木香花抗黑斑病基因RbRdr1的克隆及表达分析

论文摘要

月季黑斑病是月季露地栽培的第一大病害。是世界性的病害,发生普遍且严重,较难防治,其病原菌为蔷薇盘二孢（Marssoninarosae）。伴随着月季定向选育工作的开展,其病原菌易产生各类生理小种,导致月季的抗病性逐渐变弱;目前,喷施化学药剂的方法可以用来预防和抑制病原菌的产生,但化学药剂的大量使用不仅增加了生产成本,还会导致生态环境的恶化。分子生物学的深入发展,使得从植物本身去寻找抗逆性变为可能。木香花为优质的野生资源,是高抗黑斑病种。本研究以木香花为研究对象,采用TA克隆法和RACE技术,获得抗黑斑病基因RbRdr1全长序列,并对其进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR法对该基因在木香花的不同组织部位,以及木香花成熟叶片受黑斑病菌侵染不同时期的时空表达进行分析。主要研究结果如下:1.克隆获得1个全长基因,为3462bp。其包含了 1个33bp的5’-UTR,1个3396bp的ORF,1 个33bp的3’-UTR,将其命名为RbRdr1 GenBank注册号MK584935。2.该基因的亚细胞定位于线粒体及过氧化物酶体,不具有信号肽及跨膜结构域,a-螺旋及无规卷曲为主要二级结构。氨基酸同源序列多重比对发现,木香花RbRdr1与野蔷薇和玫瑰具有较高的同源性,其中与野蔷薇同源性为86%,玫瑰同源性为84%。3.通过实时荧光定量PCR对RbRdr1在木香花不同组织部位,以及木香花成熟叶片受黑斑病菌侵染不同时期的时空表达进行分析。结果显示,在不同的组织部位中RbRdr1的表达量差异显著,在幼叶和成熟叶中的相对表达量较高,在根、茎及花瓣中的相对表达量较低。该候选基因在受黑斑病菌侵染不同时期,其相对表达量均诱导积极上调,且在6h最高。这表明该候选基因可能参与了早期寄主——黑斑病菌的互作过程。该研究结果为进一步研究和利用蔷薇属抗黑斑病基因奠定了基础。

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文章来源

类型: 硕士论文

作者: 张真建

导师: 唐开学

关键词: 木香花,基因克隆,黑斑病,生物信息学分析,实时定量

来源: 云南大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,生物学,植物保护,园艺

单位: 云南大学

分类号: S436.8;Q943.2

总页数: 60

文件大小: 4456K

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