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人HSPA8基因生物信息学分析及亚细胞定位

2020-12-05阅读(314)

人HSPA8基因生物信息学分析及亚细胞定位

论文摘要

探究人HSPA8基因生物信息学分析与亚细胞定位。利用用RT-PCR方法扩增HSPA8基因CDS区,利用生物信息学工具对其理化性质、二级结构、三级结构进行分析并构建其遗传进化树。运用酶切、连接等方法构建重组真核表达载体pEGFPC1-HSPA8,转染HEK-293T细胞,采用荧光共定位的方法观察其亚细胞定位。成功克隆人HSPA8基因CDS区,生物信息学分析结果显示:人HSPA8基因CDS区全长1 941 bp,分子式为C3111H4998N860O994S17,相对分子量为70.89 kD,共编码646个氨基酸;二级结构预测显示HSPA8蛋白以α-螺旋（占41.64%）和无规则卷曲（32.20%）为主;HSPA8核苷酸同源性及遗传进化树分析表明人与黑猩猩亲缘关系最近。荧光共定位结果显示HSPA8蛋白均匀分布于整个细胞。HSPA8蛋白的生物信息学分析及亚细胞定位研究为进一步探究HSPA8基因胞内功能奠定基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 菌株、载体及细胞
  •     1.1.2 试剂与仪器
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 引物设计
  •     1.2.2 HSPA8基因的克隆
  •       1.2.2. 1 总RNA的提取与目的基因的扩增
  •       1.2.2. 2 pMD-19-HSPA8亚克隆载体的构建
  •     1.2.3 HSPA8基因的生物信息学分析
  •     1.2.4 pEGFP-C1-HSPA8重组真核表达载体的构建
  •     1.2.5 pEGFP-C1-HSPA8真核表达载体在HEK-293T细胞中的表达及亚细胞定位
  • 2 结果
  •   2.1 pMD-19-HSPA8亚克隆载体鉴定结果
  •   2.2 生物信息学分析结果
  •     2.2.1 人HSPA8蛋白理化性质分析
  •     2.2.2 HSPA8蛋白二级结构分析结果
  •     2.2.3 HSPA8蛋白三级结构分析结果
  •     2.2.4 人HSPA8基因遗传进化分析
  •     2.2.5 与HSPA8相互作用的蛋白
  •     2.2.6 HSPA8蛋白的亚细胞定位预测
  •   2.3 pEGFP-C1-HSPA8重组质粒鉴定结果
  •   2.4 荧光共定位检测HSPA8蛋白在细胞中的定位
  • 3 讨论
  • 4 结论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 吴小敏,赵佳福,倪锴,朱晓峰,许厚强

    关键词: 基因克隆,生物信息学,亚细胞定位

    来源: 生物技术通报 2019年11期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 生物学

    单位: 贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室,贵州大学动物科学学院

    基金: 国家自然科学基金项目（31860242）,教育部中国与美大,欧洲地区教育科研合作项目（教财司函[2017]860号）,贵州大学培育项目（黔科合平台人才[2017]5788-20）

    分类号: Q78

    DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0472

    页码: 82-88

    总页数: 7

    文件大小: 3943K

    下载量: 271

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