多食鞘氨醇杆菌和粘着剑菌对己唑醇的降解研究

多食鞘氨醇杆菌和粘着剑菌对己唑醇的降解研究

论文摘要

己唑醇是一种我国广泛使用的三唑类杀菌剂,具有广谱、高效的特点,主要用于防治水稻纹枯病、小麦白粉病和番茄灰霉病等。己唑醇在环境中具有较高的稳定性、不容易被分解,且具有发育毒性和潜在的致癌性,因此,己唑醇的存在对环境构成一定的风险。多食鞘氨醇杆菌B-3和粘着剑菌E-3为本实验室中筛选得到的己唑醇高效降解菌,前期已对多食鞘氨醇杆菌B-3进行了降解特性和降解途径的研究,而粘着剑菌E-3为新筛选出来的己唑醇降解菌,因此本文以多食鞘氨醇杆菌B-3和粘着剑菌E-3为研究对象,分别对多食鞘氨醇杆菌B-3降解己唑醇的机理、多食鞘氨醇杆菌B-3在土壤中的模拟应用以及粘着剑菌E-3对己唑醇的降解特性进行了研究,为己唑醇的生物修复提供基础数据,具体结论如下:(1)应用从头测序对多食鞘氨醇杆菌B-3的全基因组进行了全扫描测序,结果表明,多食鞘氨醇杆菌含有5523个基因,基因总长度为5394999 bp,占基因组的88.26%,在基因区中,GC含量为41.11%。然后,分别对基因进行NR、COG、GO和KEGG注释,将该基因组作为转录组数据分析的参考基因组。(2)使用RNA测序对己唑醇处理组和溶剂对照组间多食鞘氨醇杆菌B-3进行转录组测序。结果显示:在处理组与对照组之间一共有864个差异基因,其中有337个上调基因,527个下调基因。GO分析表明,差异基因主要集中在催化活性、结合蛋白、代谢过程和膜部分。KEGG分析表明,差异基因主要集中于代谢,其中主要包括碳水化合物代谢、能量代谢和氨基酸代谢。通过对差异基因的深入挖掘,发现在多食鞘氨醇杆菌B-3中,醛脱氢酶和单加氧酶显著上调表达,而多食鞘氨醇杆菌B-3可以使己唑醇氧化生成2-(2,4-dichlorophenyl)-1-(1H-1,2,4-triazol-1-yl)hexane-2,5-diol,该反应则可能由于单加氧酶的参与。同时,与有毒物质代谢和排毒相关的RND转运蛋白和ABC转运蛋白也出现了上调表达,这些基因可能与己唑醇的降解有关。(3)研究了多食鞘氨醇杆菌B-3在土壤中对己唑醇的降解,结果表明,土壤微生物对己唑醇的降解有很大程度的影响,添加的多食鞘氨醇杆菌B-3可以与土壤中微生物协同作用,促进土壤中己唑醇的降解。在自然土中,己唑醇的降解半衰期为138.6 d,添加降解菌的自然土中,己唑醇的的半衰期为77.0 d;添加降解菌的灭菌土中,己唑醇的半衰期为346.5 d,而在不添加降解菌的灭菌土中,己唑醇基本没有降解。(4)在多食鞘氨醇杆菌B-3培养过程中,发现了一株对己唑醇有降解活性的粘着剑菌,是一株可以固氮和促进植物生长的根际细菌。优化了粘着剑菌E-3对己唑醇的降解条件,结果表明,在温度为30℃,pH为6.0,初始接种量为0.2 g/L和己唑醇的初始浓度为50 mg/L时,粘着剑菌E-3对己唑醇降解率最高,7 d内降解率为74.7%,半衰期为3.6 d。

论文目录

  • 摘要
  • abstract
  • 英文缩略表
  • 第一章 引言
  •   1.1 降解目标物己唑醇概况
  •     1.1.1 己唑醇简介
  •     1.1.2 己唑醇的风险及修复研究现状
  •   1.2 多食鞘氨醇杆菌
  •   1.3 粘着剑菌
  •   1.4 组学技术在生物修复中的应用
  •     1.4.1 基因组学在生物修复中的应用
  •     1.4.2 转录组学在生物修复中的应用
  •   1.5 课题目的及意义
  • 第二章 己唑醇降解菌多食鞘氨醇杆菌基因组分析
  •   2.1 材料
  •     2.1.1 供试材料
  •     2.1.2 化学试剂
  •     2.1.3 仪器与设备
  •     2.1.4 培养基
  •   2.2 试验方法
  •     2.2.1 多食鞘氨醇杆菌B-3 培养及生长曲线的测定
  •     2.2.2 DNA提取
  •     2.2.3 文库构建及上机测序
  •     2.2.4 数据分析
  •   2.3 结果与讨论
  •     2.3.1 多食鞘氨醇杆菌B-3在LB培养基中的生长曲线
  •     2.3.2 测序数据质控和基因组组装
  •     2.3.3 基因预测
  •     2.3.4 基因功能注释
  •   2.4 本章小结
  • 第三章 己唑醇降解菌多食鞘氨醇杆菌转录组分析
  •   3.1 材料
  •     3.1.1 供试材料
  •     3.1.2 化学试剂
  •     3.1.3 仪器设备
  •     3.1.4 培养基
  •     3.1.5 己唑醇检测方法
  •   3.2 试验方法
  •     3.2.1 样品制备
  •     3.2.2 RNA的提取
  •     3.2.3 文库构建及上机测序
  •     3.2.4 数据分析
  •   3.3 结果与讨论
  •     3.3.1 数据质控和序列比对
  •     3.3.2 差异基因结果
  •     3.3.3 聚类分析
  •     3.3.4 差异基因GO注释分类统计和富集分析
  •     3.3.5 差异基因KEGG注释分类统计
  •     3.3.6 降解相关差异基因分析
  •   3.4 本章小结
  • 第四章 己唑醇降解菌多食鞘氨醇杆菌在土壤中的模拟应用
  •   4.1 材料与方法
  •     4.1.1 化学试剂
  •     4.1.2 仪器设备
  •     4.1.3 培养基
  •     4.1.4 己唑醇检测方法
  •     4.1.5 试验方法
  •   4.2 结果与讨论
  •   4.3 本章小结
  • 第五章 粘着剑菌的发现及对己唑醇的降解特性研究
  •   5.1 材料与方法
  •     5.1.1 试剂
  •     5.1.2 仪器设备
  •     5.1.3 己唑醇检测方法
  •     5.1.4 培养基
  •     5.1.5 试验方法
  •   5.2 结果与讨论
  •     5.2.1 菌种鉴定
  •     5.2.2 粘着剑菌E-3 对己唑醇降解条件的优化
  •     5.2.3 粘着剑菌对己唑醇降解动力学和降解曲线
  •   5.3 本章小结
  • 第六章 结论与展望
  •   6.1 主要结论
  •   6.2 创新点
  •   6.3 展望
  • 参考文献
  • 附录
  • 致谢
  • 作者简历
  • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 安小康

    导师: 徐军

    关键词: 多食鞘氨醇杆菌,粘着剑菌,转录组,己唑醇,微生物降解

    来源: 中国农业科学院

    年度: 2019

    分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

    专业: 生物学,环境科学与资源利用,环境科学与资源利用

    单位: 中国农业科学院

    分类号: X172;X53

    总页数: 69

    文件大小: 6601K

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