4)-β-L-Arap3S-(1→]组成，含有微量[→4)-β-L-Arap-(1→]和[→3)-α-L-Rhap4S-(1→]，XH2S是一种结构新颖的硫酸阿拉伯糖聚糖。4.利用酸降解对多糖QHS和XH2S进行降解，经过Bio Gel P4凝胶渗透色谱柱分离，得到了不同聚合度的寡糖。QHS的降解条件为0.05mol/L HCl/100°C水浴/1.5h，得到寡糖组分P1–P8；XH2S的降解条件为0.05mol/L HCl/100°C水浴/1h，得到寡糖组分F1–F7。利用一级及二级质谱分析表明，P1–P8含有β-D-GlcpA-(1→4)-α-L-Rhap3S和α-L-Rhap3S-(1→4)-β-D-Xylp二糖结构；F1–F7为主要由[→4)-β-L-Arap3S-(1→]组成的聚合度1–5硫酸阿拉伯寡糖。获得的硫酸阿拉伯寡糖是尚未见报道的具有新型结构的海洋特征寡糖。本论文的研究成果对“海洋糖库”的建设提供了结构新颖的海洋多糖和特征寡糖，对浒苔的研究和开发利用具有重要参考价值。
赵小亮[6]2013年在《利用糖芯片研究海洋多糖及其衍生物与蛋白质的相互作用》文中研究表明本论文分别从红藻多管藻(Polysiphonia senticulosa Harv.)和日本新管藻(Neosiphonia Japonica Harv.)中提取制备11种硫酸半乳聚糖，纯化多糖组分14个，从杜梨果实、叶片和银杏果皮制备4种果胶，1种葡聚糖和1种木聚糖，制备淀粉、琼胶和卡拉胶磷酸化与氧化衍生物9种，此40种多糖均为首次获得。活性研究发现，多管藻多糖组分PS3-2能有效延长活化部分凝血酶时间(APTT)，作用效果强于阳性对照低分子量肝素(LMWH)和藻酸双酯钠(PSS)，PS3-2和日本新管藻多糖NJ1-2均能延长凝血酶时间(TT)作用，表明具有较好的抗凝血活性；杜梨果实多糖PBP清除DPPH自由基半抑制浓度(IC50)为61.37μg·mL-1，小于阳性对照VC(197.60μg·mL-1)，PBP和杜梨叶片多糖PBPF均有较好的细胞病变(CPE)抑制活性，而PBPF可能是通过与流感病毒A/PR/8/34(H1N1)神经氨酸酶(NA)相互作用而发挥抗病毒活性；银杏果皮多糖GBC和GBH有抑制肿瘤细胞生长活性，GBLA和GBHA有抑制MDA-MB-231细胞生长活性；Agarose和ι-car磷酸化与氧化衍生物对CPE的抑制率明显增强，Agarose氧化产物不仅溶解性提高，对肿瘤细胞MDA-MB-231也有一定的抑制活性，同时磷酸化衍生物对羟自由基的清除活性得到明显提高，而κ-car衍生物活性均无明显变化；通过对FGF/FGFR介导的BaF3细胞增殖活性研究发现，红藻来源的硫酸半乳聚糖PS3-0.5、PS3-1.5、NJ1-0.8、NJ1-1.4和NJ1-1.6、银杏果胶GBC和木聚糖GBHA具有极显着的促进细胞增殖的活性；磷酸化和氧化修饰可提高ι-car和κ-car对BaF3细胞的增殖活性的，同时脱硫的κ-car (dsκ-car)及脱硫后磷酸化的κ-car (pκ-car)则无细胞增殖活性，表明硫酸基对于该细胞增殖作用强于磷酸基，而Agarose及其修饰物与其分子整体骨架相同，只是空间构型有差异，推测活性的提高在受电荷作用影响的同时，分子空间构象的变化也是重要因素。通过AF或FITC标记新制备荧光标记多糖50个，结合实验室糖库荧光多糖，通过对点样条件探索，首次制备了含有64个多糖探针，16×16方阵共256个样点的海洋多糖芯片。在利用岩藻糖凝集素橘果粉胞凝集素(Aleuria aurantia lectin,AAL)与多糖芯片作用证明多糖芯片研究多糖与蛋白质相互作用可靠的基础上，进一步研究了海洋多糖与H1N1HA蛋白、NA蛋白和NS1蛋白，乙型肝炎病毒(HBV)蛋白、胰淀素(Amylin)、结缔组织生长因子(CTGF)以及α-核突触蛋白(α-Synuclein)7种疾病相关蛋白质的相互作用。结果表明，多糖分子结构对结合活性有直接影响，特别是硫酸基、糖醛酸等酸性基团对活性有重要影响，而多糖的磷酸化、氧化修饰能显着提高多糖与蛋白质的结合活性。根据芯片实验结果利用红外光谱、一维NMR和二维NMR等技术，对与H1N1HA蛋白和NS1蛋白、CTGF和α-Synuclein有较强结合活性的多糖组分PS3-2的结构进行了表征。结果表明，PS3-2是分子C6-OH被硫酸基和丙酮酸取代的琼胶型多糖，二糖重复单元以硫琼胶[→3)β-D-G6S-(1→4)-3,6-AnG(1→]为主，还含有少量的[→3)β-D-GPA-(1→4)-3,6-AnG(1→]，二者的比例约为4.2:1。通过弱酸降解质谱分析，获得了硫琼胶叁糖、五糖和七糖，并首次发现了带有Xyl侧链的硫琼胶叁糖、五糖和七糖。综上，本文从多糖样品制备、芯片构建、与蛋白质相互作用、结果检测分析、活性多糖结构解析等方面，首次成功构建了海洋多糖芯片，并运用此技术研究了海洋多糖与几种疾病相关蛋白的相互作用，明确了与相关蛋白质结合的糖的特点，并对活性多糖进行了详细结构解析，为糖芯片的构建和应用提供了技术参考。
石学连[7]2009年在《浒苔多糖的化学组分及生物学活性的初步研究》文中指出浒苔(Enteromorpha)是青岛沿海常见的一种绿藻。2008年6月份,在我国黄海海域爆发了一场大面积浒苔“绿潮”。本文研究了青岛沿海产缘管浒苔(QE)和“绿潮”浒苔(GE)的化学组成,并对其多糖的化学组成、结构及生物学活性进行了初步研究,为进一步开发利用浒苔提供实验依据。对两种浒苔主要化学组成进行了分析,QE除灰分含量明显高于GE的含量外,水分、碳水化合物、粗脂肪和粗蛋白含量均低于GE的。两种浒苔均含有丰富的氨基酸,其中含量最高的是天门冬氨酸和谷氨酸;必需氨基酸含量占总氨基酸含量的42.755%和44.989%。不饱和脂肪酸含量占总脂肪酸含量的34.156%和34.278%。结果表明浒苔是一种矿物质和蛋白含量高,脂肪含量低,必需氨基酸和必需脂肪酸含量高的优质食物资源。以水提醇沉法制备浒苔多糖,QE和GE多糖分别命名为QEP和GEP,并利用琼脂糖凝胶离子交换色谱对所得多糖进行分级纯化。高效液相色谱测定单糖组成,两种多糖均为鼠李糖-木糖-葡萄糖醛酸聚合物,其中鼠李糖含量占中性糖的67.55%和65.56%,木糖占中性糖的24.61%和19.33%。离子交换色谱分级结果表明,QEP主要由两种组分,分别为鼠李糖-木糖-半乳糖-糖醛酸聚合物和鼠李糖-木糖-糖醛酸聚合物;GEP主要组分为鼠李糖-木糖-甘露糖-糖醛酸聚合物。利用红外光谱、甲基化分析和核磁共振分析多糖QEP的结构,并利用ChemNMR软件辅助分析NMR谱图,结果表明,多糖主要有(1→2,4)-和(1→4)-连接的鼠李糖残基,(1→4)-连接的木糖残基,硫酸根主要连接在鼠李糖基3位。研究了QEP及其分级组分对超氧阴离子、羟自由基、1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)的清除作用和还原能力,结果表明各组分均具有一定的清除自由基能力,其中QEP各项清除能力均较强,且还原能力最强,具有良好的抗氧化活性。以透明质酸和甘油作为对照,研究了GEP和本实验室褐藻多糖硫酸酯(FPS)及其衍生物的保湿和吸湿能力,结果表明GEP、低分子量FPS,以及低分子量FPS的离子交换凝胶色谱分级产物均有较强的保湿和吸湿活性,且与天然活性保湿因子透明质酸的保湿和吸湿特征很相似。GEP相对透明质酸、低分子量FPS及其衍生物而言,样品制备简单,原材料来源丰富,是良好的保湿活性物质。
李红燕[8]2011年在《宽礁膜抗凝血活性多糖及其寡糖的制备和结构研究》文中认为宽礁膜是我国重要的经济海藻之一,隶属于绿藻门,绿藻纲,石莼目,礁膜科,礁膜属。目前,宽礁膜在我国人工育苗和栽培已获成功。本论文以我国人工养殖宽礁膜为研究对象,采用各种色谱分离技术,获得高抗凝血活性的宽礁膜多糖,采用化学和现代波谱方法对其结构进行研究,并对结构新颖的抗凝血多糖进行降解研究,建立可控酸降解法制备宽礁膜低分子量多糖片段及其寡糖的方法,通过核磁共振波谱和质谱技术,对获得的低分子量的糖基片段和寡糖的结构进行研究,并研究各种低分子量糖基片段对抗凝血活性的影响。研究结果如下: 1人工栽培宽礁膜藻体经冷、热水提取得到两种多糖冷水提多糖和和热水提多糖,相对于干燥藻体的得率分别为9.56%和39.1%。采用离子交换色谱和凝胶渗透色谱对热水提多糖进一步纯化,主要得到叁种多糖MAS、MBS和MCS。通过化学方法对理化性质进行测定,结果表明,MAS、MBS和MCS总糖含量分别为74.1%、68.1%和65.3%;硫酸基含量为26.1%、28.5%和31.8%;糖醛酸含量为4.44%、3.94%和3.27%;蛋白质含量较低。高效凝胶渗透色谱法测得MAS分子量较高为512.5 kDa,而MBS和MCS分子量较低,分别为58.4 kDa和48.5 kDa;气相色谱法测得MAS、MBS和MCS以鼠李糖为主,还含有少量的葡萄糖、木糖、甘露糖和半乳糖等。经红外光谱、脱硫反应、甲基化反应和核磁共振波谱(1D,2D NMR)分析表明,MAS、MBS和MCS结构比较相似,主要由[→3)-α-L-Rhap-(1→]、[→2)-α-L-Rhap-(1→]和[→2,3)-α-L-Rhap-(1→]组成,但摩尔比例不同,硫酸基团主要位于[→3)-α-L-Rhap-(1→]的C-2位和[→2)-α-L-Rhap-(1→]的C-3位。多糖MAS、MBS和MCS中主要含有四种硫酸鼠李二糖结构单元: [→3)-α-L-Rhap(2SO_4)-(1→3)-α-L-Rhap→]、[→3)-α-L-Rhap(2SO_4)-(1→2)-α-L-Rhap→]、[→3)-α-L-Rhap-(1→2)-α-L-Rhap(3SO_4)→]和[→3)-α-L-Rhap(2SO_4)-(1→2,3)-α-L-Rhap→]。通过APTT、PT和TT对多糖MAS、MBS和MCS的抗凝血活性进行评价,得到抗凝血活性较好结构新颖的硫酸鼠李聚糖。2采用硫酸降解的方法,将多糖MAS降解为不同分子量的多糖。通过相对黏度法、高效薄层色谱法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法和高效凝胶渗透色谱法对降解条件进行优化。采用0.1 mol/L H_2SO_4在40℃水解75 min和80℃水解60 min对多糖MAS进行降解,制备得到分子量在405.0~5.1 kDa的七种多糖(MAS1~MAS7)。研究表明,七种多糖的理化性质、单糖组成和红外光谱特征均与母多糖MAS相似。以抗凝血活性高且温和的低分子量多糖MAS5为代表,通过甲基化反应和1D,2D NMR分析表明,MAS5由[→3)-α-L-Rhap-(1→]、[→2)-α-L-Rhap-(1→]和[→2,3)-α-L-Rhap-(1→]组成,叁者摩尔比为4:1:1,硫酸基团位于[→3)-α-L-Rhap-(1→]的C-2位和[→2)-α-L-Rhap-(1→]的C-3位。MAS5结构与母多糖MAS相似,即酸降解后多糖主体结构没有发生改变。通过活化部分凝血酶时间(APTT),对多糖MAS及其降解产物MAS1~MAS7的抗凝血活性进行了评价。结果表明,多糖随着分子量的减小,抗凝血活性减弱。分子量对宽礁膜多糖抗凝血活性具有较大的影响,其抗凝血活性依赖于一定长度的糖链。3多糖MAS通过0.1 mol/L H_2SO_4于80℃水解3 h,Bio-Gel P4凝胶渗透色谱分离纯化,得到寡糖组分O1~O8。通过ES-MS对寡糖组分的聚合度、单糖组成和纯度进行了分析。结果表明,硫酸鼠李寡糖聚合度(DP)在2~9之间。采用1D,2D NMR对纯度较高的硫酸鼠李二糖结构进行研究,确定其结构为α-L-Rhap(2SO_4)-(1→3)-α-L-Rhap。通过对硫酸鼠李二糖ES-CID-MS/MS断裂碎片的分析和归属,建立了硫酸鼠李寡糖负离子模式下二级质谱序列分析方法,并将此方法用于聚合度为3~9的硫酸鼠李寡糖的结构研究。结果表明,制备得到的硫酸鼠李寡糖均为[→3)-α-L-Rhap-(1→]连接的直链结构。这些硫酸鼠李寡糖为具有新型结构的海洋特征寡糖,目前国内外尚未有关硫酸鼠李寡糖的报道。本论文的研究成果,对宽礁膜多糖的研究和开发、对“海洋糖库”的建设以及发展具有我国特色的海洋药物具有重要的学术价值和经济意义。
崔玉兰[9]2011年在《浒苔多糖的提取分离及结构表征》文中研究指明浒苔(Enteromorpha prolifera)是一种大型海洋绿藻,在我国沿海一带均有自然生长,资源十分丰富,多被人们用作食品、饲料和肥料等。据国内外许多相关研究报道,浒苔具有很高的营养价值和药用价值。因此本文就浒苔多糖的提取、分离纯化、相对分子量分布、单糖组成及其保湿活性进行了初步研究。采用国标法测定原料的基本组分表明,冷冻干燥后的浒苔粉的基本化学组成为:总糖53.64%、粗蛋白10.21%、粗脂肪1.02%、灰分25.87%、水分5.25%。采用超声波辅助水提法提取浒苔多糖,主要研究了水提时间、水提温度、超声时间和超声功率对多糖得率的影响,并通过单因素实验初步确定了各影响因素的最佳水平;然后在单因素试验的基础上采用叁因素叁水平的响应面分析法,进一步优化提取工艺,研究并探讨了水提温度、超声波破碎时间、超声功率的最佳水平及交互作用,根据回归分析的结果得出浒苔多糖的最佳提取工艺为:提取温度91.5℃,超声功率625 W,超声时间26 min时,浒苔多糖的得率达到14.52%。本章采用叁氯乙酸法对脱蛋白的条件进行了优化,实验结果表明:当叁氯乙酸(TCA)终浓度为3%且沉淀蛋白的时间为2 h时,除蛋白效果最佳。利用DEAE cellulose-52阴离子交换柱对浒苔粗多糖进行了初步纯化,其中经去离子水洗脱后得两个主要级分SP-Ⅰ和SP-Ⅱ,得率分别为16.65%和10.08%;后经0.3 mol/L的NaCl洗脱得到组分SP-Ⅲ,得率为72.12%。利用Sephadex G-100凝胶柱对叁个组分进一步纯化,分别得到纯化后组分SPP-Ⅰ、SPP-Ⅱ和SPP-Ⅲ。采用高效凝胶过滤色谱法、PMP柱前衍生HPLC法分别对SPP-Ⅰ、SPP-Ⅱ和SPP-Ⅲ叁种组分的化学组成和结构进行探讨。实验结果表明:SPP-Ⅰ、SPP-Ⅱ和SPP-Ⅲ的分子量分别为5.21×10~5、7.94×10~3、4.53×10~4。SPP-Ⅰ的单糖组成比为D-果糖:L-山梨糖为1.00:4.82;SPP-Ⅱ的单糖组成比为D-果糖:甘露糖:D-半乳糖为1.00:20.63:2.5;SPP-Ⅲ的单糖组成比为D-木糖:D-阿拉伯糖:D-葡萄糖为1.00:1.43:0.62。本实验提取的浒苔多糖具有良好的保湿活性,实验以甘油和丙二醇为对照,对浒苔多糖的保湿活性进行了相关研究,研究结果表明:RH为40%时,浒苔多糖吸湿率和保湿率均高于甘油和丙二醇,显示出良好的保湿效果,且不受环境湿度影响。
宋琳[10]2016年在《几种大型海藻硫酸多糖免疫相关活性及转录组学研究》文中提出我国大型海藻资源丰富,从海藻中提取活性物质,研究其生物活性,开发高值化产品,使其更好的服务于人类健康和经济发展,是建设海洋强国的重要内容,也是世界沿海各国追求的目标。本文以六种常见的大型藻类为原料,分别是红藻门(Rhodophyta)的蜈蚣藻(Grateloupia filicina)、麒麟菜(Eucheuma spinosum),绿藻门(Chlorophyta)的浒苔(Enteromorpha prolifera)、孔石莼(Ulva pertusa),以及褐藻门(Phaeophyta)的海带(Laminaria japonica)、马尾藻(Sargassum Pallidum),提取了各种海藻的硫酸多糖,对其总糖含量、单糖组成、硫酸根含量、分子结构以及生物活性(体内和体外实验)进行了研究与比较。筛选出免疫调节活性最强的马尾藻硫酸多糖,对其进行了分离纯化和衍生物制备,对产物的单糖组成、硫酸根含量、结构及体外抑制肿瘤细胞生长的活性进行了研究,并通过转录组测序技术对其作用的分子机理进行了探究。主要研究结果如下:1、利用热水浸提法提取了六种海藻硫酸多糖,化学性质分析发现不同的海藻硫酸多糖理化性质各不相同。其中总糖含量最高的是麒麟菜,高达63.11%。六种海藻中,褐藻总糖含量略低于红藻及绿藻多糖。硫酸根含量最高的是麒麟菜多糖,为21.35%。红藻(蜈蚣藻和麒麟菜)多糖中硫酸根含量相对于褐藻(马尾藻和海带)多糖中要高,绿藻多糖中硫酸根含量则介于红藻与褐藻之间。绿藻中单糖含量最高的是鼠李糖,红藻中单糖含量最高的是半乳糖,而褐藻中含量最高的单糖是岩藻糖。另外,即使属于同一门类的海藻,它们的单糖组成也各不相同。红外光谱检测表明,六种硫酸多糖具有几个相同的吸收峰,但也各有不同,说明它们的结构各不相同。2、对六种海藻硫酸多糖的体外免疫调节活性及与其相关的抗病毒活性进行了研究,发现六种海藻硫酸多糖均能显着增强小鼠脾淋巴细胞增殖,也可以降低病毒的血凝效价。3、采用灭活的禽流感H9N2病毒作为免疫刺激剂,对筛选出的红藻蜈蚣藻硫酸多糖、绿藻孔石莼硫酸多糖以及褐藻马尾藻硫酸多糖的体内免疫调节活性进行了研究,发现叁种多糖均能显着增强禽流感病毒特异性抗体的产生并且增强体液免疫水平,其中50 mg/kg的蜈蚣藻硫酸多糖和50 mg/kg的马尾藻硫酸多糖效果最好;刺激免疫相关细胞因子的表达实验中,多糖实验组可以显着提高免疫相关的细胞因子IFN-γ和IL-4表达水平;海藻硫酸多糖对T淋巴细胞亚群具有调节作用,均能显着提高CD3+和CD4+的水平,但只有马尾藻硫酸多糖对CD3+CD8+具有显着刺激效果。实验结果表明,马尾藻硫酸多糖的免疫增强效果最显着,可能是与其丰富的岩藻糖含量有关。4、体外抗病毒活性研究表明,叁种海藻硫酸多糖均能显着抑制禽流感病毒H9N2的复制,其中蜈蚣藻硫酸多糖效果最为显着,这与其硫酸根含量是一致的。对不同的抗病毒方式进行了比较,分别是阻断作用、抑制作用以及直接杀灭作用,其中直接杀灭作用总体效果略低于阻断作用和抑制作用。说明多糖对病毒有一定的直接杀灭作用,但是效果比阻断作用和抑制作用低。这说明海藻多糖的抗病毒机理与现有药物是不同的。5、对马尾藻硫酸多糖进行分离纯化,得到了0.5M、1M和2M叁个组分,对它们的理化性质及体外抑制肿瘤细胞活性进行了分析,结果表明,2M组分体外抑制肿瘤细胞活性最高,可以显着诱导Hela细胞凋亡。为了研究海藻多糖抑制肿瘤细胞生长的分子机制,通过转录组测序技术(RNA-Seq)分析了马尾藻硫酸多糖对Hela肿瘤细胞转录的影响。分析表明,2M组分的添加可以提高凋亡相关基因的表达,如NFBKIA、Caspase基因;而抑制凋亡相关的基因,如NF-k B,THBS1则发生了下调表达。GO和KEGG分析表明,2M组分的添加可以显着影响肿瘤细胞的增殖活性,表现为与抑癌相关基因的表达上调,核糖体活性和层粘连蛋白结合相关的基因分类(GO)明显下调表达,而与翻译终止和mRNA代谢相关的生物通路(KEGG)下调显着。结果表明,马尾藻硫酸多糖2M组分的添加可以显着降低Hela肿瘤细胞的活性,表现为生长水平降低、凋亡水平上升;转录组结果与实验结果相符,一些促进细胞凋亡、抑制细胞分化及代谢相关的基因/通路被推测是其抗肿瘤的分子机制。6、为了研究衍生化对活性的影响和探讨活性机理,对马尾藻硫酸多糖进行了衍生化,共得到了硫酸化、乙酰化、磷酸化、苯甲酰化以及胺化五种衍生物,研究了它们体外抑制肿瘤细胞的活性,发现乙酰化衍生物体外抑制肿瘤细胞活性最高,可以显着诱导Hela细胞凋亡。通过转录组测序技术分析了添加马尾藻多糖乙酰化衍生物后Hela肿瘤细胞的转录组变化情况。结果发现,马尾藻硫酸多糖乙酰化衍生物的添加可以显着降低Hela肿瘤细胞的活性,表现为生长水平降低、凋亡水平上升;转录组结果表明乙酰化衍生物可以显着提高肿瘤细胞抑癌、凋亡、免疫、骨架调控等相关基因/通路的表达,以及降低核糖体活性相关、代谢相关、氧化磷酸化等相关基因/通路的表达。以实时荧光定量PCR验证了转录组所得到的结果,证明转录组获得的结果是准确、可信的。转录组结果与体外实验的结果相符,进一步阐述了乙酰化衍生物抑制肿瘤细胞分化的分子机理。
参考文献：
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[5]. 浒苔多糖的结构及寡糖研究[D]. 齐晓辉. 中国海洋大学. 2012
[6]. 利用糖芯片研究海洋多糖及其衍生物与蛋白质的相互作用[D]. 赵小亮. 中国海洋大学. 2013
[7]. 浒苔多糖的化学组分及生物学活性的初步研究[D]. 石学连. 中国科学院研究生院（海洋研究所）. 2009
[8]. 宽礁膜抗凝血活性多糖及其寡糖的制备和结构研究[D]. 李红燕. 中国海洋大学. 2011
[9]. 浒苔多糖的提取分离及结构表征[D]. 崔玉兰. 福建农林大学. 2011
[10]. 几种大型海藻硫酸多糖免疫相关活性及转录组学研究[D]. 宋琳. 中国科学院大学(中国科学院海洋研究所). 2016