副猪嗜血杆菌的分离鉴定及菌体灭活苗的研制

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及菌体灭活苗的研制

论文摘要

为了查明导致北疆地区部分规模化猪场疑似副猪嗜血杆菌病的病原及其生物学特性。方法:采集来源于不同地区规模化猪场病死猪的病料,包括肺脏、淋巴结和关节积液等;选择TSA培养基培养,采用10%CO2兼性厌氧条件对细菌分离,根据该菌的16S rRNA来设计引物,采用PCR方法对分离株进行鉴定,然后观察其培养、生理生化、血清学和药敏特性,最后观察分离株对小鼠的致病性。为提高候选株的培养效率,掌握候选株的生长特性,为疫苗菌株的制备提供理论依据。本试验选择基于OD值连续测定的活菌计数法,将候选株接种于TSB培养基上,置于10%CO2培养,对该菌株的OD600值进行测定。鉴于副猪嗜血杆菌血清型众多,商品化疫苗尚未全部覆盖。本试验以不同血清型的菌株作为候选菌株,进行扩大培养,制备菌体灭活苗,同时对该疫苗的物理性状、安全性和免疫保护力进行评价。结果:总共从174份病料中分离到31株分离株,其生理生化、培养及分子特征均符合副猪嗜血杆菌的特性;且分离株的血清型包括1、4、5、12四种;分离株副猪嗜血杆菌对庆大霉素、磺胺异噁唑、土霉素、头孢噻肟、林可霉素和氟苯尼考的耐药率分别为:35%、44%、26%、11%、48%和21%,为进一步控制该地区副猪嗜血杆菌病提供了理论基础;小鼠感染实验结果显示:67%的HPS分离株的致病力较强,可导致实验小鼠死亡;对分离株HZG-6的生长曲线测定结果表明:分离株HZG-6在1621小时内菌液的OD600值迅速升高,并在21 h时达到最大值,然后呈下降趋势。结果揭示,此菌作为疫苗候选种子进行扩大培养的最佳收菌时间为培养后的第21 h。筛选分离株HZG-6(5型)、HZG-11(1型)、HZG-26(12型)这3株不同血清型的分离株,制备副猪嗜血杆菌菌体三价灭活苗。对该疫苗的物理性状和安全性检测,结果显示各性状良好,该疫苗免疫前后的抗体值有明显变化,该疫苗有一定的保护率。结论:本研究共分离31株副猪嗜血杆菌。其中,81%的菌株对环丙沙星、洛美沙星和头孢类药物敏感,制备的三价菌体灭活苗具有一定的保护率。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 缩略词(Abbrevintion)
  • 文献综述
  •   1 病原学介绍
  •   2 流行病学
  •   3 毒力
  •     3.1 荚膜
  •     3.2 脂多糖(LPS)
  •     3.3 外膜蛋白(OMP)
  •     3.4 菌毛
  •     3.5 转铁蛋白
  •     3.6 酶类
  •   4 致病机理及病理变化
  •   5 诊断方法
  •     5.1 分离鉴定
  •     5.2 血清学鉴定
  •     5.3 PCR技术
  •     5.4 生物学方法
  •   6 防制
  •     6.1 饲养管理
  •     6.2 疫苗接种
  •     6.3 药物治疗
  • 试验一 副猪嗜血杆菌的分离鉴定及相关特性研究
  •   1 材料和方法
  •     1.1 实验材料
  •       1.1.1 病料
  •       1.1.2 主要试剂
  •       1.1.3 培养基的配制
  •       1.1.4 实验仪器
  •       1.1.5 实验动物
  •       1.1.6 PCR引物设计
  •       1.1.7 微量生化发酵管
  •       1.1.8 药敏纸片
  •       1.1.9 卫星现象检查用菌种
  •     1.2 实验方法
  •       1.2.1 细菌的分离与纯化
  •       1.2.2 染色镜检
  •       1.2.3 PCR鉴定
  •       1.2.4 生化鉴定
  •       1.2.5 药物敏感性试验
  •       1.2.6 血清型分型
  •       1.2.7 分离株小鼠致病性试验
  •   2 结果
  •     2.1 细菌分离
  •     2.2 镜检
  •     2.3 种特异性PCR鉴定
  •     2.4 同源性比对结果
  •     2.5 生化鉴定
  •     2.6 药敏试验
  •     2.7 血清分型结果
  •     2.8 致病性试验
  •   3 小结
  •   4 讨论
  • 试验二 副猪嗜血杆菌分离株HZG-6 生长曲线的测定
  •   1 材料与方法
  •     1.1 材料
  •       1.1.1 菌株
  •       1.1.2 主要试剂
  •       1.1.3 主要培养基及其制备
  •     1.2 方法
  •       1.2.1 HZG-6 株菌液的制备
  •       1.2.2 生长曲线的测定
  •   2 结果与分析
  •   3 讨论
  •   4 小结
  • 试验三 三价菌体灭活苗的制备及免疫保护力测定
  •   1 材料和方法
  •     1.1 实验材料
  •       1.1.1 试验菌株和试验动物
  •       1.1.2 主要试剂
  •       1.1.3 培养基
  •     1.2 方法
  •       1.2.1 半数致死量(LD50)的测定
  •       1.2.2 抗原制备
  •       1.2.3 物理性状检验
  •       1.2.4 疫苗安全性检测
  •       1.2.5 免疫保护试验
  •       1.2.6 血清抗体的检测
  •   2 结果
  •     2.1 半数致死量(LD50)的测定
  •     2.2 疫苗制备
  •     2.3 黏度测定
  •     2.4 疫苗稳定性检验
  •     2.5 安全性检测
  •     2.6 免疫保护试验
  •     2.7 抗体水平检测
  •   3 小结
  •   4 讨论
  • 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 作者简历
  • 导师评阅表
  • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 章莲

    导师: 张莉,刘宏杰

    关键词: 副猪嗜血杆菌,鉴定,生长曲线,菌体灭活苗

    来源: 石河子大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 石河子大学

    分类号: S852.61

    总页数: 56

    文件大小: 2007K

    下载量: 205

    相关论文文献

    • [1].基于利用抗生素治疗副猪嗜血杆菌病存在的利弊分析[J]. 畜牧业环境 2020(08)
    • [2].副猪嗜血杆菌与猪丹毒混合感染诊治[J]. 畜牧兽医科学(电子版) 2020(12)
    • [3].商品化副猪嗜血杆菌疫苗分类及特点[J]. 养猪 2018(06)
    • [4].副猪嗜血杆菌河南流行株的分离鉴定及分型[J]. 河南农业科学 2018(11)
    • [5].副猪嗜血杆菌的中西医治疗[J]. 畜禽业 2018(02)
    • [6].副猪嗜血杆菌的药敏试验[J]. 山东畜牧兽医 2018(01)
    • [7].副猪嗜血杆菌病的综合防治[J]. 兽医导刊 2018(11)
    • [8].4型副猪嗜血杆菌的分离鉴定与生物学特性研究[J]. 黑龙江畜牧兽医 2018(13)
    • [9].一例由蓝耳病毒和副猪嗜血杆菌混合感染的诊断与防控[J]. 农业工程技术 2017(08)
    • [10].副猪嗜血杆菌的危害性与防控措施[J]. 山东畜牧兽医 2017(09)
    • [11].广东省副猪嗜血杆菌的流行病学调查[J]. 中国动物传染病学报 2017(05)
    • [12].副猪嗜血杆菌研究现状及综合防控[J]. 北方牧业 2020(01)
    • [13].副猪嗜血杆菌自然转化方法的建立及条件优化[J]. 农业生物技术学报 2017(12)
    • [14].副猪嗜血杆菌和Ⅱ型链球菌混合感染的诊断报告[J]. 广西畜牧兽医 2018(01)
    • [15].副猪嗜血杆菌感染的诊断与治疗[J]. 中国畜牧兽医文摘 2018(06)
    • [16].副猪嗜血杆菌的分离鉴定及三价灭活疫苗免疫效力分析[J]. 中国兽医杂志 2018(07)
    • [17].浅谈副猪嗜血杆菌的诊治[J]. 江西畜牧兽医杂志 2016(06)
    • [18].副猪嗜血杆菌病的流行病学调查[J]. 上海畜牧兽医通讯 2017(01)
    • [19].一株副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 当代畜禽养殖业 2017(06)
    • [20].重庆渝东部分地区副猪嗜血杆菌血清学调查与分析[J]. 黑龙江畜牧兽医 2016(02)
    • [21].副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 黑龙江畜牧兽医 2016(10)
    • [22].副猪嗜血杆菌生长曲线的测定[J]. 黑龙江畜牧兽医 2016(14)
    • [23].牛津杯药敏试验筛选副猪嗜血杆菌敏感药物的研究[J]. 黑龙江畜牧兽医 2016(14)
    • [24].大蒜素对副猪嗜血杆菌抑制作用机理的研究[J]. 江西农业大学学报 2014(03)
    • [25].副猪嗜血杆菌发病现状与临床诊治[J]. 山东畜牧兽医 2014(06)
    • [26].副猪嗜血杆菌的危害与防控措施[J]. 山东畜牧兽医 2014(08)
    • [27].副猪嗜血杆菌分子生物学研究进展[J]. 黑龙江畜牧兽医 2013(05)
    • [28].副猪嗜血杆菌病原分离应注意的问题[J]. 畜禽业 2013(07)
    • [29].副猪嗜血杆菌培养条件优化[J]. 现代畜牧兽医 2013(07)
    • [30].副猪嗜血杆菌的流行病学和分型[J]. 国外畜牧学(猪与禽) 2012(02)

    标签:;  ;  ;  ;  

    副猪嗜血杆菌的分离鉴定及菌体灭活苗的研制
    下载Doc文档

    猜你喜欢