蜱传反刍动物艾立希体巢式PCR检测方法的建立及应用

蜱传反刍动物艾立希体巢式PCR检测方法的建立及应用

论文摘要

为建立一种快速、敏感检测反刍动物艾立希体的方法,本研究根据GenBank中登录的反刍动物艾立希体pCS20基因保守区设计2对特异性引物,经各反应条件的优化,建立了反刍动物艾立希体巢式PCR检测方法。结果显示,该方法可以特异性检测反刍动物艾立希体DNA,而对牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、牛环形泰勒虫和弓形虫的检测均为阴性,具有良好的特异性;该方法灵敏度可达1.04×101拷贝/μL,是反刍动物艾立希体实时荧光PCR检测试剂盒的10倍,是常规PCR的1 000倍。对50只血蜱、花蜱和微小牛蜱DNA进行检测,巢式PCR、反刍动物艾立希体实时荧光PCR检测试剂盒和常规PCR的阳性检出率分别为26.0%,14.0%和0.0%。本试验建立的巢式PCR检测方法适用于反刍动物艾立希体病的早期诊断和分子流行病学调查,为蜱传反刍动物艾立希体病的防控提供技术支持。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 病原核酸及临床样品
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 引物设计与合成
  •   1.4 巢式PCR退火温度的优化
  •   1.5 PCR产物的分析
  •   1.6 特异性试验
  •   1.7 敏感性试验
  •   1.8 临床样品检测
  • 2 结果
  •   2.1 最佳退火温度的确定
  •   2.2 PCR产物分析
  •   2.3 特异性试验
  •   2.4 敏感性试验
  •   2.5 临床样品检测
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王素华,袁淑辉,吴绍强,吕继洲,帅江冰,张晓峰,赵治国

    关键词: 反刍动物艾立希体,基因,巢式,蜱传

    来源: 中国兽医学报 2019年02期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 温州海关,中国检验检疫科学研究院动物检疫所,杭州海关,呼和浩特海关

    基金: 浙江省公益技术应用农村农业资助项目(LGN19C180001),浙江省重大科技专项重点农业资助项目(2015C02044),国家质检总局科技计划资助项目(2016IK277)

    分类号: S852.6

    DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.02.14

    页码: 271-275

    总页数: 5

    文件大小: 845K

    下载量: 90

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