吴东海黄震刘圣活（广东省深圳市龙岗中心医院518116）
【中图分类号】R730.4【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)26-0087-03
【摘要】目的探讨CD44V6、MMP-14的表达与胃癌浸润转移的关系及其意义。方法通过免疫组化方法,用CD44V6、MMP-14的单克隆抗体,以S-P染色法检测CD44V6、MMP-14在62例胃癌、62例癌旁组织及10例正常胃黏膜中的表达情况。结果CD44V6、MMP-14在胃癌组织中的表达分别为59.7%(37/62)、58.1%(36/62),癌旁组织中的表达分别为35.5%(22/62)、38.7%(24/62),正常胃黏膜中的表达为0%(0/10)。组间x2检验胃癌与正常胃黏膜、胃癌与癌旁组织CD44V6、MMP-14表达差异均显著P<0.05。结论CD44V6、MMP-14在胃癌组织中的异常表达与其浸润转移密切相关,CD44V6、MMP-14的高表达可能会有助于胃癌的临床诊断,筛选具有转移潜能的肿瘤,成为预测肿瘤转移潜能的新指标。
【关键词】MMP-14CD44V6蛋白胃癌浸润转移
肿瘤的浸润与转移是恶性肿瘤的生物学特征之一，其浸润转移包括粘附、降解和移动的序贯连续的过程，与粘附分子、降解酶类、瘤细胞运动及其受体等因素密切相关。CD44V6就是目前研究较多的一类细胞粘附分子，广泛分布于各种组织细胞中，主要参与细胞—细胞、细胞—基质之间的特异性粘附和细胞转移过程，从而影响癌细胞的浸润与转移。金属蛋白酶（matrixmetalloproteinases,MMPs）能降解ECM中的各种蛋白成分和基底膜中Ⅳ型胶原，与肿瘤的侵袭、转移密切相关。为了探讨CD44V6、MMP-14的表达与胃癌浸润转移的关系,我们进行了如下研究。
1材料与方法
收集我院2007年2月到2009年12月手术切除并经病理证实为胃癌的62例胃癌标本,同时在距离癌旁5cm处取材与正常胃黏膜组织10例作为对照。所有患者术前均未接受放疗和化疗,其中男40例,女22例。中位年龄53岁32～79岁。
1.2研究方法
将石蜡包埋标本制成4μm厚连续切片。免疫组化染色使用二步法,CD44V6和MMP-14单克隆抗体（即用型）及第二代通用型二步法检测系统（pv-9000）购自北京中杉金桥生物技术限公司。MMP-14CD44V6在胞浆中呈黄色至深棕色颗粒显色。染色结果按细胞染色强度和染色细胞所占面积二者积分之和来判断。染色强度积分为：不染色=0,轻度染色=1,中度染色=2,强染色=3;染色面积积分为:无细胞染色=0,<25%细胞染色=1,25%～50%细胞染色=2,>50%细胞染色=3。若2种积分之和>2,则为阳性表达,≤2则为阴性表达。
1.3结果判断标准
CD44V6和MMP-14阳性判断标准：阳性染色者在细胞膜或（和）浆中有棕黄色颗粒沉着。根据免疫阳性细胞染色程度（A）：无染色为0分;细胞膜或浆内见淡黄色颗粒,明显高于背景为1分;较多棕黄色颗粒为2分;大量深棕黄色颗粒为3分。每片随机观察5个视野,计数500个细胞中染色阳性细胞数B：阳性细胞数<5%为0分,5%～25%为1分,26%～50%为2分,>50%为3分。A与B相乘为其最后得分,得0～1分者为阴性（-）,2～3分为阳性（+）,4分及4分以上为强阳性（++）。
1.4统计学处理统计分析采用χ2检验。
2结果
2.1CD44V6、MMP-14表达，组间χ2检验胃癌与正常胃黏膜、胃癌与癌旁组织表达差异均有显著性(P<0.05),见表1。
表1CD44V6、MMP-14在胃癌、癌旁组织及正常胃黏膜中的表达
。
注:P﹡<0.05
3讨论
肿瘤细胞的浸润及转移与肿瘤细胞的运动、黏附，基底膜及细胞外基质的降解等多种机制相关。CD44是位于人类第11号染色体短臂上的基因所编码的细胞黏附分子，是分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白。CD44作为淋巴细胞的归巢受体和透明质酸酶的主要受体，能连接细胞外基质中的纤维连接蛋白、层黏蛋白、I型胶原和透明质酸分子以及骨架蛋白相结合，参与细胞的伪足形成，引起细胞形态和游走性改变；作为粘附分子的一种，其主要功能是参与细胞—细胞、细胞—基质之间的特异性粘附过程。研究表明CD44有两种类型，即标准型CD44(CD44S)和变异型CD44(CD44V)。CD44S几乎存在于所有的正常细胞，而CD44V至少有10个亚型(V1～V10)。不同类型的CD44v蛋白具有不同的配体结合特性，其中CD44v6是一类具有高度异质性的单链膜表面糖蛋白，其肽链位于细胞外区靠近跨膜区部位，能与层黏连蛋白和IV型胶原结合，且易与毛细血管后小静脉中的高柱状内皮细胞结合，使肿瘤更易进入淋巴系统及循环系统，从而赋予许多类型肿瘤细胞的浸润转移能力[1]。CD44V6与肿瘤浸润转移的相关性研究在1991年由Gunthert[2]用单克隆技术首先在大鼠胰腺癌组织中得到证实，发现CD44V6仅在发生浸润转移的肿瘤细胞株中表达，Matsumura[3]也证实CD44V6在肿瘤组织中特别是发生浸润转移的原发癌组织中有异常表达。国内研究也显示CD44v6与肝癌、乳腺癌及肺癌等多种恶性肿瘤的浸润及转移密切相关[4-6]。
基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)是由多种锌离子依赖性酶组成的能降解细胞外基质蛋白的酶系家族，膜型金属蛋白酶MMP-14是MMPs家族中的一种特殊蛋白酶，MMP-14可降解Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ型胶原和纤维连接蛋白FN，参与包括基膜等细胞外基质降解过程，还可以通过激活基质金属蛋白酶MMP-2酶原，活化MMP-2进一步增强其降解作用[7]。而MMP-14在宫颈癌、乳腺癌及喉癌中的表达与肿瘤的分期、分化及淋巴结转移情况呈正相关[8-10]。
本组研究中，MMP-14与CD44v6在正常胃黏膜组织及胃癌中的表达差异有统计学意义(P<0.05)，说明恶性肿瘤细胞的黏附与降解基底膜和细胞外基质的能力强于正常组织。同时CD44v6阳性组胃癌中的MMP-14阳性表达率高于CD44v6阴性组，差异有统计学意义(P<0.05)提示肿瘤的浸润与转移过程中，肿瘤细胞对基底膜和细胞外基质的降解可能与其特异性黏附能力相关。以上结果显示CD44v6及MMP-14可以作为临床上判断胃癌预后的指标，胃癌中CD44v6及MMP-14中表达的检测，对胃癌侵袭性和预后的评估有实际的临床意义。
参考文献
[1]RudyW,HofmannM,Schwartz-AlbiezR，etal.ThetwomajorCD44proteinsexpressedonametastaticrattumorcelllinearederivedfromdifferentsplicevariants:eachoneinpiduallysufficestoconfermetastaticbehavior.CancerRes,1993,53(6):1262-1268.
[2]GunthertU,HofmannM,RudyW,etal.AnewvariantofglycoproteinCD44confersmetastaticpotentialtoratcarcinomacellsJ.Cell,1991,65(1):13.
[3]MatsumuraY,TarinD.SignificanceofCD44geneproductsforcancerdiagnosisanddiseaseeevaluationJ.Lancet,1992,340(8872):1053.
[4]张克兰,王志明,魏尚典,等.CD44v6,c-Met在原发性肝癌中的表达及其临床意义.中国普通外科杂志,2008,17(1):94-97.
[5]李增才,俞永忠,许正昌.VEGF和CD44表达与乳腺癌分期的相关性研究.现代肿瘤医学,2007,15(9):1249-1251.
[6]刘波,金秀国,刘晓光,等.肺癌组织CD44、CD71的检测及与病理学的关系.实用肿瘤学杂志,2006,20(4):268-270.
[7]杜月光,陈慰浙.基质金属蛋白酶在胃肠癌中的表达及其抑制剂的研究进展.中国癌症杂志,2002,12(1):81-84.
[8]刘冬玲,李娜萍.MMP-14、VEGF、E-cadherin与子宫颈癌生物学行为的相关性研究.华中科技大学学报医学版,2006,35(6):774-777.
[9]姚广裕,林鹏,王军业,等.MMP-14在乳腺癌中的表达及临床意义.肿瘤防治研究,2005,32(5):268-270.
[10]刘业海,唐平章,刘芝华,等.基质金属蛋白酶14基因在人喉鳞状细胞癌中表达差异的分析.中华耳鼻咽喉科杂志,2004,39(8):501-506.